KARBOHIDRAT

Karbohidrat adalah polihidroksi aldehid atau polihidroksiketon dan meliputi kondensat polimer-polimernya yang terbentuk. Nama karbohidrat dipergunakan pada senyawa-senyawa tersebut, mengingat rumus empirisnya yang berupa CnH2nOn atau mendekati Cn(H2O)n yaitu karbon yang mengalami hidratasi. Namun demikian nama ini sebenarnya kurang tepat karena hidrat (H2O) yang melekat pada gugus karbon bukanlah sebagai hidrat yang sebenarnya, misalnya tidak dapat dipisahkan atau dikristalkan tersendiri yang terlepas dari gugusnya. Secara alami, ada tiga bentuk karbohidrat yang terpenting, yaitu : 1. Monosakarida Sangat sedikit terdapat di alam karena tidak digunakan sebagai bahan simpanan makanan. Bahan monosakarida yang terdapat dalam perdagangan umumnya dibuat melalui proses hidrolisa bahan polisakarida. Bahan monosakarida untuk makanan dan obat-obatan misalnya glukosa dan fruktosa sering dibuat dari jagung, ketela, dan lainlain. 2. Oligosakarida Bentuk yang paling umum dari oligosakarida adalah disakarida (terdiri dari dua unit monosakarida) yang terjadi dari proses kondensasi dua molekul monosakarida. Contoh yang paling umum dari disakarida adalah sukrosa (atau sakarosa). 3. Polisakarida Merupakan kelompok karbohidrat yang paling banyak terdapat di alam. Merupakan senyawa makromolekul yang terbentuk dari banyak sekali satuan (unit) monosakarida. Jumlah polisakarida ini terdapat jauh lebih banyak daripada oligo maupun monosakarida. Sebagian dari polisakarida membentuk struktur tanaman yang tak dapat larut misalnya selulosa dan hemiselulosa. Sebagian lagi membentuk senyawa cadangan pangan berbentuk pati dalam tanaman atau glikogen pada sel-sel hewan. Sebagian lagi membentuk gum (atau gom), pektin, dan derivat-derivatnya. A. Sifat-sifat Karbohidrat Mono dan disakarida memiliki rasa manis oleh sebab itu golongan ini disebut gula. Glukosa (gula anggur) dan fruktosa (gula buah) adalah contoh monosakarida yang banyak dijumpai di alam. Sukrosa (gula tebu, gula bit) dan laktosa (gula susu) adalah kelompok disakarida yang juga manis. Rasa manis dari gula-gula ini

disebabkan oleh gugus hidroksilnya. Trihidroksi (gliserol) dan polihidroksi lain juga berasa manis. Sedangkan polisakarida tidak terasa manis karena molekulnya sedemikian besarnya sehingga tidak dapat masuk ke dalam sel-sel kuncup rasa (taste bud) yang terdapat pada permukaan lidah. Semua jenis karbohidrat baik mono, di maupun polisakarida akan berwarna merah apabila larutannya (dalam air) dicampur dengan beberapa tetes larutan α-naphthol (dalam alkohol) dan kemudian dialirkan pada asam sulfat pekat dengan hati-hati sehingga tidak tercampur. Warna merah akan tampak pada bidang batas antara campuran karbohidrat dengan α-naphthol dan asam sulfat pekat. Sifat ini dipakai sebagai dasar uji kualitatif adanya karbohidrat dan dikenal sebagai uji Molisch. Warna biru kehijauan akan timbul apabila larutan karbohidrat dicampur dengan asam sulfat pekat dan anthrone. Warna ini timbul karena terbentuknya furfural dan hidroksi furfural sebagai senyawa derivat dari gula-gula. O OH C

C α – naphthol H2 anthrone

H C HC O Furfural

H C C CHO HO H2C

H C C O

H C C CHO

Hidroksimetilfurfural

B.

