Spectrophotometer

BAB I.

PENDAHULUAN

Suatu alat yang mengukur radiasi elektromagnetik mempunyai beberapa konsep dan komponen. Radiasi elektromagnetik digambarkan sebagai suatu photon dari energi, yang berjalan dalam bentuk gelombang (Bishop; et al, 1992). Di dalam laboratorium klinik, diperlukan kebutuhan terus menerus tentang teknik pengukuran secara kuantitatif (Turgeon, 2007). Photometer yaitu suatu alat yang digunakan untuk mengukur intensitas cahaya tanpa mempertimbangkan suatu panjang gelombang. Spectrophotometer yaitu suatu alat yang digunakan untuk mengukur intensitas cahaya dengan mempergunakan panjang gelombang tertentu (Bishop; et al, 1992). Spectrophotometer menggunakan suatu prinsip jumlah cahaya yang absorbsi oleh analit pada panjang gelombang tertentu. Untuk mengetahui bagaimana suatu alat spectrophotometer dibuat maka diperlukan pengetahuan tentang sinar dan teori panjang gelombang sinar (Ward & Harris, 1994).

1

ucdavis. 1994). dan merupakan sinar yang tidak dapat dilihat oleh mata manusia. ditemukan juga bahwa cahaya berjalan dalam bentuk gelombang serta panjang gelombang dari sinar tertentu. yang dapat dilihat oleh mata manusia. Gambar 1 : panjang gelombang (λ) dari gelombang elektromagnetik. Setelah penemuan Newton.BAB II.Amplitudo adalah tinggi puncak dari suatu gelombang (Ward & Harris. White light adalah cahaya yang tidak dapat dilihat dan hanya dapat dilihat apabila cahaya tersebut dipisahkan berdasarkan spektum-spektrumnya (Ward & Harris. Panjang gelombang diukur dengan satuan nanometer (nm). 1994). SINAR Newton menemukan bahwa white light atau daylight merupakan suatu bentuk kumpulan dari berbagai panjang gelombang dari suatu cahaya tampak (visible light). (sumber : http://chemwiki. 2 .Sinar dengan panjang gelombang lebih dari 720 nm disebut dengan sinar infra merah (infra red).edu/@api/deki/pages/345/pdf) Sinar dengan panjang gelombang 380 nm memiliki warna ungu. Panjang gelombang (λ) adalah jarak dari puncak dari satu gelombang dengan gelombang yang lain.Sedangkan sinar dengan panjang gelombang kurang dari 380 nm disebut dengan ultraviolet (UV).

Mata manusia hanya dapat melihat sinar atau spektrum cahaya dengan panjang gelombang 380 -720 nm. nila. kuning.com/get/2mv5-WWl/SPECTROPHOTOMETER-I. hijau.html) 3 . Gambar 2b : Hubungan energi dengan panjang gelombang. (sumber : http://www. Gambar 2a : Spektrum visible dengan panjang gelombang. jingga dan merah.4shared.Pada panjang gelombang ini dapat dilihat warna ungu. biru.

2007). et al. maka akan meningkatkan jumlah warna yang akan dilihat. Ketika keadaan ini terjadi. Hukum Beer Lambert Pada percobaan. 2006). maka hubungan langsung antara absorbansi dengan konsentrasi harus ditetapkan. 2006). 1989). Hukum Beer Lambert menyatakan bahwa. Hukum ini berlaku hanya untuk sinar monokromatis dan untuk larutan yang sangat encer (Anonim. 4 . maka larutan tersebut dikatakan telah mematuhi dari hukum Beer Lambert (Burtis. Konsentrasi suatu zat secara langsung berbanding lurus dengan jumlah sinar yang diabsorbsi (absorbance) dan berbanding terbalik dengan logaritma dari cahaya yang diteruskan atau ditransmisikan (transmittance %) (Burtis. Hukum ini dipakai sebagai dasar pada metoda photometry. untuk memberikan alat pada kondisi yang khusus (baik). Ada hubungan yang sejajar antara kadar konsentrasi tertentu dengan absorbansi. dan juga menyatakan bahwa jarak lightpath pada cuvet atau tempat untuk menaruh larutan harus konstan atau tetap (Turgeon.A. Sehingga akan didapatkan suatu perhitungan menurut hukum Beer Lambert yaitu Keterangan : A : absorbansi Ƹo : koefisien ekstrinsik molar (cm2/mol) c d : konsentrasi (mol/cm3) : tebal larutan (diameter dalam dari cuvet/lightpath) (Anonim. 1989) Adanya peningkatan konsentrasi pada suatu zat. et al.

et al. maka akan terjadi peningkatan absorbansi (OD) Konsentrasi dari larutan : 5 . Gambar 3 : Hubungan antara (a) percent transmittance. 2006) Di dalam kimia klinik. 1989). ada 2 cara untuk mengekspresikan jumlah cahaya yang diabsorbsi oleh suatu larutan. yaitu  Optical Density (OD)  Transmittance (% T) B. Larutan yang memberikan hasil absorbansi terlalu tinggi harus diencerkan (Anonim. dan didaerah mana proporsionalitas antara absorbansi dan konsentrasi masih berlaku.Setiap pemeriksaan yang dilakukan harus memperhatikan apakah larutan tersebut terlalu pekat atau tidak. dengan (b) absorbansi terhadap konsentrasi suatu larutan. (Burtis. Optical Density (OD) • • • Adalah satuan yang disukai dalam kimia klinik Mempunyai hubungan langsung atau berbanding lurus dengan kadar konsentrasi dari suatu larutan Jika terjadi peningkatan kadar konsentrasi pada suatu larutan.

(Turgeon. et al. et al. Transmittance (%T) Transmittance mengekspresikan banyaknya jumlah cahaya yang melewati larutan berwarna yang dibandingkan dengan banyaknya sinar yang melewati larutan standar atau blank. Gambar 4 : Transmittance (sumber : http://chemwiki.C. Nilai ini berbanding terbalik dengan logaritma konsentrasi larutan dan dapat diperoleh dari perhitungan dibawah ini (Burtis. Nilai ini dapat diperoleh dari perhitungan dibawah ini Nilai 2 adalah suatu nilai yang didapat dari logaritma 100 % T.edu/@api/deki/pages/345/pdf) Keterangan : T : Transmittance It : Intensitas cahaya yang diteruskan oleh suatu zat IO : Intensitas cahaya awal (Burtis. 2007) Biasanya colorimeter mengukur transmittance dari pada absorbansi. Jika terjadi peningkatan pada konsentrasi larutan. Absorbance (A) Mengekspresikan jumlah sinar yang diabsorbsi oleh suatu larutan.ucdavis. maka akan terjadi peningkatan absorbansi dan penurunan %T. dan diplotkan pada linear graph paper. D. Nilai ini memiliki hubungan lurus dengan kadar suatu larutan. 2006) 6 . 2006).

SPECTROPHOTOMETER Alat-alat modern sekarang ini telah dapat mengisolasikan sinar dengan panjang gelombang yang sempit untuk pemeriksaan. exit slit. enterance slit.    Single beam spectrophotometer (gambar 4a) Double beam spectrophotometer (gambar 4b) Reflectance spectrophotometer (gambar 4c) Komponen dasar dari spectrophotometer termasuk : sumber cahaya. photo cell. Alat yang menggunakan filter disebut dengan filter photometer. dan yang menggunakan prisma atau grating disebut dengan spectrophotometer.BAB III. galvanometer. Hal ini dengan menggunakan suatu filter. 2006). et al. cuvet. Spectrophotometer digolongkan menjadi (Burtis. prisma ataupun grating. monochromator. Gambar 5a : Single beam spectrophotometer 7 .

html) 8 .4shared.com/get/F1n9DNB0/Spectrophotometer.Gambar 5b : Double beam spectrophotometer Gambar 5c : Reflectance spectrophotometer. (sumber : http://www.

Ada tiga ciri dari LASER. Xenon arc(UV) 2.A. dan mempunyai kemampuan untuk menghasilkan intesitas cahaya dengan panjang gelombang yang sempit. yaitu lampu pijar dan Light Amplification by Simulated Emission of Radiation (LASER) (Burtis. antara lain : 1. Mempunyai suatu light pulse. 2006). yang dapat mendeteksi adanya perubahan konsentrasi pada larutan secara signifikan. yang sangat bervariasi dari microsecond hingga picoseconds. Deuterium(UV) e. Terdapat beberapa jenis lampu pijar yang dapat digunakan. Lampu tungsten mempunyai kemampuan pengukuran suatu cairan yang didilusikan secara sedang. antara lain a. Halogen-quartzTungsten b. Lampu pijar Sumber cahaya yang biasa digunakan untuk pemeriksaan pada spektrum visible adalah sebuah lampu tabung tungsten. Light Amplification by Simulated Emission of Radiation (LASER) Merupakan suatu alat yang dapat digunakan untuk mengatur arah dari suatu energi atom yang membebaskan suatu photon. Hydrogen (UV) d. 1. LASER digunakan sebagai sumber cahaya pada spectrophotometer. Kemampuan untuk membuat diameter cahaya dengan ukuran beberapa mikron pada jarak tertentu 2. 9 . High pressure mercury(UV) f. Sumber cahaya yang digunakan harus kuat dan stabil. Kemampuan untuk menghasilkan sinar yang monokromatik 3. dan dianjurkan untuk digunakannya voltage regulator. Low pressure mercury vapor c. Sumber Cahaya Sumber cahaya yang digunakan dalam spectrophotometer. et al.

com/get/F1n9DNB0/Spectrophotometer. et al. Enterance Slit & Exit Slit Slit atau celah adalah suatu lubang kecil sebagai pemfokus cahaya ditujukan pada suatu bidang tertentu. Penggunaan slit pada alat ini untuk meneruskan sinar menuju monochromator yang disebut enterance slit. C. Cahaya monokromatik dibentuk dari suatu celah masuk (enterance slit). 2006). et al. 2005). Ada tiga alat yang dapat digunakan untuk memisahkan white light menjadi sebuah spektrum tertentu. dan grating (Gunatillaka.B. dan celah keluar (exit slit). Gambar 6: Prisma dan grating. Alat yang menggunakan filter untuk menghasilkan cahaya yang monokromatik disebut dengan filter photometer. 2005). dan exit slit digunakan untuk meneruskan sinar dengan panjang gelombang tertentu menuju cuvet (Gunatillaka. monochromator.html) 10 . (sumber : http://www.4shared. prisma. Monochromator Merupakan suatu alat yang berfungsi untuk menyeleksi cahaya dengan panjang gelombang tertentu. et al. antara lain filter. sedangkan yang menggunakan prisma atau grating disebut dengan spectrophotometer (Burtis.

4shared. Gambar 7 : Cuvets (sumber : http://www. 2006). 1994). Cuvet Cuvet adalah suatu sumur yang berfungsi sebagai tempat untuk menaruh larutan yang akan diperiksa. Umumnya yang paling banyak digunakan adalah bentuk persegi (Ward & Harris. quartz untuk pemeriksaan pada spektrum UV dan plastik untuk pemeriksaan spektrum UV dan visible (Burtis. persegi. Cuvet memiliki bermacam bentuk antara lain bulat. Bahan baku untuk pembuatan cuvet dapat berasal dari boro silicate glass yang dipergunakan untuk pemeriksaan pada spectrum visible.D. et al. 2006). dan memungkinkan untuk dapat dilewati suatu sinar.com/get/F1n9DNB0/Spectrophotometer. Syarat cuvet yang dipergunakan adalah cuvet yang telah terkalibrasi secara optik dan bersih. Cuvet dapat dibersihkan dengan merendam pada larutan detergen atau capuran dari HCL:air:etanol (1:3:4). Kebanyakan cuvet yang dipergunakan secara rutin pada laboratorium klinik adalah cuvet yang memiliki lightpath 1 cm (Ward & Harris. et al.html) 11 . 1994). Cuvet yang digunakan pada pemeriksaan yang menggunakan spektrum UV harus mendapatkan perlakuan yang khusus (Burtis.

dan dilaporkan sebagi % transmittance atau absorbansi (Turgeon. 2007). a. et al. alat pengukur pada spectrophotometer terdiri atas photoelectric cell (photo cell) dan galvanometer. Photodiode c.com/get/F1n9DNB0/Spectrophotometer. Photo cell & Galvanometer Secara umum. Galvanometer Galvanometer adalah suatu alat yang bekerja sebagai penangkap elektron yang dilepaskan oleh photo cell serta mencatat jumlah arus yang diterimanya. 2007) dan berfungsi sebagai alat perubah energi cahaya yang ditransmisikan oleh larutan didalam cuvet menuju energi listrik serta harus tertutup dan terlindung dari cahaya (daylight). Photo cell Photo cell adalah suatu alat yang sangat sensitif terhadap cahaya. 12 .E. Photomultiplier tube i.html) b. ii. Cathode Logam sensitif cahaya Rangkaian dynode (10-15) Gambar 8 :Photomultiplier tube. Photo cell dapat berupa (Burtis. dan menghasilkan suatu elektron yang berasal dari cahaya yang mengenainya (Turgeon. iii. 2006). Photovoltaic cell 2. 1. (sumber : http://www.4shared.

2007). Hal ini dapat dilakukan menggunakan larutan standar dengan absorbansi maksimal pada panjang gelombang tertentu (Bishop. penyimpangan sinar. 13 . 1992). 1992. QUALITY CONTROL (QC) Quality control pada spectrophotometer meliputi pemeriksaan akurasi panjang gelombang. 2007).BAB IV. Fungsi dari quality control ini untuk memastikan/membuktikan bahwa alat spectrophotometer layak dipakai. Hal ini dapat dideteksi dengan cut-off filter (Bishop. Linearitas dapat dibuktikan dengan terbentuknya kurva yang menghasilkan garis lurus pada kurva kalibrasi dan neutral-density filter yang tersedia secara komersial (Turgeon. Penyimpangan sinar adalah suatu cahaya dengan panjang gelombang diluar panjang gelombang yang dikehendaki. et al. Allen. Akurasi panjang gelombang mempunyai arti bahwa panjang gelombang yang dikeluarkan dari monocromator adalah sama dengan panjang gelombang yang tertera pada alat. dan linearitas. Penyebab tersering terjadinya fenomena penyimpangan sinar ini akibat ketidak sempurnaan alat optik yang digunakan. et al.

dan galvanometer (Burtis. 2007). serta linearitas (Turgeon. et al. et al. 1992). Quality control untuk memastikan/membuktikan bahwa alat spectrophotometer dapat layak dipakai. Spectrophotometer digolongkan menjadi single beam spectrophotometer.Sinar dengan panjang gelombang kurang dari 380 nm disebut ultraviolet (UV).BAB V. double beam spectrophotometer. photo cell. et al. Spectrophotometer yaitu suatu alat yang digunakan untuk mengukur intensitas cahaya dengan mempergunakan panjang gelombang tertentu (Bishop.Sinar UV dan infra merah merupakan sinar yang tidak dapat dilihat oleh mata manusia (Ward & Harris. sedangkan yang menggunakan prisma atau grating disebut dengan spectrophotometer (Burtis. SIMPULAN Photometer yaitu suatu alat yang digunakan untuk mengukur intensitas cahaya tanpa mempertimbangkan suatu panjang gelombang. Spectrophotometer memiliki komponen dasar seperti sumber cahaya. enterance slit. 1994). monochromator. serta reflectance spectrophotometer. cuvet. 2006). hal ini dapat dilakukan dengan memeriksa pada akurasi panjang gelombang. 2006). dan lebih dari 720 nm disebut sinar infra merah (infra red). penyimpangan sinar. konsentrasi suatu zat secara langsung berbanding lurus dengan jumlah sinar yang diabsorbsi (absorbance) dan berbanding terbalik dengan logaritma dari cahaya yang diteruskan atau ditransmisikan (transmittance %) (Burtis. Alat yang menggunakan filter untuk menghasilkan cahaya yang monokromatik disebut dengan filter photometer. et al. Mata manusia hanya dapat melihat sinar atau spektrum cahaya dengan panjang gelombang 380 -720 nm. 14 . Hukum Beer Lambert menyatakan. 2006). exit slit.

1994. J. Analytical Techniques and Instrumentation. E. 129-139 Ultraviolet/Visible Light Absorption Spectrophotometry in Clinical Chemistry http://www.. 37-63 15 . 1989. M. Guidelines for Maintenance of Equipment in A Clinical Chemistry Laboratory. 1992. Jakarta. Inc. Fody. C. Harris. S. Sounders Company. Lippincott Company. Thermo Fisher Scientific.ucdavis. 28 September 2011) Ward. Elsevier Saunders. WHO. 2007. B. Hunais. USA. pp. 2009.W. M. B. L. Engelkirk. an affiliate of Elsevier Inc. USA. 2007. Basic and New Techniques in The Clinical Laboratory. P. A.com/get/F1n9DNB0/Spectrophotometer. Department of Medical Technology. 103-112 Burtis. E. Ashwood. E. Naresuan University. L. Stray Light : Measurement and Effect on Performance in UVVisible Spectrophotometry.4shared. E. Spectrophotometer. L. Clinical Chemistry : Principles.. 4th Edition. W. Department of Biochemistry. 1-25 Spectrophotometer http://www. 27 September 2011) Turgeon. 2nd Edition. Fotometri-Fotometer. Linne & Ringsrud’s Clinical Laboratory Science : The Basics and Routine Techniques. Medical Research Institute. M. Clinical Laboratory Instrumentation and Automation : Principles.pdf (download. M. K.com/get/2mv5-WWl/SPECTROPHOTOMETERI. R.DAFTAR PUSTAKA Allen. 27 September 2011) Surapinit. Correlations. J.html (download. USA.perkinelmer. M.html (download. pp. Indonesia. 1-18 Bishop. Phayao http://www. D. Bruns. 27 September 2011) Spectrophotometry http://chemwiki. Aplications.4shared. D. Optical Thechniques. Mosby Elsevier. pp. M. M. Boehringer Mannheim. Silva. M.edu/@api/deki/pages/345/pdf (download. and Selection. TIETZ Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics. pp. 61-75 Gunatillaka. 2005. Procedures. China. School of Allied Health Science.com/CMSResources/Images/4474382ATL_UVVisInClinicalChemistry. K. 1-2 Anonim. USA. Colombo. 6th Edition. 2006. pp. 1st Edition.. pp. Inc. D. pp. D. Spectrophotometry.

Analytical Chemistry.com/html/seiten/output_adb_file.cvg. S. 27 September 2011) Performance of UV-Vis spectrophotometers http://www. 28 September 2011) Upstone.pdf (download.hellmaanalytics.Calibration standards for spectrophotometers http://www.Ultraviolet/Visible Light Absorption Spectrophotometry in Clinical Chemistry. UK. Chichester.L.php?id=23252 (download. 1-14 16 .ca/images/Performance_UV_Vis. 2000.John Wiley & Sons Ltd.

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful