PEMERIKSAAN BILIRUBIN DIRECT DAN BILIRUBIN TOTAL A. Tujuan B. Metode C.

Prinsip : Untuk mengetahui kadar Bilirubin Direct (D) dan Bilirubin Total (T) : Jendrassik / Grof :

Bilirubin bereaksi dengan Diazotized Sulphanilic Acid (DSA) membentuk zat warna merah azo. Absorbans zat warna ini pada 546 nm sebanding dengan konsentrasi bilirubin dalam sampel. Glucuronides bilirubin yang larut dalam air bereaksi langsung dengan DSA yang mana albumin yang terkonjugasi dalam bilirubin indirect hanya akan bereaksi dengan DSA, dibantu adanya accelerator (zat pemercepat). Bilirubin total = bilirubin direct + bilirubin indirect. D. Reaksi Bilirubin +DSA Bilirubin + accelerator E. Bahan : Serum atau plasma heparin. : Asam sulfanilic + natrium nitrit DSA DIRECT azobilirubin TOTAL azobilirubin

Hindari hemolisis. Sampel harus terlindungi dari sinar. Stabilitas : Bilirubin stabil selama 3 hari bila disimpan terlindung dari sinar pada 2-8°C. F. Reagen :

1. 1 x 100 ml reagen Bilirubin Total (tutup putih) Asam sulfanilic Asam hydroclorit Caffeine (accelerator) Natrium benzoate 2. 1 x 9 ml reagen T-Nitrit (tutup putih) untuk pengukuran Bilirubin Total Natrium nitrit 14 mmol/l 14 mmol/l 250 mmol/l 200 mmol/l 420 mmol/l

3. 1 x 100 ml reagen Bilirubin Direct (tutup merah) Asam sulfanilic Asam hydroclorit 4. 1 x 9 ml reagen D-Nitrit (tutup merah) untuk pengukuran Bilirubin Direct Natrium nitrit G. Alat : 0.9 mmol/l 14 mmol/l 250 mmol/l

inkubasi selama 5 menit. Micropipet 2.1. Sampel 100 µl 100 µl Campur. Bilirubin Direct Pipet ke dalam cuvet Reagen. Ukur absorbans sampel terhadap blanko sampel (∆A546) 2. inkubasi pada suhu kamar selama 10 sampai 30 menit. inkubasi pada suhu kamar selama 5 menit tepat. inkubasi selama 2 menit. Bilirubin Total Pipet ke dalam cuvet Reagen. Pemeriksaan Panjang gelombang Celah optik Suhu Pengukuran c. Ukur absorbans sampel terhadap blanko sampel (∆A546) . Cara Kerja a. b. Tabung reaksi 4. Sampel 100 µl 100 µl Campur. : Persiapan reagen dan stabilitas 1. bilirubin direct (3) Reagen D-Nitrit Blanko sampel 1000 µl Sampel 1000 µl 40 µl Campur dengan baik. Kedua reagen dan larutan nitrit siap pakai. Prosedur : 546 nm : 1 cm : 20-25°C : terhadap blanko sampel 1. Fotometer H. bilirubin total (1) Reagen T-Nitrit Blanko sampel 1000 µl Sampel 1000 µl 40 µl Campur dengan baik. 2. Tip biru dan tip kuning 3. Stabil sampai tanggal kadaluarsa bila tidak dibuka dan disimpan pada 15-25°C.

Nilai Rujukan Bilirubin total Pada kelahiran.1 = (µmol/l) K. sampai 1 bulan. Kalikan hasil dengan 5.0 (mg/dl) x 17.6 18.3 : mg/dl 5 12 1. J.9%) dan ulangi pemeriksaan.0 25. Untuk konsentrasi bilirubin melebihi 25 mg/dl. sampai Dewasa.5 205. sampai Bilirubin direct Dewasa.I. sampai 5 hari.25 4. encerkan sampel 1 + 4 dengan garam fisiologis (0. sampai 0.5 1.0 Konsentrasi bilirubin (mg/dl) = ∆A546 x 13. Perhitungan : Hitung konsentrasi bilirubin total dan direct dengan menggunakan faktor 13.1 µmol/l 85.8 . Interpretasi Hasil : Linearitas : Pemeriksaan linear sampai 25 mg/dl.