Analisa Karbohidrat

Apabila dalam bahan banyak mengandung enzim yang dapat menghidrolisa gula maka harus ditambahkan merkuri khlorida untuk mencegah hidrolisa atau ekstraksinya dilakukan dengan alkohol (ethanol 80%) dan sampel dipanaskan selama 30 menit. analisa karbohidrat yang biasa dilakukan misalnya penentuan jumlahnya secara kuantitatif dalam rangka menentukan komposisi suatu bahan makanan. maka selama ekstraksi ditambah kalsium karbonat untuk menetralkannya. bentuk rantai polimer yang lurus dan sebagainya. kelekatan. dll). Persiapan sampel Sebelum dilakukan analisa karbohidrat terlebih dahulu bahan dibebaskan dari zat-zat pencampur dan dilakukan penjernihan terhadap larutan yang akan dianalisa. kegemukan. serat kasar dalam percernaan (dietary fibers) dan sebagainya. C. penentuan sifat fisis atau kimiawinya dalam kaitannya dengan pembentukan kekentalan. analisa dilakukan misalnya untuk penentuan struktur polimer karbohidrat.Dalam ilmu dan teknologi pangan. analisa karbohidrat dapat meliputi analisa perubahan-perubahan yang terjadi selama proses biologis. peranan dan fungsinya dalam pembentukan boimolekul atau kaitannya dengan struktur sel. pencegahan penyakit (diabetes. sangat penting untuk mengadakan analisa biologis (bioassay) senyawa-senyawa karbohidrat dalam kaitan peranannya membentuk kalori. Supaya selama menghilangkan zat-zat pencampur tidak terjadi inversi dan hidrolisa dari sukrosa oleh asam-asam organik yang ada dalam bahan makanan atau pertanian. dalam keadaan berlebihan tidak mengganggu ketepatan analisa dan hasil pengendapan harus mudah dipisahkan dari larutannya. karies gigi. Penentuan Karbohidrat . Lipida dan khlorofil dihilangkan dengna ekstraksi menggunakan ether. stabilitas larutan dan tekstur hasil olahannya. Zat penjernih yang dipakai harus mempunyai sifatsifat yang menguntungkan yaitu antara lain dapat mengendapkan zat bukan gula tanpa mengabsorbsi atau memodifikasi zat-zat gula. Dalam bidang kimia murni. Dalam bidang bioteknologi. analisa yang dilakukan untuk menetukan jenis dan perubahan kimiawi yang dialami karbohidrat selama proses fermentasi misalnya menjadi sangat penting untuk menentukan kondisi proses yang optimal. Dalam ilmu gizi. Sedangkan dalam biokimia.

timbale asetat merupakan salah satu bahan yang paling banyak dipakai dalam penjernihan larutan gula yang akan dianalisa. Uji Kualitatif Karbohidrat mengendapkan protein pada umumnya. terutama dipakai untuk mengendapkan protein pada umumnya. Penukar ion juga sering dipakai untuk menghilangkan asam amino yang Poliamida. • • • • • • Asam trikhloroasetat atau asam fosfotungstat. Hal ini karena sifat timbale asetat yang cukup efektif dalam mengendapkan asam amino. Banyak cara untuk mengetahui adanya karbohidrat dalam suatu bahan antara lain : . Zat tersebut untuk mengendapkan protein yang berasal dari susu. dapat digunakan untuk Poliamida. asam organik pada umumnya. protein. Asam trikhloroasetat atau asam fosfotungstat. dapat mengendapkan asam organik.Zat penjernih yang dapat digunakan pada Analisa Karbohidrat: • • • Timbal asetat. gelatin ataupun polivinil polipirolidon biasa digunakan untuk Penukar ion juga sering dipakai untuk menghilangkan asam amino yang Dari sekian banyak zat yang dapat digunakan. dapat digunakan untuk Campuran Ba(OH)2 dan ZnSO4. polifenol Alumunium hidroksida. D. mengendapkan protein yang berasal dari jaringan daging. Somogyi. ZnSO4. Kedua garam tersebut disebut reagen Carrez I dan II. protein. dapat mengendapkan zat koloid Kieselguh. 7 H2O serta dibuat basis dengan NaOH. terutama dipakai untuk mengendapkan protein yang berasal dari jaringan daging. dapat mengendapkan zat koloid • • • • Campuran merkuri nitrat dan alkali. menghilangkan zat warna dalam larutan. menghilangkan zat warna dalam larutan terdapat pada larutan gula. dipakai untuk mengendapakan protein. gelatin ataupun polivinil polipirolidon biasa digunakan untuk Potasium ferrisianida (K3Fe(CN)6 3 H2O) dan biasanya dicampur dengan terdapat dalam larutan gula. bisa dipakai dalm analisa karbohidrat cara Campuran merkuri nitrat dan alkali. asam amino. tannin.

Fufural atau hidroksi metil furfural dengan alfa naftol akan berkondensasi memebntuk senyawa kompleks yang berwarna ungu. dehidrasi heksosa menghasilkan hidroksi metil furfural dan dehidrasi ramnosa dihasilkan metil furfural. Hal ini dikarenakan aldosa sebelum mengalami dehidrasi lebih dahulu mengalami transformasi menjadi ketosa.• Uji Molisch Karbohidrat oleh asam sulfat pekat akan dihidrolisa menjadi monosakarida dan selanjutnya monosakarida mengalami dehidrasi oleh asam sulfat menjadi furfural atau hidroksi metil furfural. Dengan demikian. aldosa akan bereaksi negatif pada uji Seliwanoff. Pada pengujian ini furfural yang terbentuk dari dehidrasi tersebut dapat bereaksi dengan resorcinol membentuk senyawa kompleks berwarna merah. HC HC O Furfural OH CH H C C=O C O Hidroksi metil furfural C C=O HC CH Alfa naftol Dehidrasi pentosa oleh asam akan dihasilkan furfural. • Uji Seliwanoff Peristiwa dehidrasi monosakarida ketosa menjadi furfural lebih cepat dibandingkan dehidrasi monosakarida aldosa. . Apabila pemberian asam sulfat pada larutan karbohidrat yang telah diberi alfa naftol melalui dinding gelas dan secara hati-hati maka warna ungu yang terbentuk berupa cincin pada batas antara larutan karbohidrat dengan asam sulfat.

• Uji Benedict Gula reduksi dangan larutan Benedict (campuran garam kuprisulfat. Natrium karbonat) akan terjadi reaksi reduksi oksidasi dan dihasilkan endapan berwarna merah dari kupro oksida. • Uji Anthrone Karbohidrat oleh asam sulfat akan dihidrolisa menjadi monosakarida dan selanjutnya monosakarida menalami dehidrasi oleh asam sulfat menjadi furfural atau hidroksi metil furfural. O R • C H + CuO Cu2O +R C O OH Uji Barfoed Larutan Barfoed (campuran cupri asetat dan asam asetat) akan bereaksi dengan gula reduksi (monosakarida) sehingga dihasilkan endapan merah kuprooksida. Dalam suasana asam ini gula reduksi yang termasuk dalam golongan .3 dihidroksi benzen) Sebagai zat untuk dehidrator dapat digunakan asam khlorida 12% atau asam asetat atau asam sulfat alkoholik. 10-dihidro-9-oxoanthracene) membentuk senyawaan kompleks yang berwarna biru kehijauan. Natrium sitrat. Selanjutnya senyawaan furfural ini dengan anthrone (9.OH OH Resorcinol (1.

amilopektin dengan iodin akan berwarna merah violet. • Uji Fehlings Larutan Fehlings yang terdiri dari campuran kupri sulfat. Na-K-tartrat dan Natrium hidroksida dengan gula reduksi dan dipanaskan akan terbentuk endapan yang berwarna hijau. Amilosa dengan iodin akan berwarna biru. E. atau . atom C yang mengalami reaksi adalah atom C nomer satu dan dua dari aldosa atau ketosa. • Uji Iodin Karbohidrat golongan polisakarida akan memberikan reaksi dengan larutan iodin dan memberikan warna spesifik bergantung pada jenis karbohidratnya. kuning-orange atau merah tergantung dari macam gula reduksinya. • Uji Pembentukan Osason Aldosa ataupun ketosa dengan fenilhidrasine dan dipanaskan akan membentuk hidrason atau osason.disakarida memberikan reaksi yang sangat lambat dengan larutan Barfoed sehingga tidak meberikan endapan merah kecuali pada waktu percobaan yang diperlama. Na-karbonat dan asam sitrat (reagen Luft). glikogen maupun dextrin dengan iodin akan berwarna merah coklat. Uji Kuantitatif Karbohidrat Cara yang dapat digunakan untuk menentukan banyaknya karbohidrat dalam suatu bahan antara lain : Cara Kimiawi Metoda oksidasi dengan kupri : Metoda ini didasarkan pada peristiwa tereduksinya kupri-oksida menjadi kupro oksida karena danya gula reduksi. Reaksi antar senyawaan tersebut merupakan reaksi oksido-reduksi. Fruktosa dan glukosa menunjukkan osason yang sama. Senyawa ini terjadi karena gugus aldehid ataupun ketonik dari karbohidrat berikatan dengan fenolhidrasin. Uji ini untuk penunjukkan gula reduksi monosakarida. Reagen yang digunakan merupakan campuran kupri sulfat.

Setelah diketahui selisih banyaknya titrasi blanko dan titrasi sampel kemudian dikonsultasikan dengan tabel yang sudah tersedia yang menggambarkan hubungan antara banyaknya Na-tiosulfat . Untuk mengetahui bahwa titrasi sudah cukup maka diperlukan indikator amilum. Banyaknya iod yang dibebaskan ekivalen dengan banyaknya kuprioksida. Penentuan gula reduksi dalam larutan yang sering digunakan adalah sebagai berikut : Cara Luff Schoorl Pada penentuan gula cara Luff Schoorl. Selain dengan cara tersebut juga dapat dengan menentukan kelebihan kuprioksida yang ada dalam larutan sebelum dan sesudah direaksikan dengan gula reduksi. Banyaknya iod dapat diketahui dengan titrasi manggunakan Na-tiosulfat. Apabila larutan berubah warnanya dari biru menjadi putih berarti titrasi sudah selesai. Pada kedua macam reagen tersebut yang berfungsi sebagai oksidator adalah kuprioksida yang dengan gula reduksi akan mengalami reduksi menjadi kuprooksida dan mengendap berwarna merah bata. Reaksi yang terjadi selama penentuan karbohidrat cara ini mula-mula kuprioksida yang ada dalam reagen akan membebaskan iod dari garam K-iodida. Agar perubahan warna dari biru menjadi putih dapat tepat maka penambahan amilum diberikan pada saat titrasi hampir selesai.campuran kupri sulfat dan K-Na-tartrat (reagen Soxhlet). K-Na-tartrat berfungsi sebagi pencegah terjadinya pengendapan kupri oksida yang ada dalam reagen. Selisih kuprioksida sebelum dan sesudah direaksikan dengan gula reduksi adalah ekuivalen dengan kuprioksida yang terbentuk. Kuprooksida yang terbentuk dapat diketahui dengan menimbang setelah dikeringkan atau dengan melarutkan kembali dan selanjutnya dititrasi. Selisih titrasi blanko dengan titrasi sampel ekuivalen dengan kuprooksida yang terbentuk juga ekuivalen dengan jumlah gula reduksi yang ada dalam bahan atau larutan. Penentuannya dengan titrasi menggunakan Na-tiosulfat. yang ditentukan bukannya kuprooksida yang mengendap tetapi dengan menentukan kuprioksida dalam larutan sebelum direaksikan dengan gula reduksi (titrasi blanko) dan sesudah direaksikan dengan sampel gula reduksi (titrasi sampel). Jumlah endapan kuprooksida ekuivalen dengan banyaknya gula reduksi yang ada.

Banyaknya larutan contoh yang dibutuhkan untuk menitrasi reagen Soxhlet dapat diketahui banyaknya gula yang ada dengan melihat pada tabel Lane-Eynon. Pada tabel IV. K-Na-tartat) dengan larutan gula yang diselidiki.1 tersebut dapat diketahui jumlah gula reduksi yang ada dalam larutan. Na2S2O3 5H2O/1) sesuai dengan 11. Tiap 1 ml Natiosulfat (39 gram.dengan banyaknya gula reduksi. Reaksi yang terjadi dalam penentuan gula cara Luff dapat dituliskan sebagai berikut : R H2SO4 COH + CuO + CuO + 2 KI Cu2O CuSO4 CuI2 Cu2I2 +R + H2O + K2SO4 + I2 COOH CuSO4 2 CuI2 I2 + Na2S2O3 Na2S4O6 + NaI I2 + amilum = biru Cara Munson-Walker Penentuan gula cara ini adalah dengan menentukan banyaknya kuprooksida yang terbentuk dengan cara penimbangan atau dengan melarutkan kembali dengan asam nitrat kemudian menitrasi dengan tiosulfat. Jumlah kuprooksida yang terbentuk ekivalen dengan banyaknya gula reduksi yang ada dalam larutan dan telah disediakan dalam bentuk tabel Hammond hubungan antara banyaknya kuprooksida dengan gula reduksi. Agar supaya diperoleh penentuan yang tepat maka reagen Soxhlet perlu .259 mg Cu2O Cara Lane-Eynon Penentuan gula cara ini adalah dengan cara menitrasi reagen Soxhlet (larutan CuSO4.

7 2. 27.7 2.1 50.0 mg. 4. Pada titrasi reagen Soxhlet dengan larutan gula akan berakhir apabila warna larutan berubah dari biru menjadi tidak berwarna. 17. 7.6 22.0 59.2 47.0 2.5 44.1 fruktosa. Padahal pada tabel menunjukkan untuk 21 ml larutan gula invert tertera 51.0 3.4 14.5 mg = 52. 11.0 3.7 24. invert mg C6H12O6 33.7 38.2 2.427 mg.1 N Glukosa.0 53.5 38.2 2.1 3. Jadi total gula reduksi yang diperlukan untuk mereduksi 10 ml reagen Soxhlet adalah 21 x 2.6 2.distandarisasi dengan larutan gula standar.5 15.5 mg. Dalam 100 ml larutan sampel terdapat gula invert = 100/20 x 52. 2. Bila pada titrasi sampel memerlukan 20 ml maka dalam bahan terdapat gula invert sebanyak 50.03.0 = 1. invert mg C6H12O6 fruktosa. 12.4 2.427 mg = 262.7 2. gula Δ 1.1 62. 22.9 2. 7. 8.4 13. 19.3 2. 6. gula ml Thio. 25.7 23.03 = 52. *) 0. 14.0 25.0 Δ 2.5 mg/ml) sebanyak 21 ml.5 16. 12.5 17. 9. Indikator yang digunakan pada cara ini adalah methilen biru.8 2. dan gula invert dalam suatu bahan **) ml Thio. *) ml 0.135 mg Tabel IV. *) 0. Standarisasi ini dikerjakan untuk menentukan besarnya faktor koreksi dalam menggunakan tabel Lane-Eynon.0 56.6 21.6 19.4 2.2 2.5 : 51. 30.5 18. 10. Contoh perhitungan : Sebanyak 10 ml regaen Soxhlet misalnya memerlukan titrasi gula standar (konsentrasi 2.1 N Glukosa.9 3. 3. 9. 2.8 2.6 20.9 x 1. 4.8 2. jadi faktor korekjsinya adalah 52. 5.1 Penentuan glukosa.1 N Thio = titrasi blanko – titrasi sampel **) analisa dengan metoda Luff Schoorl .9 2.8 2. fruktosa.

Jumlah ferrosianida yang terbentuk ekuivalen dengan jumlah gula reduksi dalam sampel. juga dapat dilakukan dengan titrasi menggunakan larutan gula dan indicator yang dipakai adalah asam pikrat atau methilen biru. Ferrosianida yang terbentuk dapat dihitung sebagai selisih atau perbedaan antara ferrisianida yang ditambahkan dengan jumlahnya setelah terjadi reaksi reduksi. Reaksinya dapat dituliskan sebagai berikut : 2 K3Fe (CN)6 + 2 KI 2 K4Fe(CN)6 + I2 Bila ke dalam campuran zat yang dianalisa tersenut diberikan ion Zn++ misalnya dalam bentuk Zink sulfat maka ferrosianida yang terbentuk akan diendapkan sebagai senyawaan kompleks yang reaksinya dapat dituliskan sebagai berikut : 2 K4Fe (CN)6 + 3 ZnSO4 K2Zn3 [ Fe(CN)6 ]2 + 3 K2SO4 endapan Menentukan gula reduksi cara ini dapat ditentukan berdasarkan jumah iodin yang dibebaskan dengan menitrasi menggunakan Natrium-thiosulfat standar. Penentuan gula dengan cara oksidasi dengan larutan ferrisianida alkalis lebih baik daripada oksidasi dengan larutan kupri sulfat karena reagen ferrisianida dalam alkali lebih stabil dan ferrisianida yang terbentuk lebih stabil daripada kuprooksida. Titrasi ini mempergunakan indicator amilum dimana akhir titrasi ini adalah tepat hilangnya warna biru dari iod-amilum. Pada cara ini digunakan pula titrasi standarisasi menggunakan larutan gula standar terhadap ferrisianida yang digunakan. Cara lain untuk menentukan jumlah gula cara oksidasi dengan ferrisianida adalah dengan menentukan jumlah ferrosianida dengan ceric sulfat menggunakan indicator phenantroline atau ditentukan secara kalorimetri. Selain itu. Jumlah iodine ekuivalen dengan gula dan dapat dihitung berdasarkan jumlah thio yang dipergunakan untuk titrasi.Metoda oksidasi dengan larutan ferrisianida alkalis Cara ini berdasarkan peristiwa tereduksinya ferrisianida menjadi ferrosianida oleh senyawaan gula reduksi. Bila diketahui tiap milliliter thio standar ekuivalen dengan sejumlah gula reduksi (berdasar percobaan standarisasi) maka mudah diketahui dan dihitung gula yang ada dalam sampel. Kelemahan cara ini adalah ferrisianida mudah direduksi .

Na format. Setelah itu diasamkan dengan asam khlorida atau asam sulfat dan dibiarkan beberapa menit. Reaksinya dapat dituliskan sebagai berikut : • Titrasi sampel O R – C – H + I2 + 3 NaOH I2 (sisa) + 2 Na2S2O3 I2 • + amilum O R – C – ONa + 2 NaI + 2 H2O Na2S4O6 + 2 NaI iod-amilum (biru) Titrasi blanko I2 (total) + 2 Na2S2O3 Na2S4O6 + 2 NaI Dalam keadaan optimal dan kondisi terkontrol hanya = 1 % dari ketosa yang ada dalam sampel teroksidasi sehingga tidak mempengaruhi dalam penentuan aldosa. sedangkan untuk ketosa hanya sedikit yang mengalami oksidasi. Zat – zat tersebut dapat bereaksi dengan iodin. Cara Ensimatis a. Penentuan glukosa dan fruktosa . mannitol. Na laktat. Larutan sampel ditambah iodine encer dan NaOH kemudian dicampur secepatnya (karena iodin dapat berubah menjadi iodat dan tidak reaktif terhadap gula dalam larutan alkalis). gliserin. Kemudian kelebihan iodine dititrasi dengan larutan thiosulfat standar. Metoda iodometri Iodin dalam medium yang alkalis dapat terkonversi dengan cepat menjadi hipoiodida.oleh senyawaan reduksi baik gula maupun bukan gula sehingga penunjukkannya kurang tepat. aseton. dan Urea. Untuk memperbesar ketelitian penentuan cara ini maka adanya zat yang dapat mempengaruhi harus dihilangkan misalnya etanol. Hipoiodida dapat mengoksidasi aldosa.

Jumlah NADPH yang terbentuk setara dengan jumlah fruktosa yang ada. Setelah reaksi (3) selesai. F-6-P perlu diubah menjadi G-6-P dengan bantuan enzim fosfoglukosa isomerasi (PGI) PGI 4. G-6-P dioksidasi oleh Nikotinamida Adenin Dinukleotida (NADP) menjadi glukonat6-fosfat G6P-DH 3. Glukosa + ATP 2. Fruktosa + ATP G-6-P + ADP F-6-P + ADP Dengan adanya enzim glukosa-6-fosfat dehidrogenase (G6P-DH). Penentuan laktosa dan galaktosa Dasar penentuan laktosa dan galaktosa dengan enzim adalah laktosa dapat dihidrolisis menjadi glukosa dan β galaktosa oleh enzim β galaktosidase dan air.Dasar penentuan cara ini adalah glukosa dan fruktosa difosforilasikan menjadi glukosa-6-fosfat (G6P) dan fruktosa-6-fosfat (F6P) dengan bantuan enzim heksokinase (HK) dan Adenosin-5-trifosfat (ATP). 1.DH β Galaktosa + NAD Asam galatonat + NADH + H+ Glukosa + β galaktosa . Glukosa-6-fosfat + NADP Glukosa-6-fosfat + NADPH + H+ Jumlah NADPH yang terbentuk setara dengan banyaknya glukosa yang bereaksi sehingga NADPH inilah yang diukur dengan spektrofotometer pada serapan sinar dengan panjang gelombang 334 atau 340 atau 365 nm. Selanjutnya β galaktose dioksidasi oleh Nikotinamida Adenin-Dinukleotida (NAD) menjadi asam galatonat dengan bantuan enzim galalosa dehidrogenase (GAL-DH) Β-galaktosidase Laktosa + H2O GAL . b. Fruktosa-6-fosfat Glukosa-6-fosfat Glukosa-6-fosfat dengan NADP membentuk glukonat-6-fosfat dan NADPH.

Perlakuan ini dikerjakan untuk mencegah terjadinya tailing misalnya pada khromatografi kertas atau khromatografi lapis tipis. Untuk mengurangi tailing dapat dikerjakan dengan nelarutkan kembali zat-zat yang terabsorbsi pada zat penyerap (absorbent) dengan mencuci menggunakan asam. suhu. Kenaikan jumlah NADH diukur dari serapan sinar pada panjang gelombang 334. Fase bergerak dapat berupa zat cair atau gas. Rf = Jarak perpindahan molekul zat Jarak perpindahan pelarut Harga Rf tiap jenis gula adal tertentu untuk suatu perlakuan yang sama. sedang bila zat cair sebagai fase tetapnya disebut khromatografi partisi. Di dalam analisa khromatografi kertas atau lapis tipis diukur besarnya Rf (Retardation factor) tiap komponen karbohidrat yaitu perbandingan jarak perpindahan molekul zat dengan jarak perpindahan pelarut. Tailing menyebabkan kesukaran dalam analisa kuantitatif selanjutnya.Jumlah NADH yang terbentuk setara dengan jumlah laktosa yang ada. sedangkan fase tetap dapat berupa zat padat atau zat cair. ukuran bejana. Apabila zat padat sebagai fase tetapnya maka disebut khromatografi serapan. Dalam khromatografil ekstrak yang akan ditentukan karbohidratnya perlu dimurnikan dan dijernihkan. Nilai R f suatu jenis gula dipengaruhi oleh berbagai factor antara lainmacam zat pelarut.340 atau 365 nm Cara Khromatografi Penentuan karbohidrat dengan cara khromatografi adalah dengan mengisolasi dan mengidentifikasi karbohidrat dalam suatu campuran. Selain itu senyawa-senyawa anorganik yang ada harus dihilangkan misalnya dengan jalan melewatkan ekstrak di dalam suatu alat penukar ion (ion exchanger). Dengan . macam fase tetap dan sifat zat yang dianalisa. Selain itu dengan melakukan elusi terhadap pelarut secara bertahap dengan fase bergerak (mobil) yaitu pelarut yang lebih polar. Isolasi karbohidrat ini berdasarkan prinsip pemisahan suatu campuran berdasarkan atas perbedaan distribusi rationya pada fase tetap dengan fase bergerak.

Sampel yang telah disiapkan diteteskan pada salah satu ujung kertas dengan menggunakan mikro pipet sehingga diperoleh spot yang bulat. Khromatografi kertas Penentuan karbohidrat cara ini merupakan cara yang sederhana yaitu menggunakan kertas yang tersusun oleh selulosa murni sebagai penyokong fase tetap (air). sedang. Kertas yang digunakan untuk khromatografi merupakan ikatan serabut-serabut selulosa yang saling berhubungan dengan ikatan hydrogen. dan di antara sel terdapat air sebanyak kurang lebih 2 – 5%. Biasanya dipakai kertas whatman dengan kecepatan sedang yaitu whatman no. 1. Salah satu contoh penentuan karbohidrat yang akan diuraikan adalah khromatografi kertas. Kertas yang dipakai adalah kertas Whatman yang dapat dibedakan menjadi 3 berdasarkan kecepatan merambat zat yaitu cepat.demikian dalam mencantumkan harga Rf dari suatu zat harus dicantumkan pula kondisi analisanya. bersih dan bebas dari gas atau uap terutama yang mempunyai affinitas tinggi terhadap selulosa serta dalam ruang yang tertutup. Selulosa merupakan zat inert sehingga dapat digunakan sebagai zat penyangga. Kertas yang akan digunakan harus disimpan dalam tempat yang kering. Pada garis besarnya penentuan karbohidrat secara kromatografi kertas dilakukan sebagai berikut : kawat pengembang kertas botol pengembang spot pelarut Pertama kali dibuat potongan kertas ukuran tertentu sesuai dengan kebutuhan. dan lambat. Agar diperoleh spot yang cukup besar konsentrasinya maka penetesan sampel .

. Kemudian setelah dikeringkan akan timbul noda berwarna dan dapat dihitung Rf-nya dan dapat ditentukan macam gulanya sesuai dengan standar gula yang digunakan. Selanjutnya kertas dimasukkan ke dalam wadah yang berisi zat pelarut tertentu sehingga kedudukan kertas tegak lurus dan spot berada kurang lebih 1 cm di atas permukaan pelarut. Secara fisis dapat dilakukan dengan menyinari kertas dengan sinar ultraviolet dengan panjang gelombang sinar 254 nm – 370 nm. ketopentosa (hijau tua). Dapat pula dengan cara kimiawi yaitu dengan menyemprotkan larutan kimia tertentu misalnya anilinphtalet atau m-phenyleneidamine atau perak nitrat untuk gula reduksi. fase bergerak dan molekul zat yang akan dipisahkan. Apabila pelarut sudah merambat sampai tanda tersebut maka kertas diambil dan dikeringkan. Campuran pelarut tersebut pada umumnya terdiri atas pelarut organic air dan asam atau basa. Untuk gula non reduksi dapat menggunakan naphotoresorsinol dalam asam fosfat. Perlu dicatat pada pemilihan pelarut yang digunakan sebaiknya tidak memberi reaksi warna pada kertas. Setelah wadah ditutup dan dibiarkan beberapa lama maka pelarut akan merambat pada kertas sampai pada ujung kertas yang lain untuk itu perlu diberi tanda batas akhir perambatan pelarut pada kertas. Agar supaya antara fase tetap. ketoheksosa (kuning coklat) dan dengan methyl pentose memberikan warna hijau. Spot yang terbentuk harus sekecil mungkin karena spot yang besar akan menyebabkan pemisahan tidak sempurna atau terjadi tailing. Reagen kimia tersebut pada kertas d ruang asam karena dapat mengganggu kesehatan operatornya. Pelarut yang digunakan dapat berbentuk larutan murni atau campuran. Untuk penentuan gula-gula sederhana pelarut yang dipakai adalah campuran butanol : asetat : air atau propanol : asam asetat : air atau asam asetat : pyridin : air dengan perbandingan 4 : 1 : 5. Larutan phloroglusinol dan asam khlorida dapat digunakan untuk aldosapentosa (memberikan warna violet). Deteksi dan identifikasi gula-gula dalam kertas khromatografi dapat dilakukan dengan cara fisis atau kimiawi. Setelah kertas menjadi menjadi kering maka untuk mengetahui adanya pemisahan antara zat-zat yang ada perlu diidentifikasi.dilakukan 3 – 4 kali dengan cara penetesan berikutnya setelah penetasa pertama sudah kering. Selain larutan tersebut di atas pula dipakai uap iodin.

Cara Optik (fisis) Penentuan karbohidrat dengan cara fisis antara lain dengan menentukan indeks biasnya menggunakan refraktrometer. sampel yang digunakan sangat sedikit. Pada penentuan gula cara polarimetri mendasarkan pada hukum Biot yaitu kapasitas rotasi untuk tiap individu gula adalah sebanding dengan konsentrasi . yaitu antara 1. Putaran optic dapt diukur dengan secara menggunakan polarimetri polarimeter/sakharimeter. Indeks bias suatu zat dipengaruhi oleh beberapa faktor yaitu panjang gelombang sinar dan suhu pengukuran. tidak terlalu pekat ataupun encer. Ada beberapa model refraktometer yang dapat dipakai antara lain refraktometer Abbe.0002. Indeks bias dinyatakan dengan notasi artinya : pengukuran indeks bias pada suhu 20OC dengan menggunakan sinar Natrium sebagai sumber sinar monokromatis. yaitu beberapa tetes 3. Konsentrasi sampel pada daerah yang optimum untuk alat yang sehingga perlu penjernihan sebelumnya bersangkutan. Untuk memperoleh hasil yang diteliti harus diperhatikan : a) b) c) Larutan harus jernih dan tidak berwarna Larutan tidak mengandung bahan asing yang bersifat optis aktif. ketelitiannya sampai ± 0.75 2. mempunyai skala indeks bias cukup lebar intervalnya. Analisa gula/karbohidrat mempunyai keuntungan antara lain sampel tidak mengalami kerusakan dan dapat dilakukan dengan cepat. Alat ini mempunyai keunggulan antara lain : 1.30 – 1. Indeks bias dapat digunakan untuk identifikasi dan determinasi kemurnian suatu bahan dan komposisi suatu campuran homogen yang diketajui konstituennya. Penentuan karbohidrat dengan Polarimeter Karbohidrat bersifat optis aktif sehingga dapat dianalisa secara polarimetri hal ini disebabkan karena molekul penyusun karbohidrat mempunyai susunan yang asimetri sehingga mempunyai kemampuan untuk memutar bidang sinar terpolarisasi.

Amilosa merupakan polisakarida yang linier sedangkan amilopektin adalah yang bercabang.95.larutan dan panjang cairan dalam tabung. Faktor ini diperoleh dari perbandingan BM sukrosa dengan BM dua molekul gula reduksi Faktor konversi = BM sukrosa 2 BM gula reduksi = 342 2 x 180 = 0.95 Penentuan Pati Pati disusun oleh amilosa dan amilopektin. iodometri atau cara enzimatis atau spektrofotometri. Hidrolisa sukrosa akan dihasilkan 2 mol gula reduksi yang berupa fruktosa dan glukosa yang dapat dituliskan sebagai berikut : C6H22O11 + H2O Sukrosa BM = 342 C6H12O6 Fruktosa BM = 180 + C6H12O6 Glukosa BM = 180 Setelah diketahui jumlah gula reduksi yang dihasilkan dari hidrolisa sukrosa maka dapat dihitung jumlah sukrosa yaitu dengan mangalikan dengan suatu faktor sebesar 0. Penentuannya dapat secara Luff Schoorl. Selain itu dapat dianalisa dengan cara kimia yaitu dengan menentukan gula reduksi yang dihasilkan setelah sukrosa dihidrolisa denagan asam atau dengan enzim. dan dapat dirumuskan sebagai berikut : [α] t D α C I : putaran/rotasi spesifik : suhu pengukuran (C) : sinar natrium (589 nm) : sudut putar yang diamati : konsentrasi ( g sampel dalam 100 ml pelarut ) : panjang tabung (dm) Penentuan Sukrosa Penentuan sukrosa dapat langsung ditentukan jumlahnya dengan cara Polarimeter atau dengan refraktometer seperti yang telah diuraikan pada pasal di depan. MunsonWalker. Tiap jenis pati tertentu disusun oleh kedua fraksi tersebut dalam perbandinga yang .

Pati jenis jenis yang rekat (addesif) amilosa pada pati berkisar 20-30%. kedua dengan asam perklorat. (C6H10O5)m + m H2O pati BM = 162 m m C6H12O6 m glukosa BM = 180 m Setelah diketahui jumlah gula reduksi hasil hidrolisa pati tersebut maka dapat dihitung jumlah pati yaitu dengan mengalikan dengan suatu faktor konversi sebesar 0. Amilosa memberikan warna biru dengan larutan iodine dan amilopektin memberikan warna merah violet. ekstraksinya dijalankan dengan dua tahap yaitu pertama dengan alkohol etanol (etanol 80%). Amilopektin larut dalam n-butanol sedangkan amilosa tidak larut. Pati pada beras dan sorgum (cantel) sebagian terbesar penyusunnya adalah amilopektin. BM gula reduksi . Pada bahan yang mengandung lemak dan protein yang tinggi pati dapat direaksikan lebih dahulu dengan alkali sehingga membentuk senyawa alkohol kompleks yang bersifat tidak larut dan secara langsung dipisahkan dan ditimbang.90. Pati yang terdapat dalam dispersi tersebut dapat ditentukan dengan jalan pengendapan dan dilakukan penimbangan. Untuk bahan yang berasal dari tanaman yang banyak mengandung berbagai macam polisakarida lain. Faktor konversi ini diperoleh dari perbandingan berat molekul pati dengan jumlah berat molekul gula reduksi yang dihasilkan. pati m .berbeda-beda. penentuan pati dapat ditentukan dengan cara mulamula pati diekstraksi dan didispersikan menjadi suatu larutan koloidal hingga terpisah dari zat lainnya.90 Selain cara di atas. Faktor konversi = = BM m x 162 m x 180 = 0. Untuk penentuan kadar pati dalam suatu bahan dapat dikerjakan dengan menghidrolisa pati dengan asam atau ensim sehingga diperoleh gula reduksi. Pati bersifat tidak larut dalam air sehingga mudah dipisahkan dari zat lainnya. Pemisahan antara fraksi amilosa dan amilopektin dapat menggunakan elektrodialisa atau dengan n-butanol atau thymol.

Penyaringan harus segera dilakukan setelah digestion selesai karena penundaan penyaringan dapat mengakibatkan lebih rendahnya hasil analisa karena terjadi perusakan serat lebih lanjut oleh bahan kimia yang dipakai. . Digestion. Dalam analisa penentuan serat kasar diperhitungkan banyaknya zat-zat yang tak larut dalam asam encer ataupun basa encer dengan kondisi tertentu. Serat kasar sangat penting dalam penilaian kualitas bahan makanan karena angka ini merupakan indeks dan menentukan nilai gizi bahan makanan tersebut. Penentuan serat kasar Serat kasar adalah senyawaan yang tidak dapat dicerna dalam organ pencernaan manusia maupun binatang. Langkah-langkah yang dilakukan dalam analisa adalah: • • Defatting. Kandungan serat kasar dapat digunakan untuk mengevaluasi suatu proses pengolahan sehingga persentase serat kasar dapat dipakai untuk menentukan kemurnian bahan atau efisiensi suatu proses. Penentuan selanjutnya dapat dikerjakan dengan cara kimia atau secara gravimetri. yaitu menghilangkan lemak yang terkandung dalam sampel menggunakan pelarut lemak. Terdiri dari dua tahap yaitu pelarutan dengan asam dan pelarutan dengan basa.Selanjutnya pati terekstrak diendapkan dengan iodin dan akhirnya senyawa kompleks pati-iodin ini didekomposi dengan alkali. Dilakukan dalam keadaan tertutup pada suhu terkontrol (mendidih) dan sedapat mungkin dihilangkan dari pengaruh luar.

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful