LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI FARMASI

PEWARNAAN SEL BAKTERI

Oleh:

Nama : I Gede Dwija Bawa Temaja

Nim : 0808505031
Kelompok : II
Tanggal Praktikum : 5 April 2010
Asisten : Ni Komang Sri Indrawati

JURUSAN FARMASI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS UDAYANA
2010
I. PENDAHULUAN
1.1 Dasar Teori
Pengenalan bentuk mikroba (morfologi), kecuali mikroalgae harus dilakukan
pewarnaan terlebih dahulu agar dapat diamati dengan jelas (Ramona dkk, 2007). Pada
umumnya bakteri bersifat tembus cahaya, hal ini disebabkan karena banyak bakteri yang
tidak mempunyai zat warna (Waluyo, 2004). Tujuan dari pewarnaan adalah untuk
mempermudah pengamatan bentuk sel bakteri, memperluas ukuran jazad, mengamati
struktur dalam dan luar sel bakteri, dan melihat reaksi jazad terhadap pewarna yang
diberikan sehingga sifat fisik atau kimia jazad dapat diketahui (Ramona dkk, 2007).
Berhasil tidaknya suatu pewarnaan sangat ditentukan oleh waktu pemberian warna
dan umur biakan yang diwarnai (umur biakan yang baik adalah 24 jam). Umumnya zat
warna yang digunakan adalah garam-garam yang dibangun oleh ion-ion yang bermuatan
positif dan negatif dimana salah satu ion tersebut berwarna. Zat warna dikelompokkan
menjadi dua, yaitu zat pewarna yang bersifat asam dan basa. Jika ion yang mengandung
warna adalah ion positif maka zat warna tersebut disebut pewarna basa. Dan bila ion
yang mengandung warna adalah ion negatif maka zat warna tersebut disebut pewarna
negatif (Ramona dkk, 2007).
Beberapa jenis pewarnaan antara lain adalah pewarnaan langsung dengan
pewarnaan basa, pewarnaan tidak langsung atau pewarnaan negatif dengan pewarnaan
asam, pewarnaan gram, dan pewarnaan endospora. Pewarna basa akan mewarnai dinding
sel bakeri yang relatif negatif, contohnya metiline blue dan kristal violet. Sedanglan pada
pewarnaan tidak langsung, yang terwarnai adalah lingkungan sekitar sel, tetapi tidak
mewarnai sel karena daya mewarnai pada zat ini berada pada ion negatif dan tidak
bereaksi dengan ion negatif lainnya dari sel bakteri (Ramona dkk, 2007).

1.2 Tujuan
1. Untuk mengetahui tujuan pewarnaan sel bakteri.
2. Untuk mengetahui metode-metode yang digunakan dalam pewarnaan sel bakteri.
3. Untuk mengetahui bentuk sel bakteri hasil isolasi setelah dilakukan pewarnaan.
4. Untuk mengetahui perbedaan warna antara bakteri gram positif dan gram negatif.

II. MATERI DAN METODE

 Dalam praktikum kali ini, bakteri yang digunakan dalam pewarnaan adalah isolat
bakteri Streptococcus pyogene, E.coli, dan dari jenis Bacillus Pada pewarnaan secara
langsung dengan pewarna basa, sebuah kaca objek bebas lemak ditetesi setetes air steril pada
bagian tengahnya. Dengan mengguunakan jarum ose yang telah dipijarkan, diambil sedkit
biakan yang telah diisolasi. Selanjutnya dibuat apusan bakteri pada air yang diletakkan pada
kaca objek dengan cara menggesek-gesekkan jarum ose yang berisi biakan bakteri sehingga
didapatkan suatu campuran yang tipis dan merata. Difiksasi diatas nyala api Bunsen dengan
jarak sekitar 30 cm dari nyala api. Dalam memfiksasi ini tidak boleh terlalu panas karena
dapat merusak bentuk sel. Seteleh itu diteteskan metiline blue dan didiamkan selama 30-60
detik. Selanjutnya dicuci dengan air air mengalir dan dikeringkan dengan meletakkannya
diatas kertas tissue. Sediaan diamati dibawah mikroskop dengan pembesaran 100x dan diolesi
minyak emersi terlebih dahulu yang bertujuan untuk memperjelas bentuk sel. Bentuk dan
warna sel bakteri dicatat dan digambar.
Pada pewarnaan secara tidak langsung, satu tetes tinta cina diteteskan pada pinggiran
kaca objek. Lalu dengan menggunakan jarum ose yang telah dipijarkan, diambil sedikit
biakan bakteri dan disuspensikan pada tetesan tinta cina pada permukaan kaca objek.
Suspense bakteri dalam tinta cina tersebut selanjutnya diratakan dengan menggunakan kaca
objek lainnya dan dibiarkan kering pada suhu kamar. Setelah kering lalu diamati di bawah
mikroskop dengan pembesaran 100x dan memakai minya emersi. Bentuk dan warna sel
bakteri dicatat serta digambar.
Untuk pewarnaan gram, terlebih dahulu dibuat apusan bakteri pada kaca objek yang
kering dan bersih. Kemudian difiksasi diatas nyala api Bunsen atau di udara barulah
dilakukan pewarnaan dengan larutan kristal violet selama 1-1,5 menit. Selanjutnya dicuci
dengan air suling dan ditetesi dengan larutan garam iodine, dibiarkan selama 1 menit.
Kemudian dicuci dengan larutan alkohol 95% sampai warnanya terhapus yang biasanay
selama 30 detik. Cuci kembali dengan air dan kemudian diwarnai dengan safranin atau karbol
fuhsin selama 5 – 15 menit. Cuci lagi dengan air, kelebihan air dibuang dengan menggunakan
kertas hisap tanpa menggosok sediaan. Selanjutnya dikeringkan di udara atau diatas nyala api
Bunsen. Diamati dibawah mikroskop dengan pembesaran 100x memakai minyak emersi.
Hasil pengamatan kemudian dicatat dan digambar.

III. HASIL DAN PEMBAHASAN

3.1 Hasil Pengamatan

Klp Bakteri Pengamatan Keterangan
P. tidak langsung P. langsung P. gram
I Bacillus 100x10 100x10 100x10 • Bakteri
bentuk
batang
• Bakteri
gram(-)

II Streptococcus 40x10 100x10 40x10 • Bakteri

pyogenes bentuk
bulat
berantai
• Bakteri
gram(+)
III Bacillus 40x10 40x10 40x10 • Bakteri
bentuk
batang
• Bakteri
gram(+)

IV Streptococcus 100x10 100x10 100x10 • Bakteri

pyogenes bentuk
bulat
berantai
• Bakteri
gram(+)
V E. coli 40x10 40x10 40x10 • Bakteri
bentuk
batang
• Bakteri
gram(-)

VI E. coli 40x10 40x10 100x10 • Bakteri

bentuk
batang
• Bakteri
gram(-)

3.2 Pembahasan
Pada praktikum pewarnaan bakteri kali ini, sampel yang digunakan adalah isolat
Streptococcus pyogenes, E.coli, dan dari jenis Bacillus. Untuk pewarnaan bakteri secara
langsung, digunakan satu larutan pewarna yaitu larutan metiline blue. Adapun hasil yang
didapatkan adalah bakteri Streptococcus pyogenes dengan pembesaran 100x10 berbentuk
bulat (coccus) yang membentuk untaian rantai (streptococcus) dengan warna ungu violet,
bakteri E.coli dengan pembesaran 40x10 berbentuk batang dengan warna ungu violet,
dan bakteri jenis Bacillus dengan pembesaran 40x10 dan 100x10 berbentuk batang
(basil) dengan warna ungu violet. Akan tetapi pada pengamatan Streptococcus pyogenes
terlihat juga bakteri dengan bentuk berbeda yang merupakan kontaminan. Adanya
kontaminan ini kemungkinan disebabkan pada saat pemindahan isolat ke kaca objek
terjadi kontaminasi karena kurangnya pemanasan jarum ose pada saatpengambilan
biakan sehingga masih ada bakteri lain dari udara yang ikut dalam apusan atau telah
terkontaminasinya isolat bakteri yang digunakan. Adapun hasil dari pengamatan ini telah
sesuai dengan pustaka yang menyebutkan bahwa bentuk bakteri Streptococcus pyogenes
adalah berbentuk bulat (coccus) yang membentuk untaian rantai, bakteri E.coli berbentuk
batang, dan bakteri dari jenis Bacillus berbentuk batang (basil) (Ramona dkk, 2007).
Terwarnainya bakteri oleh pewarna basa disebabkan karena bakteri kaya akan asam
amino dan mengandung muatan negatif seperti kelompok fosfat. Sifat ini bereaksi
dengan zat warna yang bermuatan positif (Jawetz et al, 2005). Sitoplasma bakteri bakteri
umumnya bermuatan negatif sementara pewarna memiliki muatan positif sehingga
pewarna akan terikat oleh sitoplasma dan akhirnya sel menjadi terwarnai (Alcamo,
1996). Dalam pewarnaan bakteri ini dilakukan fiksasi yang bertujuan untuk memperkuat
perlekatan warna dan bakteri pada kaca preparat (Pelczar, 2005). Fiksasi tidak boleh
dilakukan terlalu lama sebab dapat mengakibatkan perubahan bentuk struktur bakteri
yang diamati dari bentuk normalnya. Hal ini disebabkan karena semakin lamanya fiksasi,
maka suhu yang dihasilkan dari fiksasi tersebut akan semakin tinggi sehingga bentuk
bakteri akan mengalami lisisnya cairan dan menyebabkan bentuk yang diamati nantinya
akan berbeda dari bentuk aslinya (Entjang, 2003).
Pada pewarnaan tidak langsung digunakan suatu larutan pewarna yaitu nigrosin atau
tinta cina. Dari hasil pengamatan didapatkan hasil pada bakteri Streptococcus pyogenes
dengan pembesaran 40x10 dan 100x10 terlihat berbentuk bulat (coccus) yang
membentuk untaian rantai berwarna kuning coklat dengan warna lingkungan hitam atau
gelap. Hal ini terjadi karena adanya minyak emersi yang ditambahkan, akan tetapi warna
aslinya adalah bening. Pada bakteri E.coli dan Bacillus dengan pembesaran 40x10 dan
100x10 terlihat bernbentuk batang (basil) berwarna bening dengan warna lingkungan
hitam atau gelap. Lingkungan yang berwarna hitam disebabkan oleh pewarna yang
digunakan adalah nigrosin atau tinta cina yang memiliki warna dasar hitam. Hal ini telah
sesuai dengan pustaka yang menyebutkan bahwa zat pewarna asam membawa suatu
