You are on page 1of 2

Pemeriksaan Kadar Interleukin 6 (IL-6)

Peeriksaan IL-6 hepar dilakukan dengan menggunakan metode ELISA (Enzym Linked Immunosorbent Assay ) model sandwich. Rangkaian kerjanya adalah sebagai berikut : 1. Pengambilan organ hepar terlebih dahulu, kemudian hepar tersebut disuntik dengan menggunakan PBS kemudian masukkan kedalam frezer. Kemudian timbang masing-masing hepar letakkan pada wadah 2. Haluskan hepar, setelah halus beri larutan RIPA + DMOS, setelah itu masukkan kedalam microtube kemudian di sekker. 3. Kemudian diinkubasi selama 30 menit pada suhu 4 C

4. Sentrifuse mikrotube dengan kecepatan 12000 rpm selama 20 menit 5. Pembuatan Coating antigen IL-6 pada mikrotube dengan mencampur serum

dengan coating buffer 50 L dengan perbandingan 1:20 tujuannya adalah untuk melekatkan antigen 6. Inkubasi 24 jam pada suhu 4 C 7. Pencucian dengan larutan PBS-T (PBS + Tween -20) 0,2% 50 L sebanyak 6x masing-masing 3 menit 8. Pembuatan Blocking buffer dengan menambahkan BSA 1% dalam PBS 9. Inkubasi 30 menit dalam suhu ruangan 10. Pencucian dengan larutan PBS-T (PBS + Tween -20) 0,2% 50 L sebanyak 6x masing-masing 3menit 11. Pembuatan coatng antibody primer dengan penambahan anti IL-6 +PBS dengan perbandingan 1: 500

12. Inkubsi dan disekker 2 jam pada suhu ruangan 13. Pencucian dngan larutan PBS-T (PBS + Tween -20) 0,2% 50 L sebanyak 6x masing-masing 3menit 14. Pembuatan coating antibodi sekunder dengan penambahan Anti Rabbit IgG AP Conjugated +PBS dengan perbandingan 1:1000 15. Inkubasi 1 jam pada suhu ruangan 16. Pencucian dengan larutan PBS-T (PBS + Tween -20) 0,2% 50 L sebanyak 6x masing-masing 3menit 17. Penambahan SA-HRP 1:8000 18. Inkubasi 1 jam pada suhu ruangan 19. Pencucian dengan larutan PBS-T (PBS + Tween -20) 0,2% 50 L sebanyak 6x masing-masing 3menit 20. Penambahan TMB (Toluen Metilen Blue) 21. Inkubasi 30 menit pada suhu ruangan 22. Stop reaction dengan HCl 1N 23. Inkubasi 15 menit pada suhu ruangan 24. Diukur absorbsinya pada gelombang 450 nm dengan ELISA reader

You might also like