P. 1
Pemeriksaan Kadar Interleukin 6

Pemeriksaan Kadar Interleukin 6

|Views: 74|Likes:
Published by Dayoe Thegunners
cara dan hasil pemeriksaan il6
cara dan hasil pemeriksaan il6

More info:

Published by: Dayoe Thegunners on Oct 03, 2013
Copyright:Attribution Non-commercial

Availability:

Read on Scribd mobile: iPhone, iPad and Android.
download as DOC, PDF, TXT or read online from Scribd
See more
See less

03/10/2014

pdf

text

original

Pemeriksaan Kadar Interleukin 6 (IL-6

)
Peeriksaan IL-6 hepar dilakukan dengan menggunakan metode ELISA (Enzym Linked Immunosorbent Assay ) model sandwich. Rangkaian kerjanya adalah sebagai berikut : 1. Pengambilan organ hepar terlebih dahulu, kemudian hepar tersebut disuntik dengan menggunakan PBS kemudian masukkan kedalam frezer. Kemudian timbang masing-masing hepar letakkan pada wadah 2. Haluskan hepar, setelah halus beri larutan RIPA + DMOS, setelah itu masukkan kedalam microtube kemudian di sekker. 3. Kemudian diinkubasi selama 30 menit pada suhu 4 °C

4. Sentrifuse mikrotube dengan kecepatan 12000 rpm selama 20 menit 5. Pembuatan Coating antigen IL-6 pada mikrotube dengan mencampur serum

dengan coating buffer 50 µL dengan perbandingan 1:20 tujuannya adalah untuk melekatkan antigen 6. Inkubasi 24 jam pada suhu 4 °C 7. Pencucian dengan larutan PBS-T (PBS + Tween -20) 0,2% 50 µL sebanyak 6x masing-masing 3 menit 8. Pembuatan Blocking buffer dengan menambahkan BSA 1% dalam PBS 9. Inkubasi 30 menit dalam suhu ruangan 10. Pencucian dengan larutan PBS-T (PBS + Tween -20) 0,2% 50 µL sebanyak 6x masing-masing 3menit 11. Pembuatan coatng antibody primer dengan penambahan anti IL-6 +PBS dengan perbandingan 1: 500

Pencucian dengan larutan PBS-T (PBS + Tween -20) 0. Pembuatan coating antibodi sekunder dengan penambahan Anti Rabbit IgG AP Conjugated +PBS dengan perbandingan 1:1000 15. Inkubasi 1 jam pada suhu ruangan 19. Inkubsi dan disekker 2 jam pada suhu ruangan 13. Inkubasi 15 menit pada suhu ruangan 24. Pencucian dengan larutan PBS-T (PBS + Tween -20) 0.2% 50 µL sebanyak 6x masing-masing 3menit 17.2% 50 µL sebanyak 6x masing-masing 3menit 20. Stop reaction dengan HCl 1N 23. Diukur absorbsinya pada gelombang 450 nm dengan ELISA reader .2% 50 µL sebanyak 6x masing-masing 3menit 14. Inkubasi 30 menit pada suhu ruangan 22. Penambahan TMB (Toluen Metilen Blue) 21. Penambahan SA-HRP 1:8000 18.12. Inkubasi 1 jam pada suhu ruangan 16. Pencucian dngan larutan PBS-T (PBS + Tween -20) 0.

You're Reading a Free Preview

Download
scribd
/*********** DO NOT ALTER ANYTHING BELOW THIS LINE ! ************/ var s_code=s.t();if(s_code)document.write(s_code)//-->