P. 1
teori

teori

|Views: 360|Likes:
Published by Mila Pratiwi

More info:

Published by: Mila Pratiwi on Sep 28, 2010
Copyright:Attribution Non-commercial

Availability:

Read on Scribd mobile: iPhone, iPad and Android.
download as RTF, PDF, TXT or read online from Scribd
See more
See less

02/23/2013

pdf

text

original

1. http://www.chemicool.com/definition/high_performance_liquid_chromatography_hplc.

ht ml High-performance liquid chromatography (HPLC) is a form of liquid chromatography to separate compounds that are dissolved in solution. HPLC instruments consist of a reservoir of mobile phase, a pump, an injector, a separation column, and a detector. Compounds are separated by injecting a plug of the sample mixture onto the column. The different components in the mixture pass through the column at different rates due to differences in their partitioning behavior between the mobile liquid phase and the stationary phase. Instrumentation Solvents must be degassed to eliminate formation of bubbles. The pumps provide a steady high pressure with no pulsating, and can be programmed to vary the composition of the solvent during the course of the separation. The liquid sample is introduced into a sample loop of an injector with a syringe. When the loop is filled, the injector can be inject the sample into the stream by placing the sample loop in line with the mobile phase tubing. The different types of HPLC columns are described in a separate document. The presence of analytes in the column effluent is recorded by detecting a change in refractive index, UV-VIS absorption at a set wavelength, fluorescence after excitation with a suitable wavelength, or electrochemical response. Mass spectrometers can also be interfaced with liquid chromatography to provide structural information and help identify the separated analytes. Performa tinggi kromatografi cairan (HPLC) adalah suatu bentuk kromatografi cair untuk memisahkan senyawa yang terlarut dalam larutan. instrumen HPLC terdiri dari suatu reservoir fase gerak, pompa, injektor, sebuah kolom pemisahan, dan detektor. Senyawa dipisahkan dengan menyuntikkan sebuah plug campuran sampel ke kolom. Berbagai komponen dalam campuran melalui kolom pada tingkat yang berbeda karena perbedaan perilaku partisi mereka antara fase cair bergerak dan fase diam. Instrumentasi Pelarut harus penghilangan untuk menghilangkan pembentukan gelembung. Pompa memberikan tekanan tinggi mantap dengan berdenyut tidak, dan dapat diprogram untuk memvariasikan komposisi pelarut selama pemisahan. Sampel cair dimasukkan ke dalam sebuah loop sampel sebuah penyuntik dengan jarum suntik. Ketika loop diisi, injector dapat menyuntikkan sampel ke sungai dengan menempatkan loop sampel sejalan dengan tubing fase gerak. Berbagai jenis kolom HPLC dijelaskan dalam dokumen terpisah. Kehadiran analit dalam kolom efluen dicatat dengan mendeteksi perubahan dalam indeks bias, serapan UV-VIS pada panjang gelombang ditetapkan, fluoresensi setelah eksitasi dengan panjang gelombang yang sesuai, atau respon elektrokimia. spektrometer massa juga dapat dihubungkan dengan kromatografi cair untuk memberikan informasi struktural dan membantu mengidentifikasi analit dipisahkan.

an inline solvent filter prevents any post-pump component damage.com/support/upchurch/hplc_center. This is based on the differential attraction of the sample components for the solvent and the packing material within the column. post-pump inline filter. The function of each of these components is briefly described below. Solvent is propelled through the system by the pump. a back pressure regulator is often installed immediately after the detector. an analytical column allows the primary sample separation to occur. An HPLC system begins with the solvent reservoir. Samples of interest are introduced to a solvent flow path. Because the sample often contains particulate matter. The next component in the system is the sample injector. The recorder helps analyze and interpret the data. pump. which slowly break down over time. guard column. back-pressure regulator and/or solvent sparging system. All this occurs under pressures which may reach or exceed 6. This often includes internal pump seals. This is important because bubbles in a flow cell can interfere with the detection of sample components. which contains the solvent used to carry the sample through the system. However.aspx High Performance Liquid Chromatography (HPLC) is an analytical process utilizing special instruments designed to separate. injector. detector. precolumn filter. an inert gas sparging system may be installed to force dissolved gasses out of the solvent being stored in the solvent reservoir. This valve. carried through a column packed with specialized materials for component separation. Following the injector. quantify. allows for the reproducible introduction of sample into the flow path. This device prevents solvent bubble formation until the solvent is completely through the detector.2. and component data is obtained through the combination of a detection mechanism coupled with a data recording system. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (HPLC) adalah suatu proses analitis .idex-hs. sample filter. As these seals break down and release particles into the flow path. the separated components pass through a detector flow cell before they pass into the waste reservoir. recorder and waste reservoir. Each of the components described above requires fittings to couple it into a system. which is digitized and sent to a recorder. The solvent should be filtered with an inlet solvent filter to remove any particles that could potentially damage the system's sensitive components. it is important to utilize either a sample filter or a precolumn filter to prevent valve and column damage. Other important elements are an inlet solvent filter. analytical column. As a final system enhancement. Following the analytical column. equipped with a sample loop of the appropriate size for the analysis being performed. also known as the injection valve. a sacrificial guard column is often included just prior to the analytical column to chemically remove components of the sample that would otherwise foul the main column. http://www.000 psi! The basic components of an HPLC system include a solvent reservoir. The sample components' presence in the flow cell prompts an electrical response from the detector. and analyze components of a chemical mixture. Alternatively.

perekam dan reservoir limbah.menggunakan instrumen khusus yang dirancang untuk memisahkan. detektor. regulator back-tekanan dan / atau pelarut Sparging sistem. penjaga kolom kurban sering dimasukkan sesaat sebelum kolom analisis untuk menghapus komponen kimiawi sampel yang akan dinyatakan busuk kolom utama. dan menganalisa komponen dari campuran bahan kimia. penting untuk memanfaatkan baik sampel filter atau precolumn filter untuk mencegah kerusakan katup dan kolom. Seperti anjing laut memecah dan melepaskan partikel ke jalur aliran. Pelarut harus disaring dengan pelarut inlet saringan untuk menghilangkan partikel yang berpotensi dapat merusak komponen-komponen sensitif sistem. yang secara perlahan memecah dari waktu ke waktu. Sampel bunga diperkenalkan ke jalur aliran pelarut. komponen dipisahkan melewati sebuah sel aliran detektor sebelum mereka masuk ke dalam reservoir limbah. mengukur. Ini didasarkan pada daya tarik diferensial dari komponen sampel untuk pelarut dan bahan kemasan dalam kolom. Fungsi dari masing-masing komponen secara singkat dijelaskan di bawah ini. kolom analitis memungkinkan pemisahan sampel utama terjadi. Semua ini terjadi di bawah tekanan yang dapat mencapai atau melebihi 6. Hal ini sering mencakup segel pompa internal. Sistem HPLC diawali dengan reservoir pelarut. Kehadiran . memungkinkan untuk pengenalan reprodusibilitas sampel ke dalam jalur aliran. dan data komponen diperoleh melalui kombinasi mekanisme deteksi digabungkan dengan sistem pencatatan data. Elemen penting lainnya adalah pelarut inlet filter. Karena sering berisi sampel partikulat. Valve ini. pasca-pompa inline filter. Komponen berikutnya dalam sistem adalah injektor sampel. pompa. sampel filter. Setelah kolom analitis. sebuah inline pelarut Saringan mencegah kerusakan komponen pasca-pompa. Pelarut didorong melalui sistem oleh pompa. juga dikenal sebagai katup injeksi. Namun. injektor. kolom analitis. dilakukan melalui kolom dikemas dengan bahan khusus untuk pemisahan komponen. yang berisi pelarut yang digunakan untuk membawa sampel melalui sistem. kolom penjaga. dilengkapi dengan sampel loop ukuran yang sesuai untuk analisis yang dilakukan. Setelah injektor.000 psi! Komponen dasar dari suatu sistem HPLC termasuk pelarut reservoir. precolumn filter.

HPLC memperbolehkan penggunaan partikel yang berukuran sangat kecil untuk material terpadatkan dalam kolom yang mana akan memberi luas permukaan yang lebih besar berinteraksi antara fase diam dan molekul-molekul yang melintasinya. didukung melalui tekanan tinggi sampai dengan 400 atm.scribd. Perekam membantu menganalisis dan menginterpretasikan data. Sebagai tambahan sistem final. Metode-metode ini sangat otomatis dan sangat peka. Atau. Perkembangan yang lebih luas melalui kromatografi kolom mempertimbangkan metode pendeteksian yang dapat digunakan.com/doc/27204824/Kromatografi-Cair-Kinerja-Tinggi Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Ditulis oleh Jim Clark pada 06-10-2007 HPLC adalah alat yang sangat bermanfaat dalam analisis. regulator tekanan balik sering dipasang segera setelah detektor. Pelaksanaan HPLC Pengantar HPLC secara mendasar merupakan perkembangan tingkat tinggi darikromatografi kolom. Meskipun disebut sebagai “normal†. http://www.komponen Sampel 'dalam sel aliran memicu reaksi listrik dari detektor. Hal ini memungkinkan pemisahan yang lebih baik dari komponen-komponen dalam campuran. yang didigitalkan dan dikirim ke recorder. Perangkat ini mencegah terbentuknya gelembung pelarut pelarut sampai benar-benar melalui detektor. Selain dari pelarut yang menetes melalui kolom dibawah grafitasi. Masing-masing komponen dijelaskan di atas membutuhkan alat kelengkapan untuk pasangan ke dalam sistem. ada dua perbedaan dalam HPLC. Hal ini penting karena gelembung dalam sel aliran dapat mengganggu deteksi komponen sampel. Kolom dan pelarut Membingungkan. yang mana tergantung pada polaritas relatif dari pelarut dan fase diam. ini bukan  . Bagian ini menjelaskan bagaimana pelaksanaan dan penggunaan serta prinsip HPLC yang sama dengan kromatografi lapis tipisdan kromatografi kolom. Fase normal HPLC Ini secara esensial sama dengan apa yang sudah anda baca tentang kromatografi lapis tipis atau kromatografi kolom. Ini membuatnya lebih cepat. suatu gas inert Sparging sistem dapat diinstal untuk memaksa gas terlarut dari pelarut disimpan di reservoir pelarut.

senyawa yang non polar kemudian akan lebih cepat melewati kolom. .Melihat seluruh proses Diagram alir HPLC Injeksi sampel Injeksi sample seluruhnya otomatis dan anda tidak akan mengharapkan bagaimana mengetahui apa yang terjadi pada tingkat dasar. Oleh karena itu. Senyawa-senyawa polar dalam campuran melalui kolom akan melekat lebih lama pada silika yang polar dibanding degan senyawa-senyawa non polar. Karena proses ini meliputi tekanan. akan terdapat atraksi yang kuat antara pelarut polar dan molekul polar dalam campuran yang melalui kolom. Fase balik HPLC adalah bentuk yang biasa digunakan dalam HPLC. Atraksi yang terjadi tidak akan sekuat atraksi antara rantai-rantai hidrokarbon yang berlekatan pada silika (fase diam) dan molekulmolekul polar dalam larutan. tetapi silika dimodifikasi menjadi non polar melalui pelekatan rantai-rantai hidrokarbon panjang pada permukaannya secara sederhana baik berupa atom karbon 8 atau 18. Kolom diisi dengan partikel silika yang sangat kecil dan pelarut non polar misalnya heksan. Senyawa-senyawa non polar dalam campuran akan cenderung membentuk atraksi dengan gugus hidrokarbon karena adanya dispersi gaya van der Waals. molekul-molekul polar dalam campuran akan menghabiskan waktunya untuk bergerak bersama dengan pelarut. Sebuah kolom sederhana memiliki diameter internal 4.6 mm (dan mungkin kurang dari nilai ini) dengan panjang 150 sampai 250 mm. ukuran kolom sama.merupakan bentuk yang biasa dari HPLC. tidak sama halnya dengan kromatografi gas (jika anda telah mempelajarinya). Sebagai contoh. Ini berarti bahwa molekul-molekul polar akan bergerak lebih cepat melalui kolom. senyawa-senyawa ini akan menghabiskan waktu dalam larutan dan akan bergerak lambat dalam kolom. Dalam kasus ini. pelarut polar digunakan berupa campuran air dan alkohol seperti metanol. Oleh karena itu. Fase balik HPLC Dalam kasus ini. Senyawa-senyawa ini juga akan kurang larut dalam pelarut karena membutuhkan pemutusan ikatan hydrogen sebagaimana halnya senyawa-senyawa tersebut berada dalam molekul-molekul air atau metanol misalnya. Oleh karenanya.

You're Reading a Free Preview

Download
scribd
/*********** DO NOT ALTER ANYTHING BELOW THIS LINE ! ************/ var s_code=s.t();if(s_code)document.write(s_code)//-->