P. 1
Spectrophotometer

Spectrophotometer

|Views: 70|Likes:
Published by Mano Cempaka

More info:

Published by: Mano Cempaka on Jul 15, 2013
Copyright:Attribution Non-commercial

Availability:

Read on Scribd mobile: iPhone, iPad and Android.
download as DOCX, PDF, TXT or read online from Scribd
See more
See less

11/23/2015

pdf

text

original

BAB I.

PENDAHULUAN

Suatu alat yang mengukur radiasi elektromagnetik mempunyai beberapa konsep dan komponen. Radiasi elektromagnetik digambarkan sebagai suatu photon dari energi, yang berjalan dalam bentuk gelombang (Bishop; et al, 1992). Di dalam laboratorium klinik, diperlukan kebutuhan terus menerus tentang teknik pengukuran secara kuantitatif (Turgeon, 2007). Photometer yaitu suatu alat yang digunakan untuk mengukur intensitas cahaya tanpa mempertimbangkan suatu panjang gelombang. Spectrophotometer yaitu suatu alat yang digunakan untuk mengukur intensitas cahaya dengan mempergunakan panjang gelombang tertentu (Bishop; et al, 1992). Spectrophotometer menggunakan suatu prinsip jumlah cahaya yang absorbsi oleh analit pada panjang gelombang tertentu. Untuk mengetahui bagaimana suatu alat spectrophotometer dibuat maka diperlukan pengetahuan tentang sinar dan teori panjang gelombang sinar (Ward & Harris, 1994).

1

Panjang gelombang (λ) adalah jarak dari puncak dari satu gelombang dengan gelombang yang lain.ucdavis. Setelah penemuan Newton. dan merupakan sinar yang tidak dapat dilihat oleh mata manusia. 1994).edu/@api/deki/pages/345/pdf) Sinar dengan panjang gelombang 380 nm memiliki warna ungu. 1994).Sedangkan sinar dengan panjang gelombang kurang dari 380 nm disebut dengan ultraviolet (UV). Panjang gelombang diukur dengan satuan nanometer (nm). 2 . Gambar 1 : panjang gelombang (λ) dari gelombang elektromagnetik. White light adalah cahaya yang tidak dapat dilihat dan hanya dapat dilihat apabila cahaya tersebut dipisahkan berdasarkan spektum-spektrumnya (Ward & Harris.Amplitudo adalah tinggi puncak dari suatu gelombang (Ward & Harris.BAB II. (sumber : http://chemwiki. yang dapat dilihat oleh mata manusia. SINAR Newton menemukan bahwa white light atau daylight merupakan suatu bentuk kumpulan dari berbagai panjang gelombang dari suatu cahaya tampak (visible light).Sinar dengan panjang gelombang lebih dari 720 nm disebut dengan sinar infra merah (infra red). ditemukan juga bahwa cahaya berjalan dalam bentuk gelombang serta panjang gelombang dari sinar tertentu.

hijau.Pada panjang gelombang ini dapat dilihat warna ungu.4shared. kuning.html) 3 . Gambar 2a : Spektrum visible dengan panjang gelombang. Gambar 2b : Hubungan energi dengan panjang gelombang. jingga dan merah. biru. (sumber : http://www.Mata manusia hanya dapat melihat sinar atau spektrum cahaya dengan panjang gelombang 380 -720 nm.com/get/2mv5-WWl/SPECTROPHOTOMETER-I. nila.

