Standar Operasional Ruang Media Mikrobiologi

STANDAR
OPERASIONAL
RUANG MEDIA
BALAI LABORATORIUM
KESEHATAN PROVINSI
KALTIM
Oleh:
Radita Ning Anggraeny S., S.Si
Balai Laboratorium Kesehatan

Provinsi Kalimantan Timur
2009
“Mitra Diagnostik Anda Menuju Sehat”

Kata Pengantar
----------------------------------------------------------------
Assalamu’alaikum warrahmatullahi wabarakatuh,
Salam Sejahtera, bagi pembaca sekalian.

Alhamdulillah akhirnya terselesaikan juga penulisan Standar Operasional Ruang Media
di akhir tahun 2009 ini. Panduan ini dilatar-belakangi atas dorongan dan keinginan balai
laboratorium menuju laboratorium yang bersertifikasi ISO 9001 dan Akreditasi Balai
Laboratorium Kesehatan tingkat provinsi (ISO 17025). SOP Ruang Media ini dibuat atas
kerjasama dan masukan banyak pihak. Panduan ini juga merupakan kompilasi dari
beberapa tulisan serupa.
Ucapan terimakasih, saya berikan atas dukungan dan bimbingan pada seluruh staf Balai
Laboratorium Kesehatan Provinsi Kaltim, serta pada PT. Merck Tbk, dan banyak pihak
yang tidak dapat disebutkan satu-persatu.
Semoga buku panduan SOP Ruang Media ini memberikan banyak pencerahan ilmu dan
manfaat dalam aplikasinya bagi pembaca.
Wassalamu’alaikum warrahmatullahi wabarakatuh.
Samarinda, Desember 2009

Penulis

Daftar Isi
----------------------------------------------------------------
Cover Standar Operasional Ruang Media ..................................................................... i

Kata Pengantar .............................................................................................................. ii
Daftar Isi ......................................................................................................................... iii
Latar Belakang ............................................................................................................... iv
Isi
Media .............................................................................................................................. 1
Ruangan & Fasilitas Penunjang .................................................................................... 3
Penyimpanan Bahan & Reagen Media ....................................................................... 3
Pemilihan Bahan Media serta Reagen ........................................................................ 4
Air (Aquadest) ................................................................................................................ 5
Uji Kualitas Media ......................................................................................................... 6
Kontrol Kualitas Ruangan Media ................................................................................. 9
Penyimpanan Media Jadi .............................................................................................10
Pencatatan & Pelaporan ..............................................................................................11
Lemari Pendingin (Refrigerator/ Freezer) ...................................................................11
Hot Plate-Stirrer ............................................................................................................12
Timbangan .....................................................................................................................13
Autoklaf (Autoclave) ......................................................................................................14
Tempat Penyimpanan Alat-alat Gelas .........................................................................16
Meja Peracikan & Persiapan Media ............................................................................16
Laminar Air Flow ...........................................................................................................17
Penangas Air (Waterbath) ............................................................................................17
Pemecahan Masalah (Trouble Shooting) pada Kerusakan Alat ................................17
Alat-alat Gelas serta Logam yang digunakan di Ruang Media ..................................19
Bahan-bahan habis pakai yang diperlukan di Ruang Media .....................................19
Pencucian Alat-alat Gelas .............................................................................................20
Kesalahan-kesalahan yang Terjadi selama Proses Pembuatan Media ....................22
Sistem Pembuangan (Waste Disposal) .......................................................................23
Daftar Pustaka ...............................................................................................................25

Latar Belakang
----------------------------------------------------------------
Uji kualitas media merupakan satu-satunya upaya dalam penjaminan mutu media atau
hasil (output). Jaminan mutu atau kualitas adalah seluruh rangkaian kegiatan
laboratorium untuk meyakinkan hasil-hasil yang dikeluarkan dengan
mempertimbangkan segi-segi reabilitas, kecepatan, biaya dan relevansinya terhadap
klinis serta lingkungan.
Sebagai komponen penting dalam pelayanan kesehatan, hasil laboratorium digunakan
untuk penetapan diagnosis, pemberian pengobatan, serta penentuan prognosis. Oleh
karena itu hasil pemeriksaan laboratorium harus selalu terjamin mutunya.
Masalah kualitas pada bidang kimia klinik agak lebih sederhana dibanding bidang
mikrobiologi. Karena kualitas hasil akhir dapat diukur dengan parameter secara obyektif
terutama akurasi dan presisi, dimana kedua-duanya dapat dipertanggung jawabkan,
serta penilaian berupa angka atau statistik.
Mikrobiologi merupakan suatu cabang ilmu yang kurang kuantitatif sehingga pengertian
kualitas hasil akhir lebih ditekankan kepada kesempurnaan teknis. Untuk mencapai,
menjaga, melakukan perbaikan berkesinambungan dan meningkatkan kualitas hasil
akhir, mutlak perlu dilaksanakan pemantapan mutu (Quality Assurance) yang mencakup
komponen: Pemantapan Mutu Internal, Pemantapan Mutu Eksternal, Akreditasi, Audit,
Validasi Hasil, Diklat Berkelanjutan. Pelaksanaan pemantapan mutu bidang mikrobiologi
merupakan manajemen pengendalian mutu laboratorium mikrobiologi mencakup:
Pengendalian mutu tahap pra analitik, Pengendalian mutu tahap analitik dan
Pengendalian mutu tahap pasca analitik.
Kualitas pemeriksaan bidang mikrobiologi sangat bergantung kepada kualitas media
yang dipakai. Media kultur dapat disediakan baik dalam bentuk base (dasar) kering
secara komersial, dari racikan bahan-bahan baku yang berbeda atau dari media yang
siap pakai yang dikemas dalam tabung dan cawan plastik. Walaupun media siap pakai
ini masih diperdebatkan penggunaannya, kebanyakan ahli sangat setuju terutama
dalam bentuk cairan karena lebih efisien dan ekonomis.
Perusahaan-perusahaan komersial yang ternama itu juga mempunyai program quality
control sendiri dan dapat membuat media dengan hasil jauh lebih baik, serta kepekaan
yang lebih tinggi dibanding yang dibuat sendiri oleh laboratorium pemakai. Jika biaya
tenaga kerja meningkat dan waktu yang dibutuhkan untuk quality control bertambah
maka penyediaan media dari ramuan bahan-bahan mentah tidak dianjurkan.
Bakteri seperti mahluk hidup lainnya memerlukan nutrisi untuk pertumbuhan.
Pengetahuan akan nutrisi pertumbuhan ini akan membantu di dalam mengkultivasi
(penanaman), mengisolasi dan mengidentifikasi mikroorganisme. Mikroorganisme
memiliki karakteristik dan ciri-ciri yang berbeda di dalam persyaratan pertumbuhannnya.
Ada mikroorganisme yang bisa hidup hanya pada media yang mengandung sulfur dan
ada pula yang tidak mampu, dan hal lain seterusnya. Karakteristik persyaratan
pertumbuhan mikroorganisme.
Bakteri atau mikroorganisme lainnya agar dapat dibiakkan didalam laboratorium
memerlukan media yang memungkinkan tumbuh dan berkembang secara optimal. Oleh
karena itu media pembiakan harus mengandung cukup nutrien untuk pertumbuhan
mikroorganisme, selain suhu dan pH. Meskipun persyaratan nutrien bakteri amat
beragam, namun sebagai mahluk hidup, mereka mempunyai kebutuhan dasar yang
sama, yaitu meliputi air, karbon, energi, mineral.
Untuk itu hasil laboratorium mikrobiologi yang berkualitas tinggi dapat diartikan sebagai
suatu laporan yang sangat membantu dalam pencegahan atau penanggulangan
penyakit. Tes laboratorium yang dikerjakan dengan sempurna diharapkan akan
berkualitas tinggi, jika didukung media dan bahan dasar yang baik pula. Oleh karenanya
penulisan panduan ini memiliki sasaran yaitu standar yang baik pada media.
STANDAR OPERASIONAL RUANG MEDIA
L A B O RA T O R I U M K E S E H A TA N P R O V I N S I K A L I M A N T A N T I M U R
Media
Media/ media adalah suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi (nutrient) yang
dipakai untuk menumbuhkan mikrobia.
Supaya mikrobia dapat tumbuh dengan baik dalam suatu media, perlu dipenuhi syarat-
syarat sebagai berikut:
1. Harus mengandung semua nutrisi yang mudah digunakan oleh mikrobia.

2. Harus mempunyai tekanan osmose, tegangan permukaan dan pH yang sesuai.
3. Tidak mengandung zat-zat penghambat.
4. Harus steril.
Jenis media dapat digolongkan berdasarkan:

a. Susunan kimia
Berdasarkan susunan kimianya, terdapat berbagai jenis media yaitu:
1) Media anorganik : media yang tersusun dari bahan-bahan anorganik, misalnya
silika gel.
2) Media organik : media yang tersusun dari bahan-bahan organik.
3) Media sintetis : media buatan, dengan ramuan yang tertentu, baik ready for use
maupun ramuan sendiri.
4) Media non sintetis : media alamiah, misalnya media wortel, media kentang dan
lain-lain.
b. Konsistensi/ kepadatan
Berdasarkan konsistensinya, terdapat berbagai jenis media yaitu:
1) Media cair (liquid medium), yaitu media bentuk cair (broth) misalnya; air pepton,
Nutrient Broth, Tarozzi dan lain-lain.
2) Media setengah padat (semi solid medium), misalnya; SIM, Carry & Blair, dan
lain- lain.
3) Media padat (solid medium), yaitu media bentuk padat/ beku misalnya; Potato
Dextrose Agar, Nutrient Agar, Blood Agar, serta media-media lainnya yang
berbasis agar.
1
Page
Written by:
2009
c. Fungsi
Berdasarkan fungsinya, terdapat berbagai jenis media yaitu:
1) Transport media: perbenihan yang digunakan untuk mengirimkan spesimen
dari suatu tempat ke laboratorium.
Contoh : Carry and Blair untuk tinja/ rectal swab
Stuart dan medium Amies untuk usap nasofaring
2) Enrichment media: perbenihan yang digunakan untuk memperbanyak bakteri,
baik yang ada di dalam spesimen maupun koloni-koloni yang kecil-kecil.
Contoh : Brain Heart Infussion Broth untuk darah (aerob)
Thioglycolate Broth untuk darah (anaerob)
3) Enrichment exclusive media: perbenihan yang dapat memperbanyak
segolongan bakteri sedangkan bakteri lainnya dihambat atau tidak dapat
tumbuh.
Contoh : Alcalis pepton water untuk Vibrio spp.
Selenite Broth, Tellurite Broth, Azide broth untuk Salmonella spp.
4) Exclusive media: perbenihan yang hanya dapat ditumbuhi segolongan bakteri
saja, sedangkan bakteri lainnya tidak tumbuh dan dapat dibeda-bedakan koloni
spesies satu dengan lainnya.
Contoh : Blood Tellurite plate untuk Vibrio cholera
Azide agar untuk Salmonella
5) Selective media: perbenihan yang dapat digunakan untuk membedakan
golongan satu dengan lainnya, sehingga dapat dipilih koloni-koloni bakteri
yang akan dicari.
Contoh : Blood agar, Brain Heart Infussion agar
Salmonella Shigella Agar untuk Salmonella Shigella
d. Cara pembuatan
Berdasarkan cara pembuatannya, terdapat 2 jenis media yaitu:
1) Media buatan sendiri
a) dari bahan dasar
b) dari media dehidrasi (dehydrated)
2) Media jadi/ instan (komersial)
2
Page
Written by:
2009
Ruangan & Fasilitas Penunjang
Untuk pembuatan media khusus di bidang mikrobiologi sebaiknya memiliki ruangan

tersendiri. Persyaratan standar konstruksi ruangan media skala Balai Laboratorium
Kesehatan Provinsi dan Rumah Sakit adalah:
1. Dinding terbuat dari bahan porselin atau keramik setinggi 1,5 m dari permukaan
lantai, sisanya dicat dengan warna terang.
2. Tinggi langit-langit antara 2,70 – 3,30 m dari lantai.
3. Lebar pintu minimal 1,20 m dan tinggi minimal 2,10 m.
4. Ambang bawah jendela minimal 1,00 m dari lantai.
5. Semua stop kontak dan saklar dipasang minimal 1,40 m dari lantai.
6. Lantai terbuat dari bahan yang kuat, mudah dibersihkan, berwarna terang dan
tahan terhadap korosi akibat bahan kimia.
7. Meja beton dilapisi porselin/ keramik dengan tinggi 0,80 – 1,00 m.
8. Meja untuk instrumen elektronik harus tahan getaran, dengan permukaan berlapis
polyvinil, atau kaca atau porselin (tanpa nat).
9. Penerangan yang cukup, dengan jenis lampu bercahaya putih atau neon.
10. Aliran udara yang terbatas dilengkapi Air Conditioner untuk menghindarkan dari
kelembaban dalam ruangan. Dibatasi dengan sekat atau pintu kedua, sehingga
ruangan tidak kontak langsung dengan udara luar yang dapat menyebabkan
kontaminasi.
11. Temperatur serta kelembaban ruangan yang terkontrol dengan cara mensetting AC
ruangan sekitar 20-22 °C dengan kelembaban sekitar 60-80 %.
12. Lemari atau rak-rak penyimpanan media yang terbuat dari bahan kaca-aluminium
atau kayu (bebas rayap), dengan kondisi terlindung dari cahaya dan tidak lembab.
Penyimpanan Bahan & Reagen Media
Bahan laboratorium yang sudah ada harus ditangani secara cermat dengan
mempertimbangkan:
1. Perputaran pemakaian dengan menggunakan kaidah: pertama masuk-pertama
keluar (FIFO= first in - first out), yaitu bahwa barang yang lebih dahulu masuk
persediaan harus digunakan lebih dahulu.
3
Page
Written by:
2009
Hal ini adalah untuk menjamin barang tidak rusak akibat penyimpanan yang terlalu
lama.
2. Tempat penyimpanan.
3. Suhu/ kelembaban.
4. Lama/ waktu penyimpanan dengan melihat masa kadaluarsa.
5. Incompatibility.
Pemilihan Bahan Media serta Reagen
Bahan media serta reagen yang akan digunakan sebaiknya merupakan bahan yang
baik, tepat dan sesuai dalam peruntukannya. Oleh karenanya diperlukan upaya
pemilihan bahan yang benar pula.
Pada umumnya untuk memilih bahan laboratorium yang akan dipergunakan harus
mempertimbangkan hal-hal sebagai berikut:
1. Kebutuhan
2. Produksi pabrik yang telah dikenal
3. Deskripsi lengkap dari bahan atau produk
4. Mempunyai masa kadaluarsa yang panjang
5. Volume atau isi kemasan
6. Digunakan untuk pemakaian ulang atau sekali pakai
7. Mudah diperoleh di pasaran
8. Besarnya biaya tiap satuan (nilai ekonomis)
9. Pemasok/ vendor
10. Kelancaran dan kesinambungan pengadaan
11. Pelayanan purna jual
Hal-hal khusus yang harus diperhatikan pada media dan reagen adalah:
Media
a. Media dehidrasi
1. Media yang didehidrasi tidak dapat disimpan untuk waktu yang tak terbatas,
terutama bila penutup wadah telah dibuka.
2. Jumlah keseluruhan harus dikemas dalam wadah yang akan habis digunakan
4
dalam 1-2 bulan.

Page
Written by:
2009
3. Saat diterima, semua wadah tertutup rapat.

4. Tanggal penerimaan harus dicatat pada setiap wadah.
5. Semua media dehidratasi harus disimpan di tempat gelap, sejuk (suhu < 25° C)
dan berventilasi baik. Rak-rak penyimpanan tidak boleh ditempatkan di dekat
autoklaf atau tempat pencucian karena suhu dan kelembaban yang tinggi.
6. Tanggal membuka kemasan harus dicatat pada wadah tersebut.
b. Media yang telah dilarutkan:

1. Hindari terkena cahaya matahari langsung atau panas.
2. Media yang diperkaya dengan darah, bahan organik atau antibiotik harus
disimpan di dalam lemari es.
3. Harus dijaga agar media tidak mengalami kekeringan. Untuk media dalam
petridish sebaiknya disimpan dalam kantong plastik tertutup dan disimpan di
dalam lemari es.
4. Harus diperhatikan batas lama penyimpanannya, yaitu:
• Tabung dengan sumbat kapas : 1 minggu
• Tabung dengan sumbat longgar : 1 minggu
• Cawan petri (dalam bungkus plastik) : 3 minggu
• Botol dengan tutup ulir (screw cap) : 3 bulan
Reagen
Adapun beberapa reagen yang dibutuhkan dalam proses pembuatan media disimpan
dan diusulkan dalam logistik secara berkala oleh penanggung jawab ruangan.
Penyimpanan reagen didasarkan atas sifat reagen; berbahaya, korosif, eksplosif, dll.
Reagen-reagen tersebut dibuatkan buku log reagen yang mencakup; nama jenis
reagen, merek, fungsi, tanggal pengadaan (produksi), tanggal kadaluarsa.
Air (Aquadest)
Akuadestilata/ aquadest kemungkinan merupakan bahan termurah dari semua bahan

yang digunakan di laboratorium, tetapi tetap merupakan bahan penunjang utama
5
dalam pembuatan media. Akuades yang merupakan bahan terpenting dan yang paling
Page
Written by:
2009
sering digunakan, karenanya kualitas air yang digunakan harus memenuhi standar
seperti halnya bahan lain yang digunakan dalam analisis.
Laboratorium harus menetapkan tingkat kualitas air yang diperlukan sesuai dengan
jenis pemeriksaan yang dilakukan.
Syarat:
1. pH sekitar 7 (bisa turun karena terpapar dengan udara)
2. Bebas materi
3. Kekeruhan
4. DHL (Daya Hantar Listrik)
Uji Kualitas Media
Agar media mempunyai kualitas seperti yang diharapkan perlu dilakukan uji kualitas,
seperti uji sterilitas dan uji spesifitas. Uji sterilisasi di lakukan untuk mengetahui
apakah bahan atau sediaan yang harus steril, sudah memenuhi syarat atau tidak. Uji
sterilitas dapat dilakukan dengan mengeramkan (inkubasi) media selama 2-3 hari di
dalam inkubator. Pada media idealnya tidak boleh ditemukan pertumbuhan bakteri.
Akan tetapi koloni yang tumbuh < 2 dapat diterima.
Sedangkan uji spesifitas dilakukan dengan menggunakan bakteri kontrol yang sesuai
dengan jenis dan fungsi media yang dibuat. Hal ini bermanfaat untuk membantu
mengetahui kelompok dan jenis serta fungsi media yang dibutuhkan.
Uji kualitas media mencakup aspek yang luas, baik media buatan sendiri maupun
media jadi, oleh karena itu penyiapan media harus mendapat perhatian.
Hal-hal yang perlu diperhatikan dalam penyiapan media:
a. Sampel media dehidrasi ditimbang dan ditambahkan ke dalam air suling dan
bebas mineral, lalu dicampur untuk membuat suspensi yang homogen.
Kemudian panaskan untuk melarutkan zat-zat dalam medium. Jumlah panas
yang digunakan harus diatur hanya cukup sampai membuat larutan yang
sempurna, kecuali dinyatakan lain dalam prosedur. Agitasi yang tetap selama
proses pemanasan penting sebab bongkahan kecil agar, kecuali dalam
suspensi, dapat turun ke dasar wadah dan pemecahannya memerlukan jumlah
6
panas yang tinggi. Pemanasan lebih lama akan mengakibatkan denaturasi

Page
Written by:
2009
protein, karamelisasi karbohidrat, inaktivasi zat-zat gizi dan kehilangan kadar

air yang berarti karena penguapan.
b. Media dilarutkan ke dalam wadah yang berukuran cukup dan sterilisasi dengan
autoklaf, setelah selesai harus segera dikeluarkan dari autoklaf untuk
menghindari pemanasan yang lebih lama. Wadah berisi media agar harus
dipindahkan ke penangas air (waterbath) bersuhu 48-50° C sampai mencapai
suhu yang diperlukan. Penyimpanan lebih lama di penangas air harus dihindari.
c. pH setiap batch media harus diperiksa dengan pH meter setelah media

dibiarkan dingin sampai suhu kamar. Untuk menguji media agar, dapat
digunakan elektrode permukaan atau permukaan biasa. Media yang
menyimpang > 0,2 unit pH dari pH optimum harus dibuang.
d. Media dapat dituang ke dalam tabung atau cawan petri dalam ruangan bersih
atau di bawah aliran udara laminar. Ruangan tersebut harus dijaga cukup
terang, bebas dari bahan-bahan lain (kecuali yang diperlukan untuk prosedur
penuangan media) dan bebas dari lalu lalang selama proses pembagian. Setiap
usaha harus dilakukan untuk mencegah kontaminasi media pada tahap ini.
Oleh karenanya selama proses pembuatan media sebaiknya diawasi oleh seorang
pengawas, agar dapat terjamin kualitasnya. Kualitas media harus diperiksa dahulu
sebelum media digunakan. Ada bermacam-macam cara untuk menguji mutu media
yang telah dibuat, yaitu:
a. Secara visual
Yaitu dengan memperhatikan atau melihat warna, kekeruhan dan lain-lain.
Contoh:
1) Media gula-gula yang dilengkapi tabung Durham bila terlihat gelembung
udara berarti sudah tidak dapat dipergunakan lagi.
2) Bila warna media tidak sesuai dengan warna standar maka harus dicurigai
adanya perbedaan pH, untuk itu periksalah dengan pH meter.
Bila pH media berbeda ± 0,2 satuan, tambahkan asam atau basa atau dibuat
baru.
7
Page
Written by:
2009
b. Uji sterilitas
Uji sterilitas merupakan suatu keharusan terutama pada media yang diperkaya
dengan bahan-bahan tertentu seperti agar darah atau agar coklat.
Cara:
1) Ambil sejumlah 5 % dari tiap batch media yang dibuat.
2) Inkubasi selama 1-2 hari pada suhu 35° C.
3) Bila terdapat pertumbuhan lebih dari 2 koloni mikroorganisme/ cawan petri
atau lebih, berarti seluruh media dari batch tersebut tidak dapat dipakai.
c. Uji spesifitas dengan penanaman mikroorganisme kontrol positif dan kontrol

negatif
Mikroorganisme kontrol kualitas (strain kuman) adalah mikroorganisme spesifik
yang seharusnya tumbuh pada media tertentu. Mikroorganisme tersebut
memiliki ciri morfologi, biokimia, serologi yang dapat diuji dan mampu
menunjukkan stabilitas reproduksi yang tetap bilamana ditempatkan pada
kondisi yang sesuai.
Uji media dengan menggunakan mikroorganisme kontrol positif dan kontrol
negatif ini dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Uji media dengan menggunakan kuman

Media Inkubasi Organisme kontrol Hasil yang diharapkan
Bile aesculin agar 24 jam S. faecalis Tumbuh & menjadi hitam
Tidak tumbuh
S. pyogenes
Blood agar 24 jam CO2/ S. pyogenes Tumbuh & β-hemolisis
Candle jar S. pneumoniae Tumbuh & α-hemolisis
Chocolate agar 24 jam CO2 Haemophilus influenzae Tumbuh
Decarboxidase
- lysine 48 jam S. typhymurium Positif
Shigella flexneri Negatif
- ornithine 48 jam S. typhymurium Positif
K. pneumoniae Negatif
- arginine 48 jam S. typhymurium Positif
(dihydrolase) K. pneumoniae Negatif
Gelatine (rapid test) 24 jam E. coli Negatif
Kligler’s iron agar & Serratia marcescens Positif
Triple iron sugar agar 24 jam Citrobacter freundi A/A gas + H2S
S. typhymurium K/A gas + H2S
S. flexneri K/A
Acinetobacter Tidak ada perubahan
MacConkey agar 24 jam aerob E. coli Koloni merah
8
P. mirabilis Koloni tidak berwarna

Page
Malonate broth 24 jam E. coli Negatif (hijau)

K. pneumoniae Positif (biru)
Written by:
2009
Manitol salt agar 24 jam aerob S. aureus Koloni kuning

T. epidermidis Koloni merah muda
E. coli Tidak tumbuh
Methyl red/ Voges 48 jam E. coli Positif/ negatif
Proskauer K. pneumoniae Positif/ negatif
Mueller Hinton Agar 24 jam E. coli ATCC 25922 Pertumbuhan koloni
S. aureus ATCC 25923 tersuspensi merata
P. aeruginosa ATCC 27853
Nitrate broth 24 jam E. coli Positif
Acinetobacter Negatif
OF dextrose (tanpa 24 jam P. aeruginosa Oksidasi pada
parafin) permukaan
Acinetobacter calcoaceticus Tidak ada perubahan
biovar Iwofii
Peptone water 24 jam E. coli Positif
(indole) P. mirabilis Negatif
Phenylalanine 24 jam E. coli Negatif
deaminase P. mirabilis Positif
Rappaport broth 24 jam S. typhimurium Tumbuh setelah
subkultur
Selenite broth E. coli Tumbuh tanpa subkultur
Tetrahionate broth
Salmonella/ Shigella 24 jam aerob E. coli Tumbuh
agar S. typhimurium Tidak tumbuh
24 jam suhu Yersinia enterolitica Tumbuh tidak berwarna
kamar Shigella flexneri Tumbuh tidak berwarna
Simmons Citrate 48 jam E. coli Tidak tumbuh
K. pneumoniae Tumbuh warna biru
TCBS 24 jam Vibrio (non aglutinasi) Koloni kuning
Thayer Martin agar 24 jam CO2 N. meningitidis Tumbuh
M. gonorrhoeae Tumbuh
Staphylococcus Tumbuh
Candida albicans Tumbuh
Thioglycollate broth 24 jam Bacteroides fragilis Tumbuh
Urea medium 24 jam E. coli Negatif
P. mirabilis Positif (merah muda)
Sehingga untuk keperluan uji kualitas diatas, laboratorium idealnya memiliki stok
kultur (strain kuman) sebagai syarat uji kualitas kontrol.
Kontrol Kualitas Ruangan Media
Sebagai ruang/ tempat penyimpanan, peracikan dan pengolahan media, diperlukan

kondisi ruangan yang cukup terkontrol secara kualitatif. Syarat bersih saja pada ruang
media belum cukup apabila tidak diuji dengan kontrol sterilitas. Belum ada standar
9
baku mutu yang telah ditetapkan untuk kontrol kualitas (sterilitas) pada ruang media,
Page
Written by:
2009
tetapi hal ini dilakukan untuk meningkatkan pengawasan personal yang bertanggung
jawab terhadap media tentang keadaan sterilitas ruangannya. Selain itu, keadaan
kebersihan ruang media pun dapat diketahui serta analis/ personal yang bertanggung
jawab yakin akan jaminan mutu dari media yang dihasilkan.
Tindakan yang dapat dilakukan adalah menguji secara berkala dengan menempatkan
media NA plate atau PCA steril dalam keadaan terbuka di beberapa sudut ruangan
selama setengah hingga satu jam. Kemudian media diinkubasi selama 24 jam pada
temperatur 35-37°C, atau pada 44,5 °C khusus untuk media selektif E. coli, lalu
dihitung jumlah koloni bakteri yang tumbuh. Hasil yang didapat dicatat pada catatan
khusus, dan dapat diberikan solusi terhadap kondisi ruang media yang kurang
memenuhi syarat.
Kebersihan ruangan dijaga setiap saat, termasuk meja peracikan, lemari penyimpan
stok media serta lemari pendingin penyimpanan media jadi. Bila menggunakan
pendingin ruangan (Air Conditioner) idealnya dibersihkan secara berkala minimal 1 kali
dalam 2 bulan, bila perlu sekali dalam 6 bulan dilakukan fumigasi menggunakan tablet
formaldehid.
Penyimpanan Media Jadi
Setelah pembuatan media instan (siap pakai) selesai, media serta bahan pendukung
yang ditempatkan dalam wadah-wadah petridish (dalam posisi terbalik) segera
disimpan di dalam kantung-kantung plastik bening yang telah diberi keterangan
berupa; Nama media dan tanggal pembuatan, disimpan dalam refrigerator dengan
suhu yang relatif stabil ± 4°C.
Adapun media yang menggunakan wadah tabung-tabung reaksi bertutupkan kapas,
sebaiknya ditutup lagi dengan aluminium foil atau plastic wrap atau parafilm. Agar
menghindari evaporasi atau penguapan dari media selama penyimpanan, serta dapat
menghindarkan media dari kontaminasi. Hal tersebut mampu menjamin kualitas
media dan masa simpan yang relatif lebih lama. Tetapi banyaknya volume media yang
dibuat disesuaikan kembali dengan kebutuhan laboratorium atau trend pemeriksaan.
Sehingga media siap pakai yang dibuat sifatnya akan selalu fresh bagi spesimen uji.
10
Page
Written by:
2009
Pencatatan & Pelaporan
Pencatatan dan pelaporan setiap kegiatan di dalam laboratorium, khususnya di ruang

media diperlukan untuk perencanaan, pemantauan dan evaluasi serta pengambilan
keputusan untuk peningkatan kualitas pemeriksaan yang berdampak pada
peningkatan kualitas laboratorium. Untuk itu kegiatan dalam ruangan media,
pencatatan dan pelaporan harus dilakukan secara cermat dan teliti, karena kesalahan
dalam pencatatan dan pelaporan akan mengakibatkan kesalahan dalam menetapkan
suatu tindakan.
1. Pencatatan
Pencatatan kegiatan di ruang media dilakukan sesuai dengan jenis kegiatannya.
Ada 4 jenis pencatatan, yaitu:
1) Pencatatan kegiatan pembuatan media
2) Pencatatan logistik
3) Pencatatan kegiatan pemeliharaan alat
4) Pencatatan kegiatan pemantapan mutu internal, seperti uji sterilitas media
2. Pelaporan
Pelaporan kegiatan di ruang media meliputi:
1) Laporan kegiatan rutin harian & bulanan
2) Laporan akhir tahun dan evaluasi sebagai bahan referensi pengusulan bahan
tahun berikutnya.
Sebagai penunjang dalam pembuatan media diperlukan alat-alat berikut. Untuk

penggunaan dan perawatannya terlebih dahulu user harus mengenali sifat alat dan
harus memahami cara dan langkah-langkahnya.
Lemari Pendingin (Refrigetor/ Freezer)
1) Catat suhu setiap hari dengan termometer atau suhu yang terlihat pada digital
display pada freezer.
11
Termometer yang digunakan harus sesuai dengan suhu alat yang dikalibrasi,
Page
misalnya 2-8.
Written by:
2009
2) Secara berkala periksa dengan menggunakan termometer standar.

3) Cocokkan hasil yang didapat antara suhu yang ditunjukkan oleh thermometer
digital display dengan termometer standar.
Cara penggunaan lemari pendingin (Refrigerator/ Freezer)
1. Lemari pendingin (refrigerator), lemari pembeku (freezer) dan tabung es kering (dry
ice) harus dibersihkan dan esnya dicairkan (defrost) secara teratur.
2. Buang ampul, tabung, botol dan wadah lain yang pecah selama disimpan. Gunakan
alat pelindung muka dan sarung tangan karet tebal saat bekerja. Setelah
dibersihkan, permukaan dalam lemari pendingin dan lemari pembeku harus
desinfeksi dengan desinfektan yang tidak korosif.
3. Semua wadah yang disimpan harus diberi label yang jelas berisi nama bahan,
tanggal disimpan dan nama orang yang menyimpan.
4. Wadah yang tidak berlabel dan bahan yang sudah kadaluarsa harus diautoklaf.
5. Cairan yang mudah terbakar tidak boleh disimpan dalam lemari pendingin.
Pemeliharaan dan Pencegahan
Bersihkan dan defrost freezer lemari pendingin sekali setiap bulan. Setiap hari catat
suhu yang ditunjukkan oleh termometer.
Hot plate-stirrer
Alat ini berguna untuk melarutkan (memanaskan) atau menghomogenkan media serta
reagen.
1. Gelas piala atau erlenmeyer yang digunakan upayakan pada bagian bawahnya
kering.
2. Usahakan alat selalu dalam keadaan bersih, hindari panas yang berlebihan dan
meninggalkan media yang sedang dipanaskan agar tidak menyebabkan media
gosong.
3. Catat penggunaannya; Nama pengguna, No Hot plate yang digunakan, serta
12
sistem data alat yang dijalankan (% panas dan kecepatan putar).

Page
Written by:
2009
4. Gunakan magnetic stirrer yang sesuai dengan standar untuk menghindari

gesekan pada gelas piala maupun erlenmeyer.
5. Sebelum alat dimatikan, pastikan pada setiap tempat pemanas tidak dalam
keadaan ON dengan meng-NOL-kan semua tempat pemanas.
Timbangan
1. Periksalah selalu selalu jarum penunjuk angka (angka menunjuk 0) setiap kali
akan menimbang.
2. Gunakan selalu pinset untuk mengangkat anak timbangan.
3. Bahan yang akan ditimbang harus sesuai suhu kamar.
4. Mengurangi atau menambah beban dilakukan pada saat timbangan dalam
keadaan istirahat.
5. Pintu kotak selalu tertutup pada waktu menimbang.
a. Timbangan Elektrik (Electrical Balance)
Kalibrasi timbangan dilakukan setiap hari dengan memakai anak timbangan standar
yang bersertifikasi kelas S.
Cara kalibrasi anak timbangan:
1) Lakukan penimbangan anak timbangan standar.
2) Catat hasil penimbangan.
3) Ulangi sampai 5 kali, hitung nilai rata-rata toleransi perbedaaan berat yang
masih dapat diterima adalah:
Untuk berat 1 – 50 mg = ± 0,014 mg
Untuk berat 100 – 500 mg = ± 0,025 mg
Untuk berat 1 – 5 mg = ± 0,054 mg
b. Timbangan Analitik (Analytical Balance)
Kalibrasi anak timbangan dilakukan dengan anak timbangan standar yang

bersertifikasi kelas M, yang memperlihatkan nilai nominal setiap anak timbangan,
deviasi sistematik dari nilai nominal, kelas ketelitian, ketidak pastian, nilai massa dan
massa jenis bahan atau volume.
13
Cara kalibrasi anak timbangan:

Page
1) Periksalah titik nol, jarum penunjuk angka harus menunjukkan angka nol.
Written by:
2009
2) Letakkan anak timbangan standar yang teringan.

Timbang anak timbangan yang dipakai sehari-hari.
Baca dan catat hasilnya.
3) Ulangi penimbangan dengan anak timbangan standar yang lebih berat.
4) Anak timbangan dianggap masih tepat bila berat yang ditunjukkan oleh anak
timbangan tidak menyimpang lebih dari 0,1 % dari berat masing-masing anak
timbangan standar.
Bersihkan alas timbang dan layar digital dari debu, ceceran zat yang ditimbang setiap
habis menggunakan.
Autoklaf (Autoclave)
Penggunaan autoklaf dengan prinsip penguapan dalam kondisi jenuh dan bertekanan
(autoclaving) adalah cara yang paling efektif dan terbaik untuk mensterilkan bahan
atau alat-alat laboratorium. Untuk berbagai tujuan, siklus berikut akan memastikan
sterilisasi yang terpat bagi proses penggunaan autoklaf:
• Waktu tinggal 3 menit pada 134°C
Bahan atau alat yang akan didesinfeksi atau sterilisasi di dalam ruang autoklaf harus
dibungkus dan tidak dikencangkan atau tetap longgar agar untuk kemudahan
perpindahan udara dan penetrasi uap. Penggunaan kantong harus dilakukan dengan
benar agar uap air tetap dapat menjangkau isinya.
Aturan berikut dapat memperkecil resiko yang mungkin terjadi ketika mengoperasikan
bejana bertekanan.
1. Tanggung jawab untuk pengoperasian dan pemeliharaan rutin harus diserahkan
kepada operator yang terlatih dan program pencegahan yang meliputi pemeriksaan
14
reguler pada ruang autoklaf, lapisan pintu dan semua gauges serta kontrol oleh
personil yang berkompeten.
Page
Written by:
2009
2. Uap air harus dijenuhkan dan terbebas dari bahan-bahan penghambat atau korosif
atau bahan kimia lain, yang bisa mencemari materi yang telah disterilkan.
3. Semua bahan yang akan diautoklaf harus berada di dalam kontainer yang
memudahkan perpindahan udara dan penetrasi panas yang baik: ruang dalam
autoklaf jangan terlalu padat sehingga uap air tidak bisa menjangkau bahan atau
alat yang disterilisasi dengan merata.
4. Untuk autoklaf tanpa alat keselamatan interlocking yang mencegah pintu dibuka
ketika ruang autoklaf diberi tekanan, saluran uap utama harus tertutup dan
temperatur dibiarkan untuk turun dibawah 80°C sebelum pintu dibuka.
5. Operator perlu memakai sarung tangan dan perlindungan wajah perlindungan
wajah pelindung muka (visor) yang sesuai untuk perlindungan ketika membuka
autoklaf, bahkan ketika temperatur telah turun dibawah 80°C.
6. Pada setiap monitoring rutin untuk menjaga kinerja autoklaf, indikator biologi atau
thermocouples seharusnya ditempatkan di pusat dari setiap beban. Monitoring
reguler dengan thermocouples dan alat perekam dalam “kasus terburuk” sangat
diperlukan untuk menentukan siklus operasional yang sesuai.
7. Saringan saluran ruang autoklaf (jika tersedia) harus dikeluarkan dan dibersihkan
setiap hari.
8. Perawatan yang baik harus dikerjakan untuk memastikan bahwa klep untuk udara
keluar dari autoklaf panci bertekanan tidak terhalangi oleh kertas, dan benda
lainnya yang dimasukkan.
Bersihkan alat, serta mengganti air (akuades) dalam autoklaf sekali dalam sebulan.
Uji Sterilitas Autoclave

Secara berkala yaitu sekali dalam sebulan autoclave yang biasa digunakan untuk
pembuatan media diuji kesterilannya. Adapun uji sterilitas yang paling sederhana
adalah dengan menggunakan autoclave tape indicator, yang biasa ditempelkan pada
setiap kemasan bahan yang akan disterilisasi. Uji sterilitas autoklaf lainnya bisa
menggunakan thermocouples seperti yang telah dijelaskan diatas, yaitu dengan cara
15
berikut.
Page
• Meletakkan thermocouples tepat ditengah bahan yang akan disterilisasi.
Written by:
2009
• Kemudian setelah turut disterilisasi bersama bahan, thermocouples diinkubasi

dalam inkubator (37° C, 24 jam), jika terjadi kekeruhan maka bahan yang
disterilisasi bersama thermocouples dianggap tidak streril dan autoklaf perlu
dibersihan dengan desinfektan kemudian diulang proses sterilisasinya.
Cara lain yang juga sederhana untuk dilakukan adalah dengan membungkus sekitar
10 gr tanah dengan aluminium foil dan kertas, kemudian turut disterilisasi bersama
bahan. Lalu tanah tersebut diinkubasi ke dalam larutan media penyubur (37° C, 24
jam), jika terjadi kekeruhan dalam media tersebut maka bahan yang disterilisasi
bersama tanah dianggap tidak steril dan autoklaf perlu dibersihkan dengan
desinfektan kemudian diulang proses sterilisasinya.
Tempat Penyimpanan Alat-alat Gelas
Umumnya berbentuk lemari atau rak display atau laci, sehingga tampak dari luar alat-
alat gelas yang sedang tersimpan. Bahan lemari atau rak dapat terbuat dari kayu-kaca
atau aluminium-kaca, ataupun plastik.
Tata cara penyimpanan alat-alat gelas adalah sebagai berikut.
1. Simpan alat-alat gelas dalam keadaan kering dan bersih.
2. Apabila tempat penyimpan tertutup, sediakan silica gel sebagai kontrol
kelembaban.
3. Apabila tempat penyimpanan bergabung dengan tempat tiris setelah pencucian
alat, upayakan terdapat penampung air pada bagian bawah lemari.
4. Simpan alat-alat gelas sesuai dengan kelompok jenisnya, dengan ukuran kecil
berada paling depan.
5. Buat inventaris alat-alat gelas yang ada di ruang media serta catat logistik alat-
alat gelas yang didistribusikan dari gudang.
Meja Peracikan & Persiapan Media
Untuk menyiapkan media, diperlukan meja untuk menyusun bahan serta alat. Meja
peracikan haruslah bersih. Sebaiknya permukaan meja terbuat dari bahan porcelain
atau polivinyl, sehingga mudah untuk dibersihkan. Bahan meja sebaiknya dipilih bahan
16
yang kuat dan memiliki desain kokoh, sehingga tidak mudah goyang. Tinggi meja
Page
sekitar 1,1 – 1,25 m. Diatas meja peracikan sebaiknya tidak ditumpuk berbagai benda
Written by:
2009
yang tidak diperlukan dalam persiapan media. Hal tersebut dapat mengganggu proses
preparasi media. Alat timbangan dapat diletakkan di atas meja preparasi media
ataupun terpisah pada meja tersendiri dengan konstruksi yang permanen.
Laminar Air Flow
Untuk pembuatan media siap pakai, baik dalam wadah petridish maupun tabung
reaksi, pasca media disterilisasi sebaiknya menggunakan laminar air flow dalam
penuangannya. Alat ini dilengkapi dengan lampu UV dan pompa-filter udara, sehingga
dapat mengurangi adanya resiko kontaminasi pada pembuatan media siap pakai.
Penggunaan laminar air flow sebaiknya dibersihkan dengan menyemprotkan alkohol
70% pada seluruh permukaan bagian dalam sebelum dan sesudah penggunaan, serta
menyalakan lampu UV ketika tidak digunakan.
Penangas Air (Waterbath)
Yang perlu dipantau adalah suhu. Cara pemantauan pengatur suhu sama seperti
pemantauan suhu pada refrigerator atau oven.
Bersihkan dinding bagian dalam dan ganti air sekali dalam sebulan. Setiap hari cek
ketinggian air serta periksa suhu pada setiap kali pemakaian. Gunakan wadah-wadah
yang terbuat dari bahan aluminium atau stainless steel, hindari penggunaan rak
ataupun wadah-wadah yang mudah berkarat dalam inkubasinya, karena akan
mempengaruhi air dan alat waterbath.
Pemecahan Masalah (Trouble Shooting) pada Kerusakan Alat
Troubleshooting adalah proses atau kegiatan untuk mencari penyebab terjadinya

penampilan alat yang tidak memuaskan, dan memilih cara penanganan yang benar
untuk mengatasinya. Makin canggih suatu alat, akan makin kompleks permasalahan
yang mungkin terjadi.
17
Didalam ruang media terdapat beberapa alat elektronik yang perlu diperhatikan dalam
penggunaan, pemeliharaannya. Oleh karenanya buku petunjuk atau manual
Page
Written by:
2009
penggunaan alat perlu disimpan baik sebagai panduan. In house training oleh suplier
alat harus dilakukan sebelum alat digunakan, hal ini dimaksudkan sebagai uji kinaerja
alat sebelum serah terima alat. Serta manual penggunaan alat perlu ditempel didekat
setiap alat sehingga alat dipakai sesuai dengan prosedur.
Hal-hal yang perlu diperhatikan bila terjadi permasalahan pada peralatan:

1. Tetaplah tenang dan berpikirlah dengan jernih.
2. Pastikan masalahnya. Jangan membuat asumsi tentang kemungkinan
permasalahan.
3. Jika penanganan sederhana gagal, minta bantuan supervisor/ atasan atau hubungi
agen untuk menanyakan masalah tersebut.
4. Tempelkan label bahwa alat rusak.
5. Catatlah semua tindakan/ upaya perbaikan pada catatan khusus seperti contoh
formulir di bawah ini.
FORMULIR PENCATATAN KONDISI PERALATAN
Alat :
Ruang :
Bulan :
Suhu :
Jenis Tindakan Tgl servis,
Tgl Suhu yg diukur Petugas Kondisi
kerusakan perbaikan Oleh
Penanggungjawab
18
(.............................)
Page
Written by:
2009
Alat-alat Gelas serta Logam yang digunakan di Ruang Media
Berikut ini adalah beberapa alat gelas yang digunakan dalam pembuatan media.
1. Erlenmeyer ; 1000, 750, 500, 250, 100, 50 mL
2. Gelas ukur ; 500, 100, 50 mL
3. Gelas piala ; 1000, 500, 100, 50 mL
4. Pipet ukur ; 10, 5, 1 mL
5. Spatula, batang pengaduk
6. Gelas timbang
7. Petridish
8. Tabung reaksi
9. Tabung tutup ulir
10. Glass bead
11. Jarum suntik dengan selang
12. Corong gelas
13. Botol bekas infus (dengan tutup karet)
14. Cincin pemberat
15. Syringe 1 – 5 mL
16. Bola hisap
Bahan-bahan habis pakai yang diperlukan di Ruang Media
1. Aquades
2. Kapas
3. Kassa
4. Aluminium foil
5. pH indicator strip
6. Indicator tape for autoclave
7. Spidol
8. Plastik bening (2 kg)
9. Spritus
10. Bahan dasar media, media instant
11. Reagen-reagen untuk media
19
Page
Written by:
2009
Pencucian Alat-alat Gelas
1. Alat-alat gelas yang masih baru:

a. Dengan sepotong kain, debu yang menempel dibersihkan
b. Rendam dalam larutan HCl 1-2% semalam untuk menetralisasi sisa alkali pada
gelas
20
c. Cuci hingga bersih dengan air (dapat dengan air hangat) kemudian dibilas
dengan aquadest/ air bebas ion
Page
Written by:
2009
d. Keringkan, disumbat/ dibungkus, kemudian siap untuk disterlisasi kering (oven)
2. Alat-alat gelas bekas pakai:

a. Cuci dengan sabun cair, lebih baik dengan Extrant hingga bersih
b. Setelah dicuci air, direndam dalam larutan HCl 1-2% 10-15 menit untuk
melunturkan sisa alkali pada permukaan gelas
c. Cuci hingga bersih dengan air (dapat dengan air hangat), kemudian dibilas
dengan aquadest / air bebas ion
d. Keringkan, disumbat/ dibungkus, kemudian siap untuk disterlisasi kering (oven)
3. Alat-alat gelas bekas pakai, infeksius:

a. Rebus dengan air sampai mendidih, atau dimasukkan ke dalam autoklaf
dengan waktu 15 menit, 121°C, 1,5 atm
b. Setelah dingin, cuci dengan air, kemudian rendam dengan air yang diberi sabun
cair semalam
c. Setelah dicuci,direndam dalam larutan HCl 1-2% semalam untuk melunturkan
sisa alkali pada permukaan gelas
d. Cuci hingga bersih dengan air, kemudian dibilas dengan aquadest/ air bebas
ion
e. Keringkan, disumbat/ dibungkus, kemudian siap untuk disterlisasi kering (oven)
4. Pipet bekas pakai:

a. Pipet bekas pakai yang infeksius direndam dalam desinfektan, misalnya fenol
5% semalam
b. Setelah dicuci dengan air, rendam dalam air sabun (sabun cair)
c. Cuci dengan air kemudian direndam dalam HCl 1-2% semalam
d. Cuci hingga bersih dengan air, kemudian dibilas dengan aquadest/ air bebas
ion (jika ada bekas yang sukar dihilangkan, direndam dulu semalam pakai
kalium bikromat)
e. Keringkan, disumbat/ dibungkus, kemudian siap untuk disterlisasi kering (oven)
5. Peralatan lain;
Alat-alat plastik
21
a. Rendam dalam larutan hypochlorite 3% secukupnya

Page
b. Cuci dengan air hangat, bilas dengan air lalu aquadest/ air bebas ion
Written by:
2009
c. Dikeringkan dan siap disterilisasi dengan autoklaf atau sinar ultraviolet
Peralatan Seitz filter dan milipore filter

a. Bagian-bagian dari peralatan filter dibuka dan diperiksa apakah filter masih
utuh (tidak sobek, berlubang), bila filter cacat maka penyaringan harus diulangi
dengan filter yang baru
b. Bersihkan bagian-bagian dari peralatan saringan dengan air hangat, kemudian
dengan air dan dibilas dengan aquadest atau air bebas ion
c. Pasang kembali filter tersebut atau diganti yang baru, dibungkus dengan
aluminium foil atau kertas dan siap disterilisasi dengan autoklaf atau dengan
oven
Kesalahan-Kesalahan Yang Terjadi Selama Proses

Pembuatan Media
Di setiap pembuatan media, dapat terjadi beberapa kesalahan yang disebabkan oleh
beberapa faktor berikut.
1. Penimbangan yang tidak benar serta pengukuran volume pengencer yang
kurang tepat.
2. Kualitas akuades yang tidak standar. Karena terdapat beberapa kendala
dibeberapa area di Indonesia contohnya Kalimantan Timur, sumber air memiliki
pH yang cukup rendah sehingga akuades yang dihasilkan terkadang masih
bersifat asam. Sehingga perlu dicek kembali akuades yang akan digunakan,
baik itu akuades didapatkan dengan cara penyulingan sendiri maupun produk
kemasan siap pakai. Adapun pilihan beberapa nama produsen akuades cukup
menjaga kualitasnya.
3. Wadah yang tercemar, baik petridish maupun tabung reaksi. Hal ini membuat
media siap pakai menjadi terkontaminasi.
4. Terlalu panas (overheating) pada proses pembuatannya; sebagai contoh,
terdapat instruksi pembuatan pada kemasan yang menunjukkan pada suhu
berapa media tersebut dipanaskan. Hal tersebut bertujuan agar kerusakan
bahan-bahan yang terdapat dalam komposisi media dapat dihindari.
22
Overheating dapat menghilangkan daya gel agar, memecah karbohidrat,

Page
mengubah pH, membentuk endapan dan merubah warna. Hal ini dapat terjadi
Written by:
2009
disebabkan oleh pengamatan yang kurang teliti terhadap waktu dan tekanan di
dalam autoklaf, kelalaian mengeluarkan uap dari dalam autoklaf pada
waktunya, terlalu lama menempatkan bahan-bahan media yang larut dalam
panas di dalam waterbath atau karena melarutkan bahan atau media dengan
pemanasan yang berulang-ulang.
Terkadang media yang mengandung agar juga dibatasi suhu pemanasannya,
sehingga membuat proses melarutkan agar berlangsung lama. Hal ini dapat
diatasi dengan memanaskan media tersebut pada suhu yang lebih tinggi
dengan waktu yang relatif singkat, dapat menggunakan waterbath ataupun
microwave.
5. Terlalu lama disimpan pada suhu 50° C. Media yang disterilisasi dalam
autoklaf terkadang memakan waktu yang cukup lama untuk membuat kondisi
tekanan dalam autoklaf menjadi 0. Kemudian tindakan meninggalkan media di
dalam autoklaf tanpa mengeluarkan dan mendinginkannya akan berakibat
media mengalami karamelisasi. Sehingga media tidak akan dapat digunakan
lagi.
6. Cara melarutkan beberapa jenis media yang mengandung agar yang kurang
sempurna. Hal ini akan menyebabkan media tidak dapat memadat dengan
sempurna, sehingga media tidak dapat digunakan.
7. Kesalahan penyimpanan media/ bahan baku.
Akibat dari kesalahan pembuatan media:

