You are on page 1of 6

1. http://www.chemicool.com/definition/high_performance_liquid_chromatography_hplc.

ht
ml

High-performance liquid chromatography (HPLC) is a form of liquid chromatography to


separate compounds that are dissolved in solution. HPLC instruments consist of a reservoir of
mobile phase, a pump, an injector, a separation column, and a detector. Compounds are separated
by injecting a plug of the sample mixture onto the column. The different components in the
mixture pass through the column at different rates due to differences in their partitioning
behavior between the mobile liquid phase and the stationary phase. Instrumentation

Solvents must be degassed to eliminate formation of bubbles. The pumps provide a steady high
pressure with no pulsating, and can be programmed to vary the composition of the solvent during
the course of the separation. The liquid sample is introduced into a sample loop of an injector
with a syringe. When the loop is filled, the injector can be inject the sample into the stream by
placing the sample loop in line with the mobile phase tubing. The different types of HPLC
columns are described in a separate document. The presence of analytes in the column effluent is
recorded by detecting a change in refractive index, UV-VIS absorption at a set wavelength,
fluorescence after excitation with a suitable wavelength, or electrochemical response. Mass
spectrometers can also be interfaced with liquid chromatography to provide structural
information and help identify the separated analytes.

Performa tinggi kromatografi cairan (HPLC) adalah suatu bentuk kromatografi cair untuk
memisahkan senyawa yang terlarut dalam larutan. instrumen HPLC terdiri dari suatu reservoir
fase gerak, pompa, injektor, sebuah kolom pemisahan, dan detektor. Senyawa dipisahkan dengan
menyuntikkan sebuah plug campuran sampel ke kolom. Berbagai komponen dalam campuran
melalui kolom pada tingkat yang berbeda karena perbedaan perilaku partisi mereka antara fase
cair bergerak dan fase diam. Instrumentasi

Pelarut harus penghilangan untuk menghilangkan pembentukan gelembung. Pompa memberikan


tekanan tinggi mantap dengan berdenyut tidak, dan dapat diprogram untuk memvariasikan
komposisi pelarut selama pemisahan. Sampel cair dimasukkan ke dalam sebuah loop sampel
sebuah penyuntik dengan jarum suntik. Ketika loop diisi, injector dapat menyuntikkan sampel ke
sungai dengan menempatkan loop sampel sejalan dengan tubing fase gerak. Berbagai jenis
kolom HPLC dijelaskan dalam dokumen terpisah. Kehadiran analit dalam kolom efluen dicatat
dengan mendeteksi perubahan dalam indeks bias, serapan UV-VIS pada panjang gelombang
ditetapkan, fluoresensi setelah eksitasi dengan panjang gelombang yang sesuai, atau respon
elektrokimia. spektrometer massa juga dapat dihubungkan dengan kromatografi cair untuk
memberikan informasi struktural dan membantu mengidentifikasi analit dipisahkan.
2. http://www.idex-hs.com/support/upchurch/hplc_center.aspx

High Performance Liquid Chromatography (HPLC) is an analytical process utilizing special


instruments designed to separate, quantify, and analyze components of a chemical mixture.
Samples of interest are introduced to a solvent flow path; carried through a column packed with
specialized materials for component separation; and component data is obtained through the
combination of a detection mechanism coupled with a data recording system. All this occurs
under pressures which may reach or exceed 6,000 psi!

The basic components of an HPLC system include a solvent reservoir, pump, injector, analytical
column, detector, recorder and waste reservoir. Other important elements are an inlet solvent
filter, post-pump inline filter, sample filter, precolumn filter, guard column, back-pressure
regulator and/or solvent sparging system. The function of each of these components is briefly
described below.

An HPLC system begins with the solvent reservoir, which contains the solvent used to carry the
sample through the system. The solvent should be filtered with an inlet solvent filter to remove
any particles that could potentially damage the system's sensitive components.

Solvent is propelled through the system by the pump. This often includes internal pump seals,
which slowly break down over time. As these seals break down and release particles into the
flow path, an inline solvent filter prevents any post-pump component damage.

The next component in the system is the sample injector, also known as the injection valve.
This valve, equipped with a sample loop of the appropriate size for the analysis being performed,
allows for the reproducible introduction of sample into the flow path. Because the sample often
contains particulate matter, it is important to utilize either a sample filter or a precolumn filter
to prevent valve and column damage.

Following the injector, an analytical column allows the primary sample separation to occur.
This is based on the differential attraction of the sample components for the solvent and the
packing material within the column. However, a sacrificial guard column is often included just
prior to the analytical column to chemically remove components of the sample that would
otherwise foul the main column.

Following the analytical column, the separated components pass through a detector flow cell
before they pass into the waste reservoir. The sample components' presence in the flow cell
prompts an electrical response from the detector, which is digitized and sent to a recorder. The
recorder helps analyze and interpret the data.

As a final system enhancement, a back pressure regulator is often installed immediately after
the detector. This device prevents solvent bubble formation until the solvent is completely
through the detector. This is important because bubbles in a flow cell can interfere with the
detection of sample components. Alternatively, an inert gas sparging system may be installed to
force dissolved gasses out of the solvent being stored in the solvent reservoir.

Each of the components described above requires fittings to couple it into a system.

Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (HPLC) adalah suatu proses analitis menggunakan instrumen
khusus yang dirancang untuk memisahkan, mengukur, dan menganalisa komponen dari
campuran bahan kimia. Sampel bunga diperkenalkan ke jalur aliran pelarut; dilakukan melalui
kolom dikemas dengan bahan khusus untuk pemisahan komponen, dan data komponen
diperoleh melalui kombinasi mekanisme deteksi digabungkan dengan sistem pencatatan data.
Semua ini terjadi di bawah tekanan yang dapat mencapai atau melebihi 6.000 psi!

Komponen dasar dari suatu sistem HPLC termasuk pelarut reservoir, pompa, injektor, kolom
analitis, detektor, perekam dan reservoir limbah. Elemen penting lainnya adalah pelarut inlet
filter, pasca-pompa inline filter, sampel filter, precolumn filter, kolom penjaga, regulator back-
tekanan dan / atau pelarut Sparging sistem. Fungsi dari masing-masing komponen secara
singkat dijelaskan di bawah ini.

Sistem HPLC diawali dengan reservoir pelarut, yang berisi pelarut yang digunakan untuk
membawa sampel melalui sistem. Pelarut harus disaring dengan pelarut inlet saringan untuk
menghilangkan partikel yang berpotensi dapat merusak komponen-komponen sensitif sistem.

Pelarut didorong melalui sistem oleh pompa. Hal ini sering mencakup segel pompa internal,
yang secara perlahan memecah dari waktu ke waktu. Seperti anjing laut memecah dan
melepaskan partikel ke jalur aliran, sebuah inline pelarut Saringan mencegah kerusakan
komponen pasca-pompa.

Komponen berikutnya dalam sistem adalah injektor sampel, juga dikenal sebagai katup injeksi.
Valve ini, dilengkapi dengan sampel loop ukuran yang sesuai untuk analisis yang dilakukan,
memungkinkan untuk pengenalan reprodusibilitas sampel ke dalam jalur aliran. Karena sering
berisi sampel partikulat, penting untuk memanfaatkan baik sampel filter atau precolumn filter
untuk mencegah kerusakan katup dan kolom.

Setelah injektor, kolom analitis memungkinkan pemisahan sampel utama terjadi. Ini didasarkan
pada daya tarik diferensial dari komponen sampel untuk pelarut dan bahan kemasan dalam
kolom. Namun, penjaga kolom kurban sering dimasukkan sesaat sebelum kolom analisis untuk
menghapus komponen kimiawi sampel yang akan dinyatakan busuk kolom utama.

Setelah kolom analitis, komponen dipisahkan melewati sebuah sel aliran detektor sebelum
mereka masuk ke dalam reservoir limbah. Kehadiran komponen Sampel 'dalam sel aliran
memicu reaksi listrik dari detektor, yang didigitalkan dan dikirim ke recorder. Perekam
membantu menganalisis dan menginterpretasikan data.

Sebagai tambahan sistem final, regulator tekanan balik sering dipasang segera setelah detektor.
Perangkat ini mencegah terbentuknya gelembung pelarut pelarut sampai benar-benar melalui
detektor. Hal ini penting karena gelembung dalam sel aliran dapat mengganggu deteksi
komponen sampel. Atau, suatu gas inert Sparging sistem dapat diinstal untuk memaksa gas
terlarut dari pelarut disimpan di reservoir pelarut.

Masing-masing komponen dijelaskan di atas membutuhkan alat kelengkapan untuk pasangan ke


dalam sistem.

http://www.scribd.com/doc/27204824/Kromatografi-Cair-Kinerja-Tinggi

Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

Ditulis oleh Jim Clark pada 06-10-2007


HPLC adalah alat yang sangat bermanfaat dalam analisis. Bagian ini menjelaskan
bagaimana pelaksanaan dan penggunaan serta prinsip HPLC yang sama dengan
kromatografi lapis tipisdan kromatografi kolom.
Pelaksanaan HPLC
Pengantar

HPLC secara mendasar merupakan perkembangan tingkat tinggi darikromatografi kolom. Selain
dari pelarut yang menetes melalui kolom dibawah grafitasi, didukung melalui tekanan tinggi
sampai dengan 400 atm. Ini membuatnya lebih cepat.

HPLC memperbolehkan penggunaan partikel yang berukuran sangat kecil untuk material
terpadatkan dalam kolom yang mana akan memberi luas permukaan yang lebih besar
berinteraksi antara fase diam dan molekul-molekul yang melintasinya. Hal ini
memungkinkan pemisahan yang lebih baik dari komponen-komponen dalam campuran.

Perkembangan yang lebih luas melalui kromatografi kolom mempertimbangkan metode


pendeteksian yang dapat digunakan. Metode-metode ini sangat otomatis dan sangat peka.
Kolom dan pelarut
Membingungkan, ada dua perbedaan dalam HPLC, yang mana tergantung pada polaritas
relatif dari pelarut dan fase diam.
Fase normal HPLC
Ini secara esensial sama dengan apa yang sudah anda baca tentang kromatografi lapis
tipis atau kromatografi kolom. Meskipun disebut sebagai “normal†, ini bukan


merupakan bentuk yang biasa dari HPLC.


Kolom diisi dengan partikel silika yang sangat kecil dan pelarut non polar misalnya
heksan. Sebuah kolom sederhana memiliki diameter internal 4.6 mm (dan mungkin
kurang dari nilai ini) dengan panjang 150 sampai 250 mm.

Senyawa-senyawa polar dalam campuran melalui kolom akan melekat lebih lama pada
silika yang polar dibanding degan senyawa-senyawa non polar. Oleh karena itu, senyawa
yang non polar kemudian akan lebih cepat melewati kolom.

Fase balik HPLC

Dalam kasus ini, ukuran kolom sama, tetapi silika dimodifikasi menjadi non polar
melalui pelekatan rantai-rantai hidrokarbon panjang pada permukaannya secara
sederhana baik berupa atom karbon 8 atau 18. Sebagai contoh, pelarut polar digunakan
berupa campuran air dan alkohol seperti metanol.

Dalam kasus ini, akan terdapat atraksi yang kuat antara pelarut polar dan molekul polar
dalam campuran yang melalui kolom. Atraksi yang terjadi tidak akan sekuat atraksi
antara rantai-rantai hidrokarbon yang berlekatan pada silika (fase diam) dan molekul-
molekul polar dalam larutan. Oleh karena itu, molekul-molekul polar dalam campuran
akan menghabiskan waktunya untuk bergerak bersama dengan pelarut.

Senyawa-senyawa non polar dalam campuran akan cenderung membentuk atraksi dengan
gugus hidrokarbon karena adanya dispersi gaya van der Waals. Senyawa-senyawa ini
juga akan kurang larut dalam pelarut karena membutuhkan pemutusan ikatan hydrogen
sebagaimana halnya senyawa-senyawa tersebut berada dalam molekul-molekul air atau
metanol misalnya. Oleh karenanya, senyawa-senyawa ini akan menghabiskan waktu
dalam larutan dan akan bergerak lambat dalam kolom.

Ini berarti bahwa molekul-molekul polar akan bergerak lebih cepat melalui kolom.
Fase balik HPLC adalah bentuk yang biasa digunakan dalam HPLC.Melihat seluruh
proses
Diagram alir HPLC
Injeksi sampel

Injeksi sample seluruhnya otomatis dan anda tidak akan mengharapkan bagaimana
mengetahui apa yang terjadi pada tingkat dasar. Karena proses ini meliputi tekanan, tidak
sama halnya dengan kromatografi gas (jika anda telah mempelajarinya).

You might also like