Kromatografi dan Aplikasinya pada Bidang Lain

Kata Kunci: kromatografi Ditulis oleh Muhammad Amin pada 24-06-2009 a. Pada Bidang Bioteknologi Dalam bidang bioteknologi, kromatografi mempunyai peranan yang sangat besar. Misalnya dalam penentuan, baik kualitatif maupun kuantitatif, senyawa dalam protein. Protein sering dipilih karena ia sering menjadi obyek molekul yang harus di-purified (dimurnikan) terutama untuk keperluan dalam bio-farmasi. Kromatografi juga bisa diaplikasikan dalam pemisahan molekul-molekul penting seperti asam nukleat, karbohidrat, lemak, vitamin dan molekul penting lainnya. Dengan data-data yang didapatkan dengan menggunakan kromatografi ini, selanjutnya sebuah produk obat-obatan dapat ditingkatkan mutunya, dapat dipakai sebagai data awal untuk menghasilkan jenis obat baru, atau dapat pula dipakai untuk mengontrol kondisi obat tersebut sehingga bisa bertahan lama. b. Pada Bidang Klinik Dalam bidang clinical (klinik), teknik ini sangat bermanfaat terutama dalam menginvestigasi fluida badan seperti air liur. Dari air liur seorang pasien, dokter dapat mengetahui jenis penyakit yang sedang diderita pasien tersebut. Seorang perokok dapat diketahui apakah dia termasuk perokok berat atau ringan hanya dengan mengetahui konsentrasi CN- (sianida) dari sampel air liurnya. Demikian halnya air kencing, darah dan fluida badan lainnya bisa memberikan data yang akurat dan cepat sehingga keberadaan suatu penyakit dalam tubuh manusia dapat dideteksi secara dini dan cepat. Sekarang ini, deteksi senyawa oksalat dalam air kencing menjadi sangat penting terutama bagi pasien kidney stones (batu ginjal). Banyak metode analisis seperti spektrofotometri, manganometri, atau lainnya, akan tetapi semuanya membutuhkan kerja ekstra dan waktu yang cukup lama untuk mendapatkan hasil analisis dibandingkan dengan teknik kromatografi. Dengan alasan-alasan inilah, kromatografi kemudian menjadi pilihan utama dalam membantu mengatasi permasalahan dalam dunia bioteknologi, farmasi, klinik dan kehidupan manusia secara umum. c. Pada Bidang Forensik Aplikasi kromatografi pada bidang forensik pun sangat membantu, terutama dilihat dari segi keamanan. Masih lekat dalam ingatan kita, sebuah peristiwa Black September Tragedy mengguncang Amerika pada tanggal 11 September 2001 yang ditandai dengan runtuhnya dua gedung kesayangan pemerintah Amerika Serikat. Demikian halnya di Indonesia yang marak dengan aksi peledakan bom yang terjadi di mana-mana. Perhatian

tiosianat. Lebih jauh lagi. Hal ini didorong karena dengan semakin cepat diketahuinya bahan-bahan dasar apa saja bahan peledak. nitrit. Pada dasarnya setiap bahan peledak. baik bahan peledak yang kerkekuatan tinggi maupun rendah. memberikan peluang bahan peledak tersebut berubah manjadi zat lain yang lebih stabil yang diikuti dengan tekanan yang tinggi. Bahan-bahan anorganik seperti klorat. akan memberikan harapan karena tidak semua material dari bahan peledak tersebut ikut meledak pada saat terjadi ledakan. Ada banyak bahan kimia yang biasa digunakan dalam bahan peledak. sulfate dan tiosianat. Bisa dikatakan bahwa analisis organic ion (ion organik) dan inorganic ion (ion anorganik) memainkan peranan yang sangat penting pada saat investigasi lokasi ledakan bom berlangsung. klorat.6trinitrotoluene (TNT). Pada gambar 1A di bawah ini adalah kromatogram dari analisis menggunakan metode kromatografi ion pada sampel standar yang telah diketahui ion-ionnya serta konsentrasi yang terkandung di dalamnya dan gambar 1B adalah kromatogram dari ekstrak serpihan sebuah ledakan bom. klorida. gesekan. dan perklorat adalah bahan-bahan kimia yang biasa digunakan sebagai oksidator untuk low explosive (bahan peledak berkekuatan rendah). Kini kromatrografi menjadi hal yang sangat penting dalam menganalisis berbagai bahanbahan kimia yang terkandung dalam bahan peledak. Dengan terjadinya hal-hal seperti ini. baru akan meledak jika terjadi benturan. yang bisa menghasilkan ledakan dahsyat atau bahkan munculnya percikan api.4. sulfate. . siklonit (RDX). nitrat. efek negatifnya terhadap lingkungan juga bisa segera diketahui. beberapa diantaranya adalah 2. maka akan makin mempercepat diambilnya tindakan oleh bagian keamanan untuk mengatasi daerah-daerah yang terkena ledakan serta antisipasi meluasnya efek radiasi yang kemungkinan akan mengena tubuh manusia di sekitar lokasi ledakan. getaran atau adanya perubahan suhu yang meningkat. setelah pengeboman berlangsung. nitrat. nitrit. klorida. tetril.dunia pun akhirnya mulai beralih dengan adanya peristiwa-peristiwa pengeboman/peledakan tersebut ke bahaya explosive (bahan peledak) dengan peningkatan yang cukup tajam. pentaeritritol tetranitrat (PETN) dan tetritol serta beberapa anion lain seperti perklorat. Pendeteksian ion-ion anorganik misalnya.

Gambar 1A: Sampel standar yang diketahui anion dan konsentrasinya : (1) Cl-. d.dan (7) ClO4- Gambar 1 B: Kromatogram dari ekstrak serpihan sebuah ledakan : (1) Cl-. Dalam bidang lingkungan Dalam masalah lingkungan. berarti permasalahan pun semakin “maju”. Seiring dengan hal itu. permasalahan lingkungan pun semakin meningkat. Japan. (4) NO3-. Menurut survei National Institute for Environmental Studies. Gambar 1 A dan 1B. (3) ClO3-. teknik . sebagai konsekuensi majunya peradaban manusia. Salah satu permasalahan serius yang dihadapi oleh negara-negara berkembang dan utamanya negara maju adalah persoalan global warming (pemanasan global). (5) SO4-2. Perbandingan kromatogram dari sebuah analisis menggunakan teknik kromatografi ion. Disinilah. tahun 2006 lalu. bahwa masyarakat di Jepang memperkirakan tingkat pemanasan global merupakan masalah lingkungan paling serius dan tingkatannya hampir 7 kali lipat dari satu dekade yang lalu saat polling kali pertama dilakukan pada tahun 19972). (3) SO4-2 dan (4) puncak yang tidak diketahui 1). (2) ClO3-. (6) SCN. (2) NO2-.

Terbentuknya hujan asam disebabkan gas sulfur oxide. Pada dasarnya permasalahan lingkungan bisa dibagi ke dalam 3 bagian : water hygiene. Apakah mengandung logam-logam berbahaya atau tidak. Kontrol kondisi air hujan ini menjadi penting karena beberapa efek yang fatal yang mungkin bisa terjadi. Demikian pula keasaman pada tanah dapat meningkat dan merembes ke air permukaan tanah yaitu sumber air minum sehari-hari. air danau.(ion sulfat) dan nitrogen trioxide ion. kualitas air (misal : air ledeng. Sebagai contoh.(nitrogen trioksida) yang terdapat dalam air hujan tersebut. dan beberapa negara lainnya. Antisipasi dini dapat dilakukan dengan mengetahui secara dini kandungan sulfate ion.kromatografi mengambil peran paling penting dalam environmental analysis (analisis lingkungan) ini. Reaksi-rekasi ini mengambil waktu berjam-jam atau bahkan berhari-hari di udara hingga akhirnya jatuh ke bumi dalam bentuk hujan asam. soil hygiene dan air hygiene. demikian pula nitrogen oxide NOx dapat membentuk asam nitrat (HNO3) di udara. Eropa. SOx dengan uap air dan membentuk asam sulfat (H2SO4). bendungan yang pada akhirnya mungin dapat menyebabkan kematian pada kehidupan air. air permukaan) dapat diketahui salah satunya dengan mengetahui jenis anion dan kation yang terkandung dalam sampel air tersebut sekaligus jumlahnya. Amerika. di antaranya jatuhnya hujan asam dapat meningkatkan keasaman danau. NO3. sungai. Kanada. Di beberapa negara maju seperti Jepang. air sungai. Gambar 2 mengilustrasikan sebuah kromatogram dari analisis air hujan yang diambil dari salah satu kota besar di Jepang dalam rangka memonitor kandungan anion sebagai . SO42. Demikian halnya pada daerah yang terkena acid rain (hujan asam). monitoring udara dan air hujan menjadi sangat penting tidak hanya untuk memperkirakan efek dari polusi itu tapi yang lebih penting lagi adalah memonitor progress (perkembangan) control polusi dari global ecology (ekologi global).

petrokimia. dalam tulisan ini penulis hanya menampilkan beberapa contoh peran serta kromatografi dalam memudahkan dan mempercepat perolehan “target data” dalam beberapa bidang yang tersebut di atas. Referensi 1.. Beberapa aplikasi tersebut misalnya dalam industri kertas. pertanian.mainichi-msn. http://www.dan (3) 0.2 mM NO3. Gambar 2.jp/national/news/20070109p2a00m0na026000c.co.http://www. Aplikasi pada bidang yang lain Sebenarnya masih sangat banyak aplikasi kromatografi dalam bidang-bidang keilmuan lainnya..fbi. (2) 0. Namun karena keterbatasan ruang.html 3).http://mdn.http://www.gov/hq/lab/fsc/backissu/april2001/mmiller. kedokteran dan lain-lain.tosohbioscience. Sampel B menunjukkan kromatogram untuk sampel air hujan e. Sampel A menunjukkan kromatogram untuk standar sampel yang diketahui ion dan konsentrasinya : (1) 0.com/biohome. Pemonitoran kandungan anion dalam sampel air hujan.6 mM Cl.html 4).penyebab utama terjadinya hujan asam.htm 2).com/ . proses logam.2 mM SO42.metrohm-peak. pertambangan.

html 6). Prinsip dari kedua aplikasi tersebut adalah dengan .http://www. dan gas-liquid chromatography (kromatografi dengan fase diam berwujud padat dan fase gerak berwujud gas) (Harvey 2000). dan kromatografi permeasi atau filtrasi (kromatografi berdasarkan perbedaan bobot molekul) (Skoog et al 2002). kromatografi pertukaran ion (kromatografi yang dapat memisahkan senyawa dengan afinitas ion yang berbeda dengan resin penukar ion). gas-solid chromatography (kromatografi dengan fase diam berwujud padat dan fase gerak berwujud gas). kromatografi partisi (kromatografi dengan partisi terjadi antara fase gerak dan fase diam). kromatografi dibedakan menjadi kromatografi planar (kromatografi dengan fase diam terletak pada permukaan datar) yang meliputi kromatografi kertas dan kromatografi lapis tipis serta kromatografi kolom (kromatografi dengan fase diam tertahan pada sebuah kolom) yang meliputi kromatografi manual.dionex. Berdasarkan fase gerak dan fase diam yang digunakan. dan kromatografi gas (Harvey 2000).kr/english/e_equip/e_equ_a00.5). Teknik pemisahan ini memanfaatkan interaksi komponen dengan fase diam dan fase gerak serta sifat fisik dan sifat kimia komponen.re.krict. high performance liquid chromatography. Berdasarkan interaksi komponen dengan fase diam dan fase gerak. liquidliquid chromatography (kromatografi dengan fase diam berwujud cair dan fase gerak berwujud cair). yaitu fase diam (padat atau cair) dan fase gerak (cair atau gas) (Patnaik 2004). Percobaan ini hanya melakukan aplikasi kromatografi kertas dan kromatografi lapis tipis.http://www1. Berdasarkan bentuk ruang penyangganya. kromatografi dibedakan menjadi kromatografi adsorpsi (kromatografi dengan teknik penyerapan komponen oleh adsorben tertentu).com/en-us/index.php KROMATOGRAFI KERTAS DAN KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS Pendahuluan Kromatografi adalah teknik pemisahan campuran didasarkan atas perbedaan distribusi dari komponen-komponen campuran tersebut diantara dua fase. kromatografi dibedakan menjadi liquid-solid chromatography (kromatografi dengan fase diam berwujud padat dan fase gerak berwujud cair).

Ditambhan 6.7 ml air dan dikocok. dan digerus selama 10 detik. ditutup. corong. Campuran dibiarkan selama 10 menit. Pelarut dibiarkan . gelas ukur 50 ml. ditambahkan sedikit pasir kuarsa. lalu ditutup rapat. kertas dimasukkan dalam pelarut jenuh dan dibiarkan bergerak menuju garis finish. Pada percobaan kali ini. Daun diiris halus. Sedikit ekstrak daun diteteskan dengan pipa kapiler di atas lapisan TLC pada jarak 1 cm dari tepi kaca bagian bawah. lempeng porselin. kertas saring. dimasukkan dalam mortar. Alat dan Bahan Alat-alat yang dipakai adalah botol eluen. Tujuan Percobaan Percobaan ini bertujuan melatih penggunaan analisis kualitatif dengan metode kromatografi lapis tipis (Thin Layer Chromatography) pada klorofil daun dan menentukan susunan logam pada uang logam Rp 100 berwarna kuning dan putih. Larutan tersebut siap untuk dianalisis dengan metode kromatografi. pipet kapiler. CuSO4 0. NiSO4. dan tabung reaksi.1 M. Na2SO3 kering. Larutan yang telah dikeringkan dituang ke dalam pinggan petri. dan dikocok selama 10 detik. Selanjutnya pembuatan kromatogram dilakukan dengan eluen (campuran aseton dan PE (1: 9)).meneteskan sampel pada kertas di garis startnya berulang-ulang. Kromatografi lapis tipis menggunakan lempeng tipis/ plastik yang dilapisi adsorben sebagai penyangga. botol semprot. HCl pekat. pembuatan lapisan TLC tidak dilakukan karena lapisan TLC sudah tersedia. Larutan yang telah pekat dituang ke dalam tabung reaksi. Kromatografi kertas menggunakan kertas sebagai penyangga (Rouessac 2007). Prosedur Percobaan Percobaan kromatografi lapis tipis klorofil daun diawali dengan pembuatan ekstrak daun. Lapisan yang berwarna hijau dipipet ke dalam tabung reaksi dan dikeringkan dengan Na2SO4 anhidrat selama 15 menit. dikocok. diuapkan sebentar supaya lebih pekat. Petroleum eter 3 ml ditambahkan. dan uang logam Rp 100 warna kuning dan putih. corong pisah.. klip plastik. kertas kromatografi. Bahan-bahan yang digunakan adalah aseton. petroleum eter. kaca obyek. Setelah kering. Daun dipindahkan ke dalam tabung reaksi bertutup dan ditambahkan 4 ml aseton. cawan petri. diambil sebanyak 1 gram. NH4OH. dan dipisahkan dengan sentrifus.

Pemisahan susunan logam pada uang logam diawali dengan uang logam dicuci dengan sabun dan disikat. Kertas diangkat dan dikeringkan. spot HCl pekat. Perbandingan volume eluen aseton dan PE yang beragam digunakan untuk menentukan . Setelah kering. Komponen yang nampak dihitung nilai Rfnya dengan rumus . Dari tetesan ini. lapisan TLC dimasukkan dalam alat pemancar ultraviolet untuk membuat komponen pada lapisan TLC menjadi jelas. dilakukan analisis terhadap klorofil atau pigmen hijau yang ada pada daun dengan metode kromatografi lapis tipis atau thin layer chromatography (TLC). Selain itu. Setelah disentrifusa. Daun yang telah halus ditambahkan aseton yang berfungsi untuk mengekstrak klorofil daun karena aseton bersifat nonpolar dan klorofil juga bersifat non polar sehingga dapat terekstrak. juga dilakukan analisis terhadap komponen logam yang terkandung dalam uang logam 100 rupiah berwarna kuning dan berwarna putih dengan metode kromatografi kertas. spot CuSO4. spot NiSO4. kertas disemprot dengan NH4OH pekat. Pelarut dibiarkan naik sampai mendekati garis front. ekstrak ditambahkan dengan Na2SO4 anhidrat untuk mengikat air yang masih terkandung di dalam ekstrak sehingga ekstrak klorofil murni mudah diambil. dibuat spot uang logam. Kertas dimasukkan ke dalam botol dengan garis start di bagian bawah. Uang logam tersebut diberi setetes HCl pekat dan ditunggu beberapa menit. Dicatat warna dan jarak spotnya dari garis start. Pembahasan Pada percobaan ini.mengering. Dihitung nilai Rf masing-masing spot. Volume eluen aseton dan PE digunakan dalam perbandingan yang beragam. Setelah cairan eluen naik sampai hampir di ujung lapisan TLC. daun diiris halus lalu digerus dengan sedikit pasir kuarsa agar mempercepat halusnya daun yang digerus. jarak start-front. dan jarak dari tepi kertas bawah pada kertas kromatografi. maka lapisan TLC dikeringkan di udara. Untuk menampakkan warna spot. kemudian dibilas dengan akuades. Komponen warna yang terpisah dicatat. Fase diam pada percobaan ini adalah lapisan pelarut yang teradsorbsi pada permukaan adsorben berupa lapisan tipis (thin layer) dan fase geraknya adalah bagian dari pelarut yang berfungsi menggerakkan eluen berupa aseton dan PE. Lapisan TLC dimasukkan ke dalam botol yang berisi eluen dengan bagian yang ditetesi berada di bawah. Kertas digulung dengan klip plastik dan dimasukkan ke dalam toples yang berisi pelarut. Pada percobaan TLC.

spot dari CuSO4 tidak bermigrasi secara berarti dan spot dari HCl pekat tidak terlihat. Selanjutnya spot dari tetesan tersebut dirunning bersama dengan spot HCl pekat. Pendeteksian letak spot lebih mudah dilakukan dengan menggunakan penyinaran sinar ultra violet. uang logam warna kuning dan putih dicuci dan disikat. spot uang logam warna kuning memiliki Rf yang sama dengan spot dari CuSO4 karena uang logam warna kuning tersebut mengandung tembaga (Nurcahyo 2007).9620. NiSO4. Pada percobaan kromatografi kertas. dan amoniak 2M (untuk uang logam kuning).1068 dan spot dari NiSO4 memiliki Rf sebesar 0. Fase diam pada percobaan ini adalah lapisan pelarut yang teradsorbsi pada permukaan kertas berupa kertas kromatografi dan fase geraknya adalah bagian dari pelarut yang berfungsi menggerakkan eluen berupa campuran n-butanol. Namun. dihasilkan satu spot dengan Rf sebesar 0. yaitu 366 nm dan 254 nm. Terdapat dua penjang gelombang yang digunakan.perbandingan volume eluen yang paling baik untuk kromatografi lapis tipis pada klorofil. dan air (untuk uang logam putih) dan campuran n-butanol. Nilai Rf tersebut menunjukkan bahwa pelarut terbaik digunakan pada perbandingan 5:5 karena jumlah spot pemisahan yang banyak dan nilai Rf yang mendekati satu. kromatografi kertas dilakukan secara ascending dimana pelarut yang terdapat di bawah akan bergerak ke atas pada kertas yang tercelup didalamnya. Panjang gelombang efektif yang digunakan kemudian adalah 366 nm karena spot yang terlihat lebih banyak dan jelas.9390. etanol. Pada perbandingan eluen aseton:PE = 9:1. Penjenuhan dengan uap pelarut bertujuan untuk mempercepat terjadinya elusi atau pergerakan komponen-komponen sampel pada media kertas kromatografi. Pada uang logam warna putih. asam asetat glasial. Pada perbandingan eluen aseton:PE = 1:9. Berdasarkan literatur. dan CuSO4. Dan pada perbandingan eluen aseton:PE = 5:5. kemudian ditambahkan tetesan HCl pekat sebagai pelarut pemisah komponen uang logam.1456 dan spot dari CuSO4 . Hal ini berarti jarak spot dari garis start hampir sama dengan jarak batas eluen dari garis start. spot dari uang logam tersebut memiliki Rf sebesar 0.8987 dan 0. tidak terbentuk spot dari uang logam tersebut dan HCl pekat. sedangkan spot dari NiSO4 menunjukkan Rf sebesar 0.1852 dan 0.3704. dihasilkan dua spot dengan Rf masing-masing sebesar 0. dihasilkan dua spot dengan Rf masing-masing sebesar 0. Pada percobaan ini.1792. Pada uang logam warna kuning.

2007. Canada: Thomson Learning. eluen yang digunakan kurang jenuh. Fundamentals of Analytical Chemistry. Simpulan Kromatografi lapis tipis dapat digunakan untuk pemisahan komponen klorofil. 2000. Dean’s Analytical Chemistry Handbook. dan uang yang digunakan sudah terkontaminasi zat lainnya. Modern Analytical Chemistry. Daftar Pustaka Harvey D. Nurcahyo Priyadi. . Kromatografi kertas digunakan untuk menentukan komponen yang terkandung dalam uang logam warna kuning dan putih. Uang logam warna kuning seharusnya mengandung tembaga dan uang logam warna putih seharusnya mengandung alumunium. Nilai Mata Uang Logam. 2002. Second Edition. New York: McGraw-Hill Comp. 2007. http://priyadi. Berdasarkan literatur. spot uang logam warna putih tidak memiliki Rf yang sama dengan spot dari CuSO4 dan NiSO4 karena uang logam warna putih tersebut mengandung alumunium (Nurcahyo 2007).net/archives/2007/04/27/nilaimata-uang-logam/. Ltd. Annick Rouessac. (13 Mei 2010) Patnaik Pradyot. 2004. Tidak terbentuknya spot dari uang logam warna putih disebabkan oleh eluen yang digunakan kurang jenuh. Data percobaan menunjukkan bahwa perbandingan pelarut aseton:PE yang digunakan adalah 5:5 dengan Rf tertinggi sebesar 0.menunjukkan Rf sebesar 0. Second Edition. West Sussex: John Wiley & Sons. Panjang gelombang ultra violet yang paling baik digunakan untuk mendeteksi keberadaan spot komponen klorofil adalah 366 nm. Chemical Analysis: Modern Instrumentation Methods and Techniques. Skoog Douglas et al. kesulitan dalam pengukuran jarak saat penyinaran dengan ultra violet.0500. Rouessac Francis. New York: McGraw-Hill Comp. Eight Edition. antara lain kertas kromatografi tidak bersih dan dipegang dengan tangan. Perbedaan antara hasil percobaan dengan literatur menunjukkan masih terdapat kesalahan yang dilakukan dalam percobaan ini.9620.