maka hubungan langsung antara absorbansi dengan konsentrasi harus ditetapkan. Hukum ini berlaku hanya untuk sinar monokromatis dan untuk larutan yang sangat encer (Anonim. 1989) Adanya peningkatan konsentrasi pada suatu zat. Hukum ini dipakai sebagai dasar pada metoda photometry. 2006). 1989). untuk memberikan alat pada kondisi yang khusus (baik).A. maka larutan tersebut dikatakan telah mematuhi dari hukum Beer Lambert (Burtis. 2007). et al. maka akan meningkatkan jumlah warna yang akan dilihat. et al. 2006). dan juga menyatakan bahwa jarak lightpath pada cuvet atau tempat untuk menaruh larutan harus konstan atau tetap (Turgeon. Hukum Beer Lambert menyatakan bahwa. Sehingga akan didapatkan suatu perhitungan menurut hukum Beer Lambert yaitu Keterangan : A : absorbansi Ƹo : koefisien ekstrinsik molar (cm2/mol) c d : konsentrasi (mol/cm3) : tebal larutan (diameter dalam dari cuvet/lightpath) (Anonim. Konsentrasi suatu zat secara langsung berbanding lurus dengan jumlah sinar yang diabsorbsi (absorbance) dan berbanding terbalik dengan logaritma dari cahaya yang diteruskan atau ditransmisikan (transmittance %) (Burtis. 4 . Ketika keadaan ini terjadi. Ada hubungan yang sejajar antara kadar konsentrasi tertentu dengan absorbansi. Hukum Beer Lambert Pada percobaan.

Optical Density (OD) • • • Adalah satuan yang disukai dalam kimia klinik Mempunyai hubungan langsung atau berbanding lurus dengan kadar konsentrasi dari suatu larutan Jika terjadi peningkatan kadar konsentrasi pada suatu larutan. maka akan terjadi peningkatan absorbansi (OD) Konsentrasi dari larutan : 5 . (Burtis. 1989). ada 2 cara untuk mengekspresikan jumlah cahaya yang diabsorbsi oleh suatu larutan. 2006) Di dalam kimia klinik. Gambar 3 : Hubungan antara (a) percent transmittance. yaitu  Optical Density (OD)  Transmittance (% T) B. dengan (b) absorbansi terhadap konsentrasi suatu larutan. et al.Setiap pemeriksaan yang dilakukan harus memperhatikan apakah larutan tersebut terlalu pekat atau tidak. Larutan yang memberikan hasil absorbansi terlalu tinggi harus diencerkan (Anonim. dan didaerah mana proporsionalitas antara absorbansi dan konsentrasi masih berlaku.

Jika terjadi peningkatan pada konsentrasi larutan. Nilai ini berbanding terbalik dengan logaritma konsentrasi larutan dan dapat diperoleh dari perhitungan dibawah ini (Burtis. et al.ucdavis. Gambar 4 : Transmittance (sumber : http://chemwiki. Nilai ini memiliki hubungan lurus dengan kadar suatu larutan. Transmittance (%T) Transmittance mengekspresikan banyaknya jumlah cahaya yang melewati larutan berwarna yang dibandingkan dengan banyaknya sinar yang melewati larutan standar atau blank. et al. 2006). maka akan terjadi peningkatan absorbansi dan penurunan %T.C. dan diplotkan pada linear graph paper. D. (Turgeon.edu/@api/deki/pages/345/pdf) Keterangan : T : Transmittance It : Intensitas cahaya yang diteruskan oleh suatu zat IO : Intensitas cahaya awal (Burtis. 2007) Biasanya colorimeter mengukur transmittance dari pada absorbansi. Nilai ini dapat diperoleh dari perhitungan dibawah ini Nilai 2 adalah suatu nilai yang didapat dari logaritma 100 % T. Absorbance (A) Mengekspresikan jumlah sinar yang diabsorbsi oleh suatu larutan. 2006) 6 .

photo cell. galvanometer. Hal ini dengan menggunakan suatu filter. enterance slit. cuvet. Alat yang menggunakan filter disebut dengan filter photometer. Gambar 5a : Single beam spectrophotometer 7 . dan yang menggunakan prisma atau grating disebut dengan spectrophotometer. et al. SPECTROPHOTOMETER Alat-alat modern sekarang ini telah dapat mengisolasikan sinar dengan panjang gelombang yang sempit untuk pemeriksaan. monochromator.    Single beam spectrophotometer (gambar 4a) Double beam spectrophotometer (gambar 4b) Reflectance spectrophotometer (gambar 4c) Komponen dasar dari spectrophotometer termasuk : sumber cahaya. Spectrophotometer digolongkan menjadi (Burtis. exit slit. 2006). prisma ataupun grating.BAB III.

4shared.com/get/F1n9DNB0/Spectrophotometer.Gambar 5b : Double beam spectrophotometer Gambar 5c : Reflectance spectrophotometer.html) 8 . (sumber : http://www.

dan dianjurkan untuk digunakannya voltage regulator.A. antara lain a. yang dapat mendeteksi adanya perubahan konsentrasi pada larutan secara signifikan. 1. Kemampuan untuk membuat diameter cahaya dengan ukuran beberapa mikron pada jarak tertentu 2. Hydrogen (UV) d. et al. Kemampuan untuk menghasilkan sinar yang monokromatik 3. LASER digunakan sebagai sumber cahaya pada spectrophotometer. Low pressure mercury vapor c. Lampu pijar Sumber cahaya yang biasa digunakan untuk pemeriksaan pada spektrum visible adalah sebuah lampu tabung tungsten. Sumber cahaya yang digunakan harus kuat dan stabil. yang sangat bervariasi dari microsecond hingga picoseconds. Halogen-quartzTungsten b. yaitu lampu pijar dan Light Amplification by Simulated Emission of Radiation (LASER) (Burtis. Terdapat beberapa jenis lampu pijar yang dapat digunakan. High pressure mercury(UV) f. Deuterium(UV) e. Ada tiga ciri dari LASER. Light Amplification by Simulated Emission of Radiation (LASER) Merupakan suatu alat yang dapat digunakan untuk mengatur arah dari suatu energi atom yang membebaskan suatu photon. dan mempunyai kemampuan untuk menghasilkan intesitas cahaya dengan panjang gelombang yang sempit. Lampu tungsten mempunyai kemampuan pengukuran suatu cairan yang didilusikan secara sedang. antara lain : 1. Xenon arc(UV) 2. 9 . Sumber Cahaya Sumber cahaya yang digunakan dalam spectrophotometer. Mempunyai suatu light pulse. 2006).

et al.4shared. Ada tiga alat yang dapat digunakan untuk memisahkan white light menjadi sebuah spektrum tertentu. Gambar 6: Prisma dan grating.html) 10 . Penggunaan slit pada alat ini untuk meneruskan sinar menuju monochromator yang disebut enterance slit.B. 2005). antara lain filter. dan exit slit digunakan untuk meneruskan sinar dengan panjang gelombang tertentu menuju cuvet (Gunatillaka. et al. 2005). 2006).com/get/F1n9DNB0/Spectrophotometer. dan grating (Gunatillaka. prisma. Enterance Slit & Exit Slit Slit atau celah adalah suatu lubang kecil sebagai pemfokus cahaya ditujukan pada suatu bidang tertentu. dan celah keluar (exit slit). (sumber : http://www. sedangkan yang menggunakan prisma atau grating disebut dengan spectrophotometer (Burtis. Monochromator Merupakan suatu alat yang berfungsi untuk menyeleksi cahaya dengan panjang gelombang tertentu. monochromator. Alat yang menggunakan filter untuk menghasilkan cahaya yang monokromatik disebut dengan filter photometer. et al. C. Cahaya monokromatik dibentuk dari suatu celah masuk (enterance slit).

quartz untuk pemeriksaan pada spektrum UV dan plastik untuk pemeriksaan spektrum UV dan visible (Burtis. 1994). Kebanyakan cuvet yang dipergunakan secara rutin pada laboratorium klinik adalah cuvet yang memiliki lightpath 1 cm (Ward & Harris.D. et al. 2006). et al.com/get/F1n9DNB0/Spectrophotometer. Cuvet yang digunakan pada pemeriksaan yang menggunakan spektrum UV harus mendapatkan perlakuan yang khusus (Burtis.4shared. Cuvet dapat dibersihkan dengan merendam pada larutan detergen atau capuran dari HCL:air:etanol (1:3:4). 1994). Cuvet memiliki bermacam bentuk antara lain bulat. persegi. Cuvet Cuvet adalah suatu sumur yang berfungsi sebagai tempat untuk menaruh larutan yang akan diperiksa. Umumnya yang paling banyak digunakan adalah bentuk persegi (Ward & Harris. 2006).html) 11 . Syarat cuvet yang dipergunakan adalah cuvet yang telah terkalibrasi secara optik dan bersih. Gambar 7 : Cuvets (sumber : http://www. Bahan baku untuk pembuatan cuvet dapat berasal dari boro silicate glass yang dipergunakan untuk pemeriksaan pada spectrum visible. dan memungkinkan untuk dapat dilewati suatu sinar.

2007) dan berfungsi sebagai alat perubah energi cahaya yang ditransmisikan oleh larutan didalam cuvet menuju energi listrik serta harus tertutup dan terlindung dari cahaya (daylight). Cathode Logam sensitif cahaya Rangkaian dynode (10-15) Gambar 8 :Photomultiplier tube. ii.html) b. dan dilaporkan sebagi % transmittance atau absorbansi (Turgeon. Photo cell & Galvanometer Secara umum.com/get/F1n9DNB0/Spectrophotometer. Photomultiplier tube i. a. 2006). iii. Photo cell Photo cell adalah suatu alat yang sangat sensitif terhadap cahaya.E. Galvanometer Galvanometer adalah suatu alat yang bekerja sebagai penangkap elektron yang dilepaskan oleh photo cell serta mencatat jumlah arus yang diterimanya. 1. Photo cell dapat berupa (Burtis. (sumber : http://www. Photovoltaic cell 2. 12 . et al.4shared. alat pengukur pada spectrophotometer terdiri atas photoelectric cell (photo cell) dan galvanometer. 2007). dan menghasilkan suatu elektron yang berasal dari cahaya yang mengenainya (Turgeon. Photodiode c.

QUALITY CONTROL (QC) Quality control pada spectrophotometer meliputi pemeriksaan akurasi panjang gelombang.BAB IV. 1992. 2007). Penyebab tersering terjadinya fenomena penyimpangan sinar ini akibat ketidak sempurnaan alat optik yang digunakan. Penyimpangan sinar adalah suatu cahaya dengan panjang gelombang diluar panjang gelombang yang dikehendaki. Allen. 2007). 1992). Hal ini dapat dideteksi dengan cut-off filter (Bishop. et al. Fungsi dari quality control ini untuk memastikan/membuktikan bahwa alat spectrophotometer layak dipakai. Linearitas dapat dibuktikan dengan terbentuknya kurva yang menghasilkan garis lurus pada kurva kalibrasi dan neutral-density filter yang tersedia secara komersial (Turgeon. penyimpangan sinar. 13 . et al. dan linearitas. Akurasi panjang gelombang mempunyai arti bahwa panjang gelombang yang dikeluarkan dari monocromator adalah sama dengan panjang gelombang yang tertera pada alat. Hal ini dapat dilakukan menggunakan larutan standar dengan absorbansi maksimal pada panjang gelombang tertentu (Bishop.

SIMPULAN Photometer yaitu suatu alat yang digunakan untuk mengukur intensitas cahaya tanpa mempertimbangkan suatu panjang gelombang. et al. enterance slit. photo cell. et al. serta linearitas (Turgeon. konsentrasi suatu zat secara langsung berbanding lurus dengan jumlah sinar yang diabsorbsi (absorbance) dan berbanding terbalik dengan logaritma dari cahaya yang diteruskan atau ditransmisikan (transmittance %) (Burtis. Mata manusia hanya dapat melihat sinar atau spektrum cahaya dengan panjang gelombang 380 -720 nm. exit slit. Quality control untuk memastikan/membuktikan bahwa alat spectrophotometer dapat layak dipakai. et al. cuvet.BAB V. 1994). sedangkan yang menggunakan prisma atau grating disebut dengan spectrophotometer (Burtis. double beam spectrophotometer. 2006). penyimpangan sinar. Spectrophotometer memiliki komponen dasar seperti sumber cahaya. dan lebih dari 720 nm disebut sinar infra merah (infra red).Sinar dengan panjang gelombang kurang dari 380 nm disebut ultraviolet (UV). 2006). Hukum Beer Lambert menyatakan. Alat yang menggunakan filter untuk menghasilkan cahaya yang monokromatik disebut dengan filter photometer. et al. 14 . dan galvanometer (Burtis. 2006). 1992). Spectrophotometer digolongkan menjadi single beam spectrophotometer. serta reflectance spectrophotometer. Spectrophotometer yaitu suatu alat yang digunakan untuk mengukur intensitas cahaya dengan mempergunakan panjang gelombang tertentu (Bishop. monochromator.Sinar UV dan infra merah merupakan sinar yang tidak dapat dilihat oleh mata manusia (Ward & Harris. hal ini dapat dilakukan dengan memeriksa pada akurasi panjang gelombang. 2007).

1-25 Spectrophotometer http://www. Lippincott Company. L. 61-75 Gunatillaka. D. Analytical Techniques and Instrumentation. Naresuan University.html (download. Spectrophotometry. Clinical Chemistry : Principles. 2006. 28 September 2011) Ward. pp.4shared. 4th Edition. 27 September 2011) Turgeon.ucdavis. Correlations. Boehringer Mannheim. 1994. R. D. 37-63 15 . E. J. Stray Light : Measurement and Effect on Performance in UVVisible Spectrophotometry.. USA. E. M. D. Fotometri-Fotometer. 27 September 2011) Surapinit. Engelkirk. pp. E. Inc. 1st Edition. Indonesia. Jakarta. Hunais.4shared. 1992. M. 103-112 Burtis. Phayao http://www. China. 2009. Spectrophotometer. B. Sounders Company. L. Linne & Ringsrud’s Clinical Laboratory Science : The Basics and Routine Techniques.pdf (download. Harris. M. pp.W.com/get/2mv5-WWl/SPECTROPHOTOMETERI. pp. K. USA. and Selection. K. Colombo.. Guidelines for Maintenance of Equipment in A Clinical Chemistry Laboratory. S. M. Basic and New Techniques in The Clinical Laboratory. M.perkinelmer. Department of Medical Technology. J.. 129-139 Ultraviolet/Visible Light Absorption Spectrophotometry in Clinical Chemistry http://www. Procedures. WHO. 2005. Department of Biochemistry. P. an affiliate of Elsevier Inc. 1-2 Anonim. 2007. pp. School of Allied Health Science. 2007. Fody. B. W. 27 September 2011) Spectrophotometry http://chemwiki.edu/@api/deki/pages/345/pdf (download. L. Thermo Fisher Scientific. 1-18 Bishop. Mosby Elsevier. 6th Edition. TIETZ Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics. Medical Research Institute. M. Clinical Laboratory Instrumentation and Automation : Principles. Elsevier Saunders. Silva. USA. E. A. Bruns. pp. C.com/CMSResources/Images/4474382ATL_UVVisInClinicalChemistry. D. pp. Optical Thechniques. 1989.html (download.DAFTAR PUSTAKA Allen. 2nd Edition. USA. M. M. Ashwood.com/get/F1n9DNB0/Spectrophotometer. Aplications. Inc.

L.Calibration standards for spectrophotometers http://www.php?id=23252 (download.com/html/seiten/output_adb_file.John Wiley & Sons Ltd.Ultraviolet/Visible Light Absorption Spectrophotometry in Clinical Chemistry. 27 September 2011) Performance of UV-Vis spectrophotometers http://www. UK. 28 September 2011) Upstone. Analytical Chemistry.ca/images/Performance_UV_Vis. Chichester.hellmaanalytics. 1-14 16 .cvg.pdf (download. S. 2000.

You're Reading a Free Preview

Download
scribd
/*********** DO NOT ALTER ANYTHING BELOW THIS LINE ! ************/ var s_code=s.t();if(s_code)document.write(s_code)//-->