BAB I.

PENDAHULUAN

Suatu alat yang mengukur radiasi elektromagnetik mempunyai beberapa konsep dan komponen. Radiasi elektromagnetik digambarkan sebagai suatu photon dari energi, yang berjalan dalam bentuk gelombang (Bishop; et al, 1992). Di dalam laboratorium klinik, diperlukan kebutuhan terus menerus tentang teknik pengukuran secara kuantitatif (Turgeon, 2007). Photometer yaitu suatu alat yang digunakan untuk mengukur intensitas cahaya tanpa mempertimbangkan suatu panjang gelombang. Spectrophotometer yaitu suatu alat yang digunakan untuk mengukur intensitas cahaya dengan mempergunakan panjang gelombang tertentu (Bishop; et al, 1992). Spectrophotometer menggunakan suatu prinsip jumlah cahaya yang absorbsi oleh analit pada panjang gelombang tertentu. Untuk mengetahui bagaimana suatu alat spectrophotometer dibuat maka diperlukan pengetahuan tentang sinar dan teori panjang gelombang sinar (Ward & Harris, 1994).

1

ditemukan juga bahwa cahaya berjalan dalam bentuk gelombang serta panjang gelombang dari sinar tertentu.Amplitudo adalah tinggi puncak dari suatu gelombang (Ward & Harris.edu/@api/deki/pages/345/pdf) Sinar dengan panjang gelombang 380 nm memiliki warna ungu. SINAR Newton menemukan bahwa white light atau daylight merupakan suatu bentuk kumpulan dari berbagai panjang gelombang dari suatu cahaya tampak (visible light).ucdavis. Gambar 1 : panjang gelombang (λ) dari gelombang elektromagnetik. (sumber : http://chemwiki.Sinar dengan panjang gelombang lebih dari 720 nm disebut dengan sinar infra merah (infra red). Panjang gelombang (λ) adalah jarak dari puncak dari satu gelombang dengan gelombang yang lain. 1994). dan merupakan sinar yang tidak dapat dilihat oleh mata manusia.BAB II. 1994). Setelah penemuan Newton. yang dapat dilihat oleh mata manusia.Sedangkan sinar dengan panjang gelombang kurang dari 380 nm disebut dengan ultraviolet (UV). White light adalah cahaya yang tidak dapat dilihat dan hanya dapat dilihat apabila cahaya tersebut dipisahkan berdasarkan spektum-spektrumnya (Ward & Harris. Panjang gelombang diukur dengan satuan nanometer (nm). 2 .

hijau. Gambar 2a : Spektrum visible dengan panjang gelombang. kuning.html) 3 .Pada panjang gelombang ini dapat dilihat warna ungu.com/get/2mv5-WWl/SPECTROPHOTOMETER-I. (sumber : http://www. Gambar 2b : Hubungan energi dengan panjang gelombang. biru. jingga dan merah. nila.Mata manusia hanya dapat melihat sinar atau spektrum cahaya dengan panjang gelombang 380 -720 nm.4shared.

Ketika keadaan ini terjadi. et al. Sehingga akan didapatkan suatu perhitungan menurut hukum Beer Lambert yaitu Keterangan : A : absorbansi Ƹo : koefisien ekstrinsik molar (cm2/mol) c d : konsentrasi (mol/cm3) : tebal larutan (diameter dalam dari cuvet/lightpath) (Anonim. Hukum Beer Lambert menyatakan bahwa. Ada hubungan yang sejajar antara kadar konsentrasi tertentu dengan absorbansi. et al. untuk memberikan alat pada kondisi yang khusus (baik). Hukum ini dipakai sebagai dasar pada metoda photometry. 2006).A. 2007). maka akan meningkatkan jumlah warna yang akan dilihat. 2006). 1989) Adanya peningkatan konsentrasi pada suatu zat. Hukum Beer Lambert Pada percobaan. 1989). maka hubungan langsung antara absorbansi dengan konsentrasi harus ditetapkan. dan juga menyatakan bahwa jarak lightpath pada cuvet atau tempat untuk menaruh larutan harus konstan atau tetap (Turgeon. Konsentrasi suatu zat secara langsung berbanding lurus dengan jumlah sinar yang diabsorbsi (absorbance) dan berbanding terbalik dengan logaritma dari cahaya yang diteruskan atau ditransmisikan (transmittance %) (Burtis. 4 . maka larutan tersebut dikatakan telah mematuhi dari hukum Beer Lambert (Burtis. Hukum ini berlaku hanya untuk sinar monokromatis dan untuk larutan yang sangat encer (Anonim.

dengan (b) absorbansi terhadap konsentrasi suatu larutan. Gambar 3 : Hubungan antara (a) percent transmittance.Setiap pemeriksaan yang dilakukan harus memperhatikan apakah larutan tersebut terlalu pekat atau tidak. et al. yaitu  Optical Density (OD)  Transmittance (% T) B. 1989). 2006) Di dalam kimia klinik. Optical Density (OD) • • • Adalah satuan yang disukai dalam kimia klinik Mempunyai hubungan langsung atau berbanding lurus dengan kadar konsentrasi dari suatu larutan Jika terjadi peningkatan kadar konsentrasi pada suatu larutan. dan didaerah mana proporsionalitas antara absorbansi dan konsentrasi masih berlaku. (Burtis. ada 2 cara untuk mengekspresikan jumlah cahaya yang diabsorbsi oleh suatu larutan. maka akan terjadi peningkatan absorbansi (OD) Konsentrasi dari larutan : 5 . Larutan yang memberikan hasil absorbansi terlalu tinggi harus diencerkan (Anonim.

Nilai ini berbanding terbalik dengan logaritma konsentrasi larutan dan dapat diperoleh dari perhitungan dibawah ini (Burtis. 2006). Gambar 4 : Transmittance (sumber : http://chemwiki. et al. Nilai ini memiliki hubungan lurus dengan kadar suatu larutan. (Turgeon. Nilai ini dapat diperoleh dari perhitungan dibawah ini Nilai 2 adalah suatu nilai yang didapat dari logaritma 100 % T. 2007) Biasanya colorimeter mengukur transmittance dari pada absorbansi. maka akan terjadi peningkatan absorbansi dan penurunan %T. Jika terjadi peningkatan pada konsentrasi larutan. D.edu/@api/deki/pages/345/pdf) Keterangan : T : Transmittance It : Intensitas cahaya yang diteruskan oleh suatu zat IO : Intensitas cahaya awal (Burtis.C. et al. Transmittance (%T) Transmittance mengekspresikan banyaknya jumlah cahaya yang melewati larutan berwarna yang dibandingkan dengan banyaknya sinar yang melewati larutan standar atau blank. 2006) 6 . Absorbance (A) Mengekspresikan jumlah sinar yang diabsorbsi oleh suatu larutan. dan diplotkan pada linear graph paper.ucdavis.

galvanometer. Hal ini dengan menggunakan suatu filter. enterance slit. cuvet. Alat yang menggunakan filter disebut dengan filter photometer. exit slit. et al. SPECTROPHOTOMETER Alat-alat modern sekarang ini telah dapat mengisolasikan sinar dengan panjang gelombang yang sempit untuk pemeriksaan. dan yang menggunakan prisma atau grating disebut dengan spectrophotometer. photo cell.BAB III. Gambar 5a : Single beam spectrophotometer 7 . 2006).    Single beam spectrophotometer (gambar 4a) Double beam spectrophotometer (gambar 4b) Reflectance spectrophotometer (gambar 4c) Komponen dasar dari spectrophotometer termasuk : sumber cahaya. prisma ataupun grating. Spectrophotometer digolongkan menjadi (Burtis. monochromator.

4shared.com/get/F1n9DNB0/Spectrophotometer.html) 8 .Gambar 5b : Double beam spectrophotometer Gambar 5c : Reflectance spectrophotometer. (sumber : http://www.

antara lain a. Kemampuan untuk menghasilkan sinar yang monokromatik 3. Terdapat beberapa jenis lampu pijar yang dapat digunakan. Xenon arc(UV) 2. Lampu tungsten mempunyai kemampuan pengukuran suatu cairan yang didilusikan secara sedang. yaitu lampu pijar dan Light Amplification by Simulated Emission of Radiation (LASER) (Burtis. Halogen-quartzTungsten b. 1. High pressure mercury(UV) f. yang sangat bervariasi dari microsecond hingga picoseconds. 9 . Mempunyai suatu light pulse. Kemampuan untuk membuat diameter cahaya dengan ukuran beberapa mikron pada jarak tertentu 2. Deuterium(UV) e.A. et al. 2006). Low pressure mercury vapor c. yang dapat mendeteksi adanya perubahan konsentrasi pada larutan secara signifikan. dan dianjurkan untuk digunakannya voltage regulator. Hydrogen (UV) d. Light Amplification by Simulated Emission of Radiation (LASER) Merupakan suatu alat yang dapat digunakan untuk mengatur arah dari suatu energi atom yang membebaskan suatu photon. dan mempunyai kemampuan untuk menghasilkan intesitas cahaya dengan panjang gelombang yang sempit. Ada tiga ciri dari LASER. Sumber cahaya yang digunakan harus kuat dan stabil. Lampu pijar Sumber cahaya yang biasa digunakan untuk pemeriksaan pada spektrum visible adalah sebuah lampu tabung tungsten. antara lain : 1. LASER digunakan sebagai sumber cahaya pada spectrophotometer. Sumber Cahaya Sumber cahaya yang digunakan dalam spectrophotometer.

Gambar 6: Prisma dan grating. monochromator. 2006). et al. 2005). dan exit slit digunakan untuk meneruskan sinar dengan panjang gelombang tertentu menuju cuvet (Gunatillaka.com/get/F1n9DNB0/Spectrophotometer. (sumber : http://www. Alat yang menggunakan filter untuk menghasilkan cahaya yang monokromatik disebut dengan filter photometer. Cahaya monokromatik dibentuk dari suatu celah masuk (enterance slit). dan grating (Gunatillaka. et al. sedangkan yang menggunakan prisma atau grating disebut dengan spectrophotometer (Burtis.B. Penggunaan slit pada alat ini untuk meneruskan sinar menuju monochromator yang disebut enterance slit. 2005).html) 10 . et al. prisma. C. antara lain filter. Monochromator Merupakan suatu alat yang berfungsi untuk menyeleksi cahaya dengan panjang gelombang tertentu. Enterance Slit & Exit Slit Slit atau celah adalah suatu lubang kecil sebagai pemfokus cahaya ditujukan pada suatu bidang tertentu. Ada tiga alat yang dapat digunakan untuk memisahkan white light menjadi sebuah spektrum tertentu.4shared. dan celah keluar (exit slit).

et al. Cuvet yang digunakan pada pemeriksaan yang menggunakan spektrum UV harus mendapatkan perlakuan yang khusus (Burtis. et al. Syarat cuvet yang dipergunakan adalah cuvet yang telah terkalibrasi secara optik dan bersih. 1994).D. quartz untuk pemeriksaan pada spektrum UV dan plastik untuk pemeriksaan spektrum UV dan visible (Burtis. Cuvet dapat dibersihkan dengan merendam pada larutan detergen atau capuran dari HCL:air:etanol (1:3:4). Bahan baku untuk pembuatan cuvet dapat berasal dari boro silicate glass yang dipergunakan untuk pemeriksaan pada spectrum visible. persegi. Cuvet memiliki bermacam bentuk antara lain bulat. 2006).com/get/F1n9DNB0/Spectrophotometer.html) 11 . Kebanyakan cuvet yang dipergunakan secara rutin pada laboratorium klinik adalah cuvet yang memiliki lightpath 1 cm (Ward & Harris. Cuvet Cuvet adalah suatu sumur yang berfungsi sebagai tempat untuk menaruh larutan yang akan diperiksa. dan memungkinkan untuk dapat dilewati suatu sinar. 1994). Gambar 7 : Cuvets (sumber : http://www. Umumnya yang paling banyak digunakan adalah bentuk persegi (Ward & Harris. 2006).4shared.

ii. 12 . iii. Photovoltaic cell 2. dan menghasilkan suatu elektron yang berasal dari cahaya yang mengenainya (Turgeon. 2007). alat pengukur pada spectrophotometer terdiri atas photoelectric cell (photo cell) dan galvanometer.com/get/F1n9DNB0/Spectrophotometer. Photodiode c.4shared.html) b. Photomultiplier tube i. Galvanometer Galvanometer adalah suatu alat yang bekerja sebagai penangkap elektron yang dilepaskan oleh photo cell serta mencatat jumlah arus yang diterimanya.E. a. (sumber : http://www. Photo cell dapat berupa (Burtis. Photo cell Photo cell adalah suatu alat yang sangat sensitif terhadap cahaya. Cathode Logam sensitif cahaya Rangkaian dynode (10-15) Gambar 8 :Photomultiplier tube. 1. Photo cell & Galvanometer Secara umum. 2007) dan berfungsi sebagai alat perubah energi cahaya yang ditransmisikan oleh larutan didalam cuvet menuju energi listrik serta harus tertutup dan terlindung dari cahaya (daylight). dan dilaporkan sebagi % transmittance atau absorbansi (Turgeon. et al. 2006).

QUALITY CONTROL (QC) Quality control pada spectrophotometer meliputi pemeriksaan akurasi panjang gelombang. Allen. et al. penyimpangan sinar. Penyebab tersering terjadinya fenomena penyimpangan sinar ini akibat ketidak sempurnaan alat optik yang digunakan. 1992). Hal ini dapat dilakukan menggunakan larutan standar dengan absorbansi maksimal pada panjang gelombang tertentu (Bishop. et al. dan linearitas. Hal ini dapat dideteksi dengan cut-off filter (Bishop. Fungsi dari quality control ini untuk memastikan/membuktikan bahwa alat spectrophotometer layak dipakai. Linearitas dapat dibuktikan dengan terbentuknya kurva yang menghasilkan garis lurus pada kurva kalibrasi dan neutral-density filter yang tersedia secara komersial (Turgeon. Penyimpangan sinar adalah suatu cahaya dengan panjang gelombang diluar panjang gelombang yang dikehendaki. 2007). Akurasi panjang gelombang mempunyai arti bahwa panjang gelombang yang dikeluarkan dari monocromator adalah sama dengan panjang gelombang yang tertera pada alat.BAB IV. 1992. 2007). 13 .

exit slit. dan galvanometer (Burtis.Sinar UV dan infra merah merupakan sinar yang tidak dapat dilihat oleh mata manusia (Ward & Harris. 1994). 14 . dan lebih dari 720 nm disebut sinar infra merah (infra red). et al. Alat yang menggunakan filter untuk menghasilkan cahaya yang monokromatik disebut dengan filter photometer. 1992). hal ini dapat dilakukan dengan memeriksa pada akurasi panjang gelombang. Quality control untuk memastikan/membuktikan bahwa alat spectrophotometer dapat layak dipakai. double beam spectrophotometer. et al. penyimpangan sinar. photo cell. 2007). Spectrophotometer yaitu suatu alat yang digunakan untuk mengukur intensitas cahaya dengan mempergunakan panjang gelombang tertentu (Bishop. Mata manusia hanya dapat melihat sinar atau spektrum cahaya dengan panjang gelombang 380 -720 nm. Spectrophotometer digolongkan menjadi single beam spectrophotometer. Hukum Beer Lambert menyatakan. serta reflectance spectrophotometer.BAB V. sedangkan yang menggunakan prisma atau grating disebut dengan spectrophotometer (Burtis. cuvet. 2006). SIMPULAN Photometer yaitu suatu alat yang digunakan untuk mengukur intensitas cahaya tanpa mempertimbangkan suatu panjang gelombang.Sinar dengan panjang gelombang kurang dari 380 nm disebut ultraviolet (UV). 2006). enterance slit. konsentrasi suatu zat secara langsung berbanding lurus dengan jumlah sinar yang diabsorbsi (absorbance) dan berbanding terbalik dengan logaritma dari cahaya yang diteruskan atau ditransmisikan (transmittance %) (Burtis. monochromator. et al. Spectrophotometer memiliki komponen dasar seperti sumber cahaya. et al. 2006). serta linearitas (Turgeon.

ucdavis. Phayao http://www.4shared. China. 1st Edition. Colombo. 37-63 15 . B. M. J. an affiliate of Elsevier Inc. 6th Edition. L. D. L.perkinelmer. M. pp. pp.com/get/F1n9DNB0/Spectrophotometer. Optical Thechniques. K. USA. 1-18 Bishop. pp. D. 27 September 2011) Turgeon. Spectrophotometry. 28 September 2011) Ward. M. Fotometri-Fotometer. K. J. Guidelines for Maintenance of Equipment in A Clinical Chemistry Laboratory. Naresuan University. Indonesia. E. 2005. M. Mosby Elsevier. 2009. D. Basic and New Techniques in The Clinical Laboratory. Procedures. M.. 1994. M. 27 September 2011) Surapinit. Lippincott Company. Engelkirk.4shared. Fody. C. Department of Biochemistry. Spectrophotometer. 103-112 Burtis. Hunais. Stray Light : Measurement and Effect on Performance in UVVisible Spectrophotometry..com/CMSResources/Images/4474382ATL_UVVisInClinicalChemistry. pp.DAFTAR PUSTAKA Allen. Jakarta. and Selection. 61-75 Gunatillaka.pdf (download. 1-2 Anonim. School of Allied Health Science. Department of Medical Technology. Inc. Harris. 2007. 4th Edition. Boehringer Mannheim. Inc. Aplications. R. pp. 2nd Edition.html (download. E. 1992. Correlations. Clinical Chemistry : Principles.html (download. pp. Clinical Laboratory Instrumentation and Automation : Principles. Thermo Fisher Scientific. 129-139 Ultraviolet/Visible Light Absorption Spectrophotometry in Clinical Chemistry http://www. 2007. WHO. TIETZ Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics. P. USA. 2006. E. W.W. M. L. Elsevier Saunders. 1-25 Spectrophotometer http://www. pp. Ashwood. Bruns.edu/@api/deki/pages/345/pdf (download.. D. E.com/get/2mv5-WWl/SPECTROPHOTOMETERI. Analytical Techniques and Instrumentation. Sounders Company. B. 1989. M. USA. Silva. A. USA. Medical Research Institute. 27 September 2011) Spectrophotometry http://chemwiki. S. Linne & Ringsrud’s Clinical Laboratory Science : The Basics and Routine Techniques.

UK. Analytical Chemistry.hellmaanalytics.Ultraviolet/Visible Light Absorption Spectrophotometry in Clinical Chemistry. 27 September 2011) Performance of UV-Vis spectrophotometers http://www.John Wiley & Sons Ltd.php?id=23252 (download. 1-14 16 . Chichester. 28 September 2011) Upstone.ca/images/Performance_UV_Vis.com/html/seiten/output_adb_file. S.pdf (download.Calibration standards for spectrophotometers http://www.cvg.L. 2000.

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful