Tugas kimia organik 3

ANALISA KUALITATIF DAN KUANTITATIF KARBOHIDRAT

Disusun oleh

Eka Putra

3212081025

JURUSAN KIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS JENDERAL ACHMAD YANI

2010
 ANALISA KUALITATIF KARBOHIDRAT DENGAN BERBAGAI METODE

1. Uji Molisch
Prinsip reaksi ini adalah dehidrasi senyawa karbohidrat oleh asam sulfat pekat. Dehidrasi
heksosa menghasilkan senyawa hidroksi metil furfural, sedangkan dehidrasi pentosa
menghasilkan senyawa fulfural. Uji positif jika timbul cincin merah ungu yang merupakan
kondensasi antara furfural atau hidroksimetil furfural dengan a-naftol dalam pereaksi
molish.
Uji molisch adalah uji kimia kualitatif untuk mengetahui adanya karbohidrat. Uji ini untuk
semua jenis karbohidrat. Mono-, di-, dan polisakarida akan memberikan hasil positif.
Sampel yang diuji dicampur dengan reagent Molisch, yaitu α-naphthol yang terlarut dalam
etanol 95%. Setelah pencampuran atau homogenisasi, H2SO4 pekat perlahan-lahan
dituangkan melalui dinding tabung reaksi agar tidak sampai bercampur dengan larutan atau
hanya membentuk lapisan.
H2SO4 pekat (dapat digantikan asam kuat lainnya) berfungsi untuk menghidrolisis ikatan
pada sakarida untuk menghasilkan furfural. Furfural ini kemudian bereaksi dengan reagent
Molisch, α-naphthol membentuk cincin yang berwarna ungu.
Reaksi yang terjadi adalah :

Pereaksi Molisch : larutkan 10 gr α-naphthol kedalam 100 mL etanol 95%

Prosedur
1. Masukkan 15 tetes larutan uji karbohidrat kedalam tabung rekasi yang masih kering dan
bersih
2. Tambahkan 3 tetes pereaksi Molisch. Campurkan dengan baik.
3. Miringkan tabung rekasi, lalu alirkan dengan hati-hati 1 mL H 2SO4 pekat melalui dinding
tabung supaya tidak bercampur.
4. Perhatikan terbentuknya cincin berwarna ungu pada batas antara kedua lapisan yang
menandakan reaksi positif karbohidrat.
5. Catat hasil dan buatlah kesimpulannya.
6. Lakukan tes terhadap larutan glukosa, galaktosa, laktosa, sukrosa, maltosa, arabinosa,
larutan 1% amilum dan selulosa (kapas) yang disuspensikan dalam air.
 Skema Kerja

Dalam tabung reaksi,

15 tetes larutan uji karbohidrat

+ 3 tetes pereaksi Molisch

+ 1 mL H2SO4 pekat melalui dinding tabung

Amati warna pada bidang batas

2. Uji Benedict
Uji Benedict adalah uji kimia untuk mengetahui kandungan gula (karbohidrat) pereduksi
(yang memiliki gugus aldehid atau keton bebas) . Gula pereduksi meliputi semua jenis
monosakarida dan beberapa disakarida seperti laktosa, glukosa dan maltosa. Uji benedict
berdasarkan reduksi Cu2+ menjadi Cu+ oleh gugus aldehid atau keton bebas dalam suasana
alkalis, biasanya ditambahkan zat pengompleks seperti sitrat atau tatrat untuk mencegah
terjadinya pengendapan CuCO3. Uji positif ditandai dengan terbentuknya endapan merah
bata, kadang disertai dengan larutan yang berwarna hijau, merah, atau orange.
Pada uji Benedict, pereaksi ini akan bereaksi dengan gugus aldehid, kecuali aldehid dalam
gugus aromatik, dan alpha hidroksi keton. Oleh karena itu, meskipun fruktosa bukanlah gula
pereduksi, namun karena memiliki gugus alpha hidroksi keton, maka fruktosa akan berubah
menjadi glukosa dan mannosa dalam suasana basa dan memberikan hasil positif dengan
pereaksi benedict.
Untuk mengetahui adanya monosakarida dan disakarida pereduksi dalam makanan, sample
makanan dilarutkan dalam air, dan ditambahkan sedikit pereaksi benedict. Dipanaskan
dalam waterbath selamaa 4-10 menit. Selama proses ini larutan akan berubah warna
menjadi biru (tanpa adanya glukosa), hijau, kuning, orange, merah dan merah bata atau
coklat (kandungan glukosa tinggi).
Sukrosa (gula pasir) tidak terdeteksi oleh pereaksi Benedict. Sukrosa mengandung dua
monosakrida (fruktosa dan glukosa) yang terikat melalui ikatan glikosidic sedemikian rupa
sehingga tidak mengandung gugus aldehid bebas dan alpha hidroksi keton. Sukrosa juga
tidak bersifat pereduksi.
Pengamatan yang dilakukan dalam uji Benedict ini dapat dilakukan dengan mengamati
perubahan warna dan terjadinya endapan. Warna larutan dapat terlihat bermacam-macam
tergantung dari konsentrasi karbohidrat ayng dipakai, larutan dapat berwarna hijau, hijau
kebiruan dan kuning.
Pada uji Benedict terhadap glukosa dan fruktosa larutan berwarna hijau kebiruan dan
terdapat endapan merah bata di dalamnya yang menandakan pengujian positif, sedangkan
pada maltosa dan laktosa larutan memiliki warna hijau kebiruan tanpa endapan merah bata
hal ini menunjukan bahwa pengujian positif terdapat gula di dalamnya, tetapi pada
pengujian terhadap sukrosa dan pati warna yang terlihat adalah biru menandakan bahwa
hasil uji negatif mengindikasikan bahwa sukrosa dan pati tidak memiliki gula pereduksi yang
dapat mereduksi reagen benedict.
Uji Benedict dapat dilakukan pada urine untuk mengetahui kandungan glukosa. Urine yang
mengandung glukosa dapat menjadi tanda adanya penyakit diabetes. Sekali urine diketahui
mengandung gula pereduksi, test lebih jauh mesti dilakukan untuk memastikan jenis gula
pereduksi apa yang terdapat dalam urine. Hanya glukosa yang mengindikasikan penyakit
diabetes.
Berikut reaksi yang berlangsung:

O O
║ ║
2+ -
R—C—H + Cu 2OH → R—C—OH + Cu2O

Gula Pereduksi Endapan Merah Bata

Pereaksi Benedict : Satu liter pereaksi Benedict dapat dibuat dengan menimbang sebanyak
100 gram natrium karbonat anhydrous (Na 2CO3), 173 gram natrium sitrat, dan 17.3 gram
tembaga (II) sulfat pentahydrate, kemudian dilarutkan dengan akuadest sebanyak 1 liter.

Prosedur
1. Masukkan 3 tetes larutan uji karbohidrat kedalam tabung rekasi yang masih kering dan
bersih
2. Tambahkan 2 mL pereaksi Benedict, kemudian dikocok.
3. Masukan kedalam penangas air selama 5 menit. Amati perubahan warna endapannya.
4. Pembentukan warna endapan hijau, kuning, atau merah menunjukan reaksi positif
karbohidrat.
5. Catat hasil dan buatlah kesimpulannya.
6. Lakukan percobaan ini dengan menggunakan larutan glukosa, galaktosa, maltosa,
fruktosa, laktosa, sukrosa dan larutan amilum.
 Skema Kerja

Dalam tabung reaksi,

3 tetes larutan uji karbohidrat

+ 2 mL pereaksi Benedict, kocok

Masukan dalam penangas air selama 5 menit

Amati perubahan warna endapan

3. Uji Barfoed
Uji ini untuk membedakan monosakarida dan disakarida dengan jalan mengontrol kondisi-
kondisi percobaan, seperti pH dan waktu pemanasan. Pada analisa ini, karbohidrat direduksi
pada suasana asam. Disakarida juga akan memberikan hasil positif bila didihkan cukup lama
hingga terjadi hidrolisis.
Uji Barfoed menggunakan reagen Barfoed yang terdiri dari tembaga asetat dan asam asetat
glacial sebagai pereaksi. Diketahui bahwa disakarida merupakan agen pereduksi yang
lemah, mereka tidak membentuk ion kupri pada reagen Barfoed yang ada dalam keadaan
asam, sedangkan monosakarida merupakan agen pereduksi yang kuat dan mampu
membentuk ion kupri dalam reagen Barfoed dalam keadaan asam karena itu uji Barfoed ini
digunakan untuk membedakan disakarida pereduksi dengan monosakarida pereduksi dalam
suatu sampel.
Pada proses pengujian, larutan dipanaskan, pemanasan terhadap sampel membantu asam
asetat glacial menghidrolisis disakarida menjadi monosakarida yang kemudian akan
mereduksi reagen, karena itu perbedaan waktu yang ada menjadi indikasi perbedaan
terhada monosakarida pereduksi dan disakarida pereduksi.
Monosakarida pereduksi ditandai dengan terjadinya endapan merah bata kupro oksida
(Cu2O) pada saat di panaskan dalam kurun waktu dua sampai tiga menit sedangkan
disakarida pereduksi di tandai dengan pembentukan endapan merah bata kupro oksida
(Cu2O) dalam kurun waktu sepuluh sampai dua belas menit.
Pereaksi Barfoed : Larutkan 48 gram kristal tembaga asetat dalam 900 mL air, kemudian
tambahkan 50 mL asam laktat 8,5%. Selanjutnya tambahkan air sampai volume 1000 mL.
Prosedur
1. Masukkan 1 mL larutan uji karbohidrat kedalam tabung rekasi yang masih kering dan
bersih.
2. Tambahkan 1 mL pereaksi Barfoed, kemudian dikocok.
3. Masukan kedalam penangas air selama 3 menit.
4. Dinginkan dalam air mengalir.
5. Bila tidak terjadi reduksi selama 5 menit, lakukan pemanasan selama 15 menit sampai
terlihat adanya reduksi.
6. Catat hasil dan buatlah kesimpulannya
7. Lakukan percobaan ini dengan larutan glukosa, galaktosa, laktosa, sukrosa dan maltosa.

Skema Kerja

Dalam tabung reaksi,

1 mL larutan uji karbohidrat

+ 1 mL pereaksi Barfoed, kocok

Masukan dalam penangas air selama 3 menit

Dinginkan dalam air mengalir (± 5 menit)

Amati hasil reduksi yang terjadi

Ada endapan Tidak ada

4. Uji Seliwanoff
Uji Seliwanoff bertujuan untuk mengeahui adanya ketosa (karbohidrat yang mengandung
gugus keton). Pada pereaksi seliwanoff, terjadi perubahan oleh HCl panas menjadi asam
levulinat dan 4-hidroksilmetilfurfural.
Jika dipanaskan karbohidrat yang mengandung gugus keton akan menghasikan warna
merah pada larutannya.
Disakarida sukrosa yang mudah dihidrolisa menjadi glukosa dan fruktosa memberi reaksi
positif dengan uji Seliwanoff. Glukosa dan karbohdrat lain dalam jumlah banyak dapat juga
memberi warna yang sama.
Pada pengujian dilakukan pemanasan pada larutan, pemanasan akan membantu proses
hidrolisis disakarida yang akan menghasilkan monosakarida ketosa, dan kemudian memberi
warna. Keberadaan HCl dalam reagen pada saat fruktosa yang berada dalam golongan
ketosa bereaksi dengannya akan menghasilkan warna merah cherry dengan struktur kimia
yang kompleks. Sebaliknya golongan disakarida seperti maltosa dan laktosa tidak bereaksi
(negatif) pada saat mereka dihidrolisis menjadi monosakarida aldosa, dengan kata lain
aldosa tidak bereaksi dalam uji Seliwanoff ini.
Pada dasarnya uji ini memiliki dua tahapan penting yang harus dilewati pada pendidihan,
yaitu proses dehidrasi yang dialami fruktosa oleh reagen Seliwanoff yang menghasilkan
pembentukan hidroksi metil furfural dan kondensasi hidroksi metil furfural dengan
resorcinol sehingga membentuk senyawa kompleks berwarna merah cherry.
Hasil yang didapat pada uji ini dapat diidentifikasi dari warna larutan yang berubah pada
saat bereaksi. Jika sampel berubah menjadi warna merah cherry, itu menunjukan bahwa di
dalam sampel terdapat ketosa, tetapi jika sampel berwarna biru kehijauan atau peach
menunjukan bahwa sampel memiliki aldosa.
Pereaksi Seliwanoff : Larutkan 0,05 gram resorsiol dalam 100 mL larutan HCl encer (satu
bagian HCl pekat dengan dua bagian air).

Prosedur
1. Masukkan beberapa tetes larutan uji karbohidrat kedalam tabung rekasi yang telah diisi
2 mL pereaksi Seliwanoff.
2. Masukan kedalam penangas air selama 1 menit. Perhatikan perubahan warna yang
terjadi.
3. Catat hasil dan buatlah kesimpulannya
4. Lakukan percobaan ini dengan larutan fruktosa, glukosa, dan sukrosa.
5. Terjadinya perubahan warna merah dan endapan menunjukan reaksi positif untuk
ketosa, bila endapan dilarutkan dalam alcohol terjadi larutan berwarna merah.

Skema Kerja
 Dalam tabung reaksi,
Beberapa tetes larutan uji karbohidrat

+ 2 mL pereaksi Seliwanoff, kocok

Masukan dalam penangas air selama 1 menit

Amati perubahan warna yang terjadi

5. Uji Tollens
Uji ini untuk positif terhadap karbohidrat pentosa yang membedakannya dengan heksosa. Aldehida
dapat mereduksi pereaksi Tollens sehingga membebaskan unsur perak (Ag). Pereaksi tollens,
pengoksidasi ringan yang digunakan dalam uji ini, adalah larutan basa dari perak nitrat.
Larutannya jernih dan tidak berwarna. Untuk mencegah pengendapan ion perak sebagi
oksida pada suhu tinggi, maka ditambahkan beberapa tetes larutan amonia. Amonia
membentuk kompleks larut air dengan ion perak.
Pereaksi Tollens mengandung ion diamminperak(I), [Ag(NH 3)2]+. Ion ini dibuat dari larutan
perak (I) nitrat. Caranya dengan memasukkan setetes larutan natrium hidroksida ke dalam
larutan perak (I) nitrat yang menghasilkan sebuah endapan perak (I) oksida, dan selanjutnya
tambahkan larutan amonia encer secukupnya untuk melarutkan ulang endapan tersebut.
Pereaksi Tollens sering disebut sebagai perak amoniakal. Endapan perak pada uji ini akan
menempel pada tabung reaksi yang akn menjadi cermin perak. Oleh karena itu Pereaksi
Tollens sering juga disebut pereaksi cermin perak.

Prosedur
1. Masukkan beberapa tetes larutan uji karbohidrat kedalam tabung rekasi yang telah diisi
2 mL pereaksi Tollens.
2. Masukan kedalam penangas air selama 1 menit. Perhatikan perubahan warna yang
terjadi.
3. Catat hasil dan buatlah kesimpulannya
4. Lakukan percobaan ini dengan larutan arabinosa, glukosa dan gummi arabikum.
Skema Kerja
 Dalam tabung reaksi,
Beberapa tetes larutan uji karbohidrat

+ 2 mL pereaksi Tollens, kocok

Masukan dalam penangas air selama 1 menit

Amati perubahan warna yang terjadi

6. Uji Osazon
Pada uji Osazon, yang mendasarinya adalah pemanasan karbohidrat yang memiliki gugus
aldehida atau keton bersama fenilhidrazin berlebihan akan membentuk hidrazon atau
osazon. Osazon yang terbentuk mempunyai bentuk kristal dan titik lebur yang spesifik.
Osazon dari disakarida larut dalam air mendidih dan terbentuk kembali bila didinginkan,
namun sukrosa tidak membentuk osazon karena gugus aldehida dan keton yang terikat
pada monomernya sudah tidak bebas, sebaliknya osazon monosakarida tidak larut dalam air
mendidih.
Beberapa larutan uji menunjukkan reaksi positif dengan membentuk kristal berwarna
kuning yang disebut dengan osazon yaitu larutan fruktosa dan galaktosa dan larutan lainnya
tidak membentuk kristal osazon. Setelah diamati di bawah mikroskop, bentuk kristal dari
fruktosa adalah pentagonal sedangkan pada galaktosa segi empat runcing.

Prosedur
1. Masukkan 5 mL larutan uji karbohidrat kedalam tabung rekasi.
2. Masukan campuran fenil hidrazon Na-asetat kering.
3. Kocok dan panaskan dalam penangas air selama 30 menit.
4. Dinginkan, kemudian diperiksa endapan yang terbentuk di bawah mikroskop.
5. Catat hasil dan buatlah kesimpulannya.
6. Lakukan percobaan ini dengan larutan arabinosa, sukrosa, glukosa, fruktosa, maltosa,
dan galaktosa.

Skema Kerja
 Dalam tabung reaksi,
5 mL larutan uji karbohidrat

+ Campuran fenil hidrazon Na-asetat kering

Kocok dan Masukan dalam penangas air

selama 30 menit

Periksa endapan yang terbentuk

dengan Mikroskop

7. Hidrolisa Sukrosa
Sukrosa adalah karbohidrat golongan disakarida yang terdiri dari dua unit monosakarida,
yaitu glukosa dan fruktosa. Dengan asam kuat encer sukrosa dapat dihidrolisa menjadi unit-
unit monosakaridanya. Hidrolisis sukrosa ini untuk membuktikan apakah hasil hidrolisis dari
sukrosa adalah glukosa dan fruktosa yaitu dengan cara setelah sukrosa dihidrolisis, larutan
yang telah dihidrolisis itu dites dengan test benedict untuk membuktikan glukosa dan test
seliwanoff untuk membuktikan ada fruktosa.
Hal ini menyebabkan uji Benedict dan uji Seliwanoff yang sebelum hidrolisis memberikan
hasil negatif menjadi positif. Uji Barfoed menjadi positif pula dan menunjukkan bahwa
hidrolisis sukrosa menghasilakn monosakarida.

Prosedur
1. Isi tabung reaksi dengan 5 mL larutan uji sukrosa.
2. Tambahkan 1 mL HCl 10%.
3. Masukan kedalam penangas air selama 15 menit.
4. Dinginkan perlahan-lahan, kemudian netralkan.
5. Tes hidrolisa dengan pereaksi Benedict, Seliwanoff dan Barfoed.
6. Catat hasil dan buatlah kesimpulannya
 Skema Kerja

Dalam tabung reaksi,

5 mL larutan uji sukrosa

+ 1 mL HCl 10%

Masukan dalam penangas air selama 15 menit

Dinginkan

Netralkan

Tes hidrolisa

Pereaksi Benedict Pereaksi Seliwanoff Pereaksi Barfoed

8. Hidrolisa Pati
Pati (starch) atau amilum merupakan polisakarida yang terdapat pada sebagian besar
tanaman, terbagi menjadi dua fraksi yaitu amilosa dan amilopektin. Amilosa (± 20%)
memilki strusktur linier dan dengan iodium memberikan warna biru serta larut dalam air.
Fraksi yang tidak larut disebut amilopektin (± 80%) dengan struktur bercabang. Dengan
penambahan iodium fraksi memberikan warna ungu sampai merah. Pati dalam suasana
asam bila dipanaskan akan terhidrolisis menjadi senyawa-senyawa yang lebih sedrhana.
Hasil hidrolisis dapat dengan iodium dan menghaislkan warna biru sampai tidak berwarna.
Pada percobaan ini akan terlihat bahwa pada hidrolisis pati ini glukosa akan terbentuk
sebagai zat akhir. Penambahan HCl pekat lalu pemanasan dimaksudkan agar hidrolisis
terjadi karena hidrolisis pati hanya terjadi dalam pemanasan dengan asam.
Prosedur
 1. Masukkan 25 mL larutan pati 1% ke dalam sebuah gelas kimia.
2. Tambahkan 10 tetes HCl pekat, dan panaskan dalam penangas air.
3. Setiap 3 menit ambil satu tetes larutan dan tes dengan iodium.
4. Pada waktu yang sama diambil lagi 3 tetes larutan dan ditambahkan pereaksi Benedict
kemudian dipanaskan dalam penangas air, amati derajat reduksi yang terjadi dan
bandingkan dengan tes iodium.

Skema Kerja

25 ml larutan pati 1%

10 tetes HCl pekat

Panaskan dalam Lakukan uji iodium tiap 3 menit

penangas air hingga tidak ada warna

1 tetes larutan +
Pereaksi Benedict

Panaskan dalam Amati derajat reduksi yang terjadi

penangas air

9. Reaksi Pati dengan Iodium

Pati dengan iodium membentuk kompleks yang berwarna biru. Akan tetapi struktur atau
ikatan antara iodium dengan pati belum diketahui dengan pasti. Dextrin dengan iodium
akan menghasilkan warna merah anggur.

Prosedur
1. Kedalam 1 mL larutan pati 1% ditambahkan 2 tetes larutan iodium.
2. Panaskan, kemudian dinginkan kembali.
3. Perhatikan baik-baik perubahan warna yang terjadi.
4. Kemudian tambahkan tetes demi tetes larutan thiosulfat sampai warna hilang.

Skema Kerja

1 ml larutan pati 1%

+ 2 tetes larutan iodium

Panaskan dan dinginkan kembali

Amati perubahan warna yang terjadi

Tambahkan tetes demi tetes larutan thiosulfat

Sampai warna yang terbentuk hilang

 UJI KUANTITATIF KARBOHIDRAT METODE LUFF SCHOORL

Contoh sebanyak 5-10 gram ditimbang dan dimasukkan ke dalam labu takar 250 ml serta
ditambah air aquades hingga tanda tera.
↓
Disaring dan dipipet 50 ml filtratnya, dimasukkan ke dalam labu takar 250 ml. Ditambahkan 10
ml Pb asetat setengah basa kemudian dikocok. Ditambahkan 10 ml Pb asetat setengah basa
kemudian dikocok. Bila timbul endapan putih berarti sudah cukup.
↓
Ditambahkan air hingga tanda tera, dikocok dan dibiarkan sekitar 30 menit dan kemudian
disaring.

Sebelum terjadi Inversi

Filtrat sebanyak 10 ml dipipet ke dalam labu erlenmeyer 500 ml bertutup asah. Ditambahkan 15
ml air , dan 25 ml larutan luff schoorl
↓
Dipanaskan selama 2 menit sampai mendidih dan didihkan terus selama 10 menit dengan nyala
kecil. Diangkat dan didinginkan cepat.
↓
Setelah dingin ditambahkan 10-15 ml KI 30 % dan 25 ml H2SO4 25 % dengan pelan-pelan.
↓
Dititrasi dengan larutan tiosulfat dan larutan kanji 0,5 % sebagai indikator setelah larutan
menjadi berwarna putih kekuningan.

Setelah terjadi inversi

Filtrat sebanyak 50 ml dipipet dan dimasukkan dalam labu takar 100 ml. Ditambahkan 5 ml HCL
25 % kemudian labu dimasukkan ke dalam penangas air dengan suhu 60-70 0C.
↓
Dibiarkan selama 10 menit agar menginversi gula-gula.
↓
Diangkat dan didinginkan, ditambahkan NaOH 30 % hingga merah jambu
↓
Tepatkan hingga tanda tera dan kocok secukupnya.
↓
Dipipetkan 10 ml larutan ini dan tetapkan gula sesudah inversi dengan cara di atas. Dari selisih
kedua penitaran dapat diahitung jumlah glukosa fruktosa atau gula invert dengan
menggunakan daftar.
Sumber:
1. Petunjuk Praktikum Biokimia. : FMIPA UNJANI
2. http://filzahazny.wordpress.com/2009/07/10/karbohidrat/
3. http://wahyuriyadi.blogspot.com/2009/10/uji-kualitatif-karbohidrat.html
4. http://pengujiankadarpengendalian.blogspot.com/2010/11/pengujian-karbohidrat-
dengan-metode.html