muatan negatif, maka pada sel yang permukaannya juga negatif akan ditolak oleh
sitoplasma sel sehingga zat warna ini akan berkaitan dengan lingkungan yang
mengelilingi sel dan bagian dalam sel akan tetap berwarna bening (Alcamo, 1996).
Selain itu disebutkan juga pada pustaka bahwa bakteri merupakan organisme
mikroselular yang pada dinding selnya mengandung ion negatif, zat warna (nigrosin)
yang bermuatan negatif tidak akan mewarnai sel tetapi yang terwarnai adalah lingkungan
luarnya saja (Entjang, 2003).
Pada pewarnaan gram didapatkan hasil bahwa bakteri Streptococcus pyogenes
dengan pembesaran 40x10 dan 100x10 berbentuk bulat (coccus) yang membentuk
untaian rantai dengan warna ungu. Warna ini menunjukkan bakteri Streptococcus
pyogenes termasuk golongan bakteri gram positif. Hal ini disebabkan karena bakteri
menyerap zat warna dasar yaitu kristal violet dan warnanya tidak terhapuskan oleh
pencucian alkohol, sehingga sel bakteri ini tidak menyerap warna sfranin yang
merupakan warna kontras (Ramona dkk, 2007). Warna violet (ungu) ini timbul karena
bakteri gram positif mempunyai lapisan peptidoglikan yang tebal dan kandungan
lipidnya rendah sehingga akan mengikat lebih banyak kompleks zat warna sehingga
warnanya menjadi violet (ungu) (Alcamo, 1996). Pada pengamatan bakteri E.coli
dengan pembesaran 40x10 dan 100x10 didapatkan hasil bahwa bakteri ini berbentuk
batang (basil) dengan warna merah muda. Warna ini menunjukkan bakteri E.coli
termasuk golongan bakteri gram negatif. Hal ini disebabkan karena bakteri ini setelah
diwarnai oleh pewarna dasar yaitu kristal violet menyerap warna dasar, setelah dicuci
dengan alkohol maka warna dasarnya akan terhapus dan menyerap pewarna safranin atau
karbol fushin yang digunakan sebagai pewarna kontras sehingga akan berwarna merah
(Ramona dkk, 2007). Warna merah ini timbul karena bakteri gram negatif memiliki
lapisan peptidoglikan yang tipis sehingga ikatan antara kristal violet-iodine dengan
lapisan peptidoglikan lebih sedikit terjadi dan bakteri lebih dominan terwarnai oleh
pewarna safranin yang berwarna merah (Alcamo, 1996). Pada pengamatan bakteri jenis
Bacillus dengan pembesaran 40x10 dan 100x10 didapatkan hasil yang berbeda dimana
terdapat Bacillus yang berbentuk batang dengan warna ungu dan Bacillus yang
berbentuk batang dengan warna merah. Perbedaan hasil ini disebabkan karena
kemungkinan pada saat pewarnaan dengan safranin terlalu banyak dilakukan
penambahan safranin sehingga warnanya ikut terserap. Berdasarkan warna yang
diperoleh menunjukkan bahwa dua bakteri jenis bacillus yang diamati merupakan
golongan bakteri gram positif dan bakteri gram negatif. Bacillus yang termasuk golongan
gram positif karena bakteri ini setelah diwarnai dengan pewarna dasar kristal violet dan
 dicuci alkohol tetap berwarna ungu dan tidak menyerap pewarna kontras (Ramona dkk,
2007). Hal ini disebabkan karena bakteri gram positif memiliki lapisan peptidoglikan
yang tebal dan kandungan lipidnya rendah sehingga akan mengikat kompleks yang lebih
banyak dan warnanya akan menjadi violet (Alcamo, 1996). Untuk hasil bacillus bakteri
gram negatif terjadi karena penambahan safranin yang berlebihan sehingga warna
safranin ikut terserap, karena menurut pustaka disebutkan bahwa bacillus merupakan
golongan bakteri gram positif (Waluyo, 2004).
Dalam pewarnaan gram dilakukan juga penambahan iodine yang merupakan proses
fiksasi warna untuk mempertahankan struktur dalam dan luar sel tetap pada posisinya.
Fiksasi juga berperan untuk menginaktivasi enzim yang mungkin dapat mengganggu
bentuk sel dan menguatkan struktur mikroba. Mikroba umumnya dibunuh dan dilekatkan
kuat pada kaca objek selama fiksasi (Prescott et al, 1993).

IV. KESIMPULAN

1. Tujuan dilakukan pewarnaan adalah untuk mempermudah pengamatan bentuk sel

bakteri, memperluas ukuran jazad, mengamati struktur dalam dan luar sel bakteri, dan
melihat reaksi jazad terhadap pewarna yang diberikan sehingga sifat fisik atau kimia
jazad dapat diketahui.
2. Metode-metode yang dapat digunakan dalam pewarnaan sel bakteri adalah pewarnaan
langsung dengan pewarnaan basa, pewarnaan tidak langsung atau pewarnaan negatif
dengan pewarnaan asam, pewarnaan gram, dan pewarnaan endospora. Tetapi dalam
praktikum, tidak dilakukan metode pewarnaan endospora.
3. Bentuk bakteri hasil isolasi yang terlihat adalah coccus yang membentuk untaian rantai
(streptococcus) pada Streptococcus pyogenes, basil untuk bakteri E.coli dan bacillus
4. Bakteri gram positif mempunyai ciri berwarna ungu karena mengikat warna pada
pewarna dasar dan tidak terhapus oleh pencucian dengan alkohol serta tidak menyerap
pewarna kontras sedangkan bakteri gram negatif mempunyai ciri berwarna merah karena
menyerap pewarna dasar dan terhapuskan oleh pencucian dengan alkohol serta menyerap
pewarna kontras. Pada praktikum ini bakteri Streptococcus pyogenes termasuk golongan
bakteri gram positif, E.coli termasuk golongan bakteri gram negatif, dan bacillus
termasuk golongan bakteri gram positif.

DAFTAR PUSTAKA
Alcamo, I.E. 1996. Fundamental of Microbiology, 5th Edition. Addison Wesly Longman, Inc:
New York
Entjang, I. 2003. Mikrobiologi dan Parasitologi Untuk Akademi Keperawatan. Citra Aditya
Bakti. Bandung.
Jawetz, E., J.L. Melnick, dan E.A. Adelberg. 2005. Mikrobiologi kedokteran. Penerbit Buku
Kedokteran. Jakarta.
Pelczar, M.J, E.C.S. Chan. 2006. Dasar-dasar Mikrobiologi. UI Press. Jakarta.
Prescott, Lansing M., John P. Harley, Donald A. Klein. 1993. Microbiology 2nd Edition USA:
WMC Brown Publisher.
Ramona, Y., R. Kawuri, I.B.G. Darmayasa. 2007. Penuntun Praktikum Mikrobiologi Umum
Untuk Program Studi Farmasi FMIPA UNUD. Laboratorium Mikrobiologi Jurusan
Biologi Fakultas MIPA Universitas Udayana. Bukit Jimbaran.
Waluyo. L.2004. Mikrobiologi Umum. UMM Press. Malang