PEMBUATAN PREPARAT MIKROSKOPIS DAN AWETAN

Mikroteknik n Cara : Fiksasi à dehidrasi à staining à clearing à

n Tujuan: membuat sediaan yang dapat mendukung
berbagai disiplin ilmu (histologi, fisiologi,
embriologi,dsb).
n Bahan kimia à padat, cair, gas dengan sifat yang
berbeda-beda (sangat toksik, toksik, tidak toksik)
n Alat-alat:
- alat gelas (staining jar, beker glass, gelas ukur, dll)
- Alat bukan gelas (hot plate, oven, mikrotom, pinset,
dll)
mounting à labelling
n Contoh: pembuatan preparat wholemount embrio
ayam
n Bahan: telur dengan umur tertentu, garam
fisiologis, pewarna: hematoxylin&eosin, alkohol,
formalin
n Alat: gunting, pinset, gelas timbang
(Ex: Whole mount embrio ayam)

Istilah-istilah dalam pembutan preparat

n Fiksasi
n Dehidrasi
n Clearing

Fiksasi
adalah usaha untuk mempertahankan elemen-elemen sel
atau jaringan agar tetap pada tempatnya dan tidak
mengalami perubahan bentuk atau jaringan.
 Tujuan: diperleh gambaran struktur sel/jaringan
seperti pada aslinya
 Macam fiksatif :
- Sederhana (tunggal): alkohol,formalin
- Majemuk (campuran): larutan Bouin (asam
pikrat, formalin, acidium aceticum glaciale/AAG)

Dehidrasi
Adalah penarikan molekul air dari jaringan
 Tujuan : agar jaringan bebas air, sehingga jaringan
lebih terawetkan
 Dehidrasi dilakukan secara bertahap
 Macam dehidrant : ethyl alkohol, aseton SEDIAAN BEKU
Metode Parafin
Tujuan : melihat struktur sel
Cara : narkose à pengambilan bahan à fiksasi à washing à
Clearing dehidrasi à toluol à infiltrasi parafin à penanaman
Adalah proses penarikan molekul dehidrasi (embedding)à pengirisan à affiksing à deparafinasi à staining
dari jaringan. àmounting à labelling
 Clearing agent : xylol, toluol, minyak cengkeh, dll Pewarnaan (staining):
- Zat warna asam : acid fuchsin, eosin
Macam-macam sediaan - Zat warna basa : hematoxylin
n Sediaan sementara : supravital staining
n Sediaan permanen
- Sediaan utuh ( whole mount)
- Sediaan irisan (beku, seloidin, parafin)
- Sediaan untuk jaringan tipis (rentang)
- Sediaan jaringan cair (apus untuk darah, limfe)
- Sediaan untuk jaringan keras

Sediaan Utuh (wholemount)

n Tujuan: melihat struktur internal suatu organisme.
 Insektarium
n Tahapan :
1. Koleksi serangga
2. Mematikan serangga
3. Memasang pada papan kayu
4. Labelling

TEKNIS ASEPTIS
 Tujuan à steril dan mencegah kontaminasi
 Kontaminasi?
 Kontaminan ?
 Kultur murni?

Sterilisasi
 suatu usaha untuk membebaskan bahan-bahan dan
alat-alat dari semua bentuk kehidupan mikrobia
 Cara sterilisasi: mekanik, fisik, kimia,

Sterilisasi secara mekanik

 Dengan filtrasi
 Digunakan untuk bahan-bahan yang tidak tahan
Sediaan Apus panas
n Alat : object glass  Misalnya : serum darah, antibiotika, gula sederhana
n Bahan : cairan jaringan (darah, limfe)  Berkefeld filter
n Cara kerja:  Seitz filter
- teteskan darah/limfe di atas object glass
- letakkan object glass lain dengan posisi sudut 45 0 Sterilisasi Fisik
- Tarik dengan arah yang berlawanan  Alat dan bahan tahan panas
 Insenerasi : > 5000C
 Perebusan : 1000C
 Autoclave : 1210C, tekanan 1 atm, 15 menit
 Pemanasan kering
 Pasteurisasi (batch method & flash method)

Prinsip Kerja Autoclave

Herbarium
n Tujuan?
n Materi herbarium
n Informasi : etiket tempel dan etiket gantung
à kolektor, nomor koleksi, nama lokal spesimen, lokasi
pengambilan dan tanggal.
Sterilisasi secara kimia
 Bahan kimia yang à berupa gas: etilen oksida dan
formaldehid, senyawa kimia yang bersifat cair:
glutaraldehid
 Teknik sterilisasi secara kimia dapat dilakuakan
dengan bahan yang mempunyai daya oksidasi
seperti ozon dan hidrogen peroksida.
Teknik Isolasi
 Isolasi ?
 memindahkan mikrobia tersebut dari
lingkungannya di alam dan menumbuhkan sebagai
biakan murni dalam medium buatan.
 Bagaimana caranya?

Media Pertumbuhan Cara-cara Isolasi

 Nutrisi
 isolasi, pengujian sifat-sifat fisiologi dan
perhitungan jumlah mikrobia dalam suatu bahan
 Media untuk bakteri ≠ media untuk jamur
Syarat Media
 mengandung zat makanan yang mudah digunakan
oleh mikrobia
 tidak mengandung zat penghambat pertumbuhan
 mempunyai tekanan osmose dan tegangan
permukaan
 pH sesuai dengan kondisi mikrobia
 dalam keadaan steril.
 Teknik Goresan (streak plate method)
 Teknik taburan (pour plate method)
 Teknik Sebaran ( spread method)
Teknik Goresan (streak plate method)
 Menghasilkan koloni terpisah
 Media agarà digores dg ose yg berisi koloni bakteri/
jamur
Teknik taburan (pour plate method)
 Pengenceran bertingkat
 Inokulum diteteskan di petridis à dituang media
 Koloni terpisah

Macam Media Pengenceran Bertingkat

Berdasarkan kandungan kimianya:
 Anorganik
 medium organik
 medium sintetik
 medium non sintetik

Berdasarkan konsistensinya:
 Padat
 Semi padat
 Cair

Media Pertumbuhan

Teknik Sebaran ( spread method)

 Pengenceran
 Kultur disebarkan pada media agar plate sterilà
penyebaran dengan alat penyebar yang telah
disterilkan dengan alkohol dan dibakar

firdaus_1222@yahoo.co