• Terjadi kekeruhan/ pengendapan
• Warna terlalu gelap (kadang media menjadi gosong)
• Agar-agar/media terlalu lunak
• Pertumbuhan kuman yang jelek atau bahkan tidak tumbuh
Sistem Pembuangan (Waste Disposal)
Limbah adalah segala sesuatu yang harus dibuang. Kebanyakan dari kasus limbah di
ruang media adalah dari instrumen, serta peralatan gelas yang pecah, serta media
23
yang terkontaminasi atau kadaluarsa. Penanganan limbah tersebut dipisah

berdasarkan sifat bahaya masing-masing bahan.
Page
Written by:
2009
a. Bahan gelas
Pecahan gelas cukup berbahaya apabila dibuang secara sembarang di tempat sampah
umum, bercampur dengan bahan lain karena bahan ini dapat didaur ulang. Untuk
menghindari luka, pecahan kaca ditempatkan dalam wadah kardus yang memiliki
tutup.
b. Bahan media yang terkontaminasi

Bahan media yang telah terkontaminasi tidak lagi dapat digunakan dan harus dibuang.
Pembuangan bahan tersebut upayakan menggunakan berita acara pemusnahan serta
dibuang dalam satu wadah misal kardus. Hubungi distributor atau agen penyedia
media untuk membantu menampung atau memusnahkan media yang terkontaminasi
tersebut.
c. Bahan media yang kadaluarsa

Bahan media kadaluarsa tidak lagi dapat digunakan dan harus dibuang. Pembuangan
bahan tersebut upayakan menggunakan berita acara pemusnahan serta dibuang
dalam satu wadah misal kardus. Hubungi distributor atau agen penyedia media untuk
membantu menampung atau memusnahkan media kadaluarsa tersebut.
Untuk menghindari kondisi tersebut, perlu dilakukan pengecekan yang seksama
terhadap logistik bahan media yang datang mengedai kondisi fisik, tanggal kadaluarsa,
serta strategi order yang disesuaikan dengan pemakaian agak penumpukan bahan
dalam gudang bahan tidak terjadi.
24
Page
Written by:
2009
Daftar Pustaka
----------------------------------------------------------------
Anonim, 2004, Pedoman Praktek Laboratorium Yang Benar (Good Laboratory

Practice), Departemen Kesehatan RI (Dirjen Pelayanan Medik-Direktorat Labkes),
Jakarta.
Anonim, 2005, Pengetahuan Media, Samarinda.
Anonim, Standard Operating Procedures in Microbiology.
Dewi, Atika Ratna., Uji Kualitas Media & Reagensia, Balai Laboratorium Kesehatan
Yogyakarta, 2009.
Sri Harjati S dkk., 2008, Pedoman Keselamatan Kerja di Laboratorium Mikrobiologi

dan Rumah Sakit, PT. Merck Tbk. (PT. Multazam Mitra Prima), Jakarta.
25
Page
Written by:
2009
Lampiran
----------------------------------------------------------------
26
Page
Written by:
2009

Standar Operasional Ruang Media Mikrobiologi

Uploaded by

Document Information

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

Standar Operasional Ruang Media Mikrobiologi

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

STANDAR

Balai Laboratorium Kesehatan

“Mitra Diagnostik Anda Menuju Sehat”

Assalamu’alaikum warrahmatullahi wabarakatuh,

Salam Sejahtera, bagi pembaca sekalian.

Wassalamu’alaikum warrahmatullahi wabarakatuh.

Samarinda, Desember 2009

Radita Ning Anggraeny S., S.Si

Cover Standar Operasional Ruang Media ..................................................................... i

Daftar Pustaka ...............................................................................................................25

1. Harus mengandung semua nutrisi yang mudah digunakan oleh mikrobia.

Jenis media dapat digolongkan berdasarkan:

Ruangan & Fasilitas Penunjang

Untuk pembuatan media khusus di bidang mikrobiologi sebaiknya memiliki ruangan

Penyimpanan Bahan & Reagen Media

Pemilihan Bahan Media serta Reagen

dalam 1-2 bulan.

3. Saat diterima, semua wadah tertutup rapat.

b. Media yang telah dilarutkan:

Akuadestilata/ aquadest kemungkinan merupakan bahan termurah dari semua bahan

Uji Kualitas Media

Hal-hal yang perlu diperhatikan dalam penyiapan media:

panas yang tinggi. Pemanasan lebih lama akan mengakibatkan denaturasi

protein, karamelisasi karbohidrat, inaktivasi zat-zat gizi dan kehilangan kadar

c. pH setiap batch media harus diperiksa dengan pH meter setelah media

c. Uji spesifitas dengan penanaman mikroorganisme kontrol positif dan kontrol

Tabel 1. Uji media dengan menggunakan kuman

P. mirabilis Koloni tidak berwarna

Malonate broth 24 jam E. coli Negatif (hijau)

Manitol salt agar 24 jam aerob S. aureus Koloni kuning

Kontrol Kualitas Ruangan Media

Sebagai ruang/ tempat penyimpanan, peracikan dan pengolahan media, diperlukan

Penyimpanan Media Jadi

Pencatatan & Pelaporan

Pencatatan dan pelaporan setiap kegiatan di dalam laboratorium, khususnya di ruang

Sebagai penunjang dalam pembuatan media diperlukan alat-alat berikut. Untuk

Lemari Pendingin (Refrigetor/ Freezer)

2) Secara berkala periksa dengan menggunakan termometer standar.

Cara penggunaan lemari pendingin (Refrigerator/ Freezer)

Pemeliharaan dan Pencegahan

sistem data alat yang dijalankan (% panas dan kecepatan putar).

4. Gunakan magnetic stirrer yang sesuai dengan standar untuk menghindari

a. Timbangan Elektrik (Electrical Balance)

b. Timbangan Analitik (Analytical Balance)

Kalibrasi anak timbangan dilakukan dengan anak timbangan standar yang

Cara kalibrasi anak timbangan:

2) Letakkan anak timbangan standar yang teringan.

Pemeliharaan dan Pencegahan

Pemeliharaan dan Pencegahan

Uji Sterilitas Autoclave

• Meletakkan thermocouples tepat ditengah bahan yang akan disterilisasi.

• Kemudian setelah turut disterilisasi bersama bahan, thermocouples diinkubasi

Tempat Penyimpanan Alat-alat Gelas

Meja Peracikan & Persiapan Media

Laminar Air Flow

Penangas Air (Waterbath)

Pemeliharaan dan Pencegahan

Pemecahan Masalah (Trouble Shooting) pada Kerusakan Alat

Troubleshooting adalah proses atau kegiatan untuk mencari penyebab terjadinya

Hal-hal yang perlu diperhatikan bila terjadi permasalahan pada peralatan:

FORMULIR PENCATATAN KONDISI PERALATAN

Alat-alat Gelas serta Logam yang digunakan di Ruang Media

Bahan-bahan habis pakai yang diperlukan di Ruang Media

Pencucian Alat-alat Gelas