IDENTIFIKASI SPESIES MIKROORGANISME SAMPEL

I. TUJUAN Mahasiswa dapat menggunakan teknik pewarnaan, pengkulturan dan uji biokimia yang telah didapat sebelumnya untuk menentukan spesies kultur bakteri yang belum diketahui.

II.

DASAR TEORI Dalam biologi, sistem tatanama binomial merupakan sistem formal penamaan organisme yang dikenalkan oleh Carl Linnaeus, maka sejak saat itu nama ilmiah suatu makhluk hidup terdiri atas dua nama atau kata yaitu kata pertama menunjukan genus (penulisannya diawali dengan huruf kapital) dan kata kedua menunjukan nama spesiesnya, misal Staphylococcus epidermidis, nama Staphylococcus merupakan nama genus sedangkan epidermidis

merupakan nama spesies. Spesies berasal dari bahasa Latin species yang merupakan tingkatan dalam taksonomi yang terkecil (tingkatan terendah dalam tingkat taksonomi), biasanya digunakan untuk mengklasifikasi organisme baik yang hidup maupun organisme yang fosil. ( sumber dari: anonim. Binomial Nomenclatrure. http://www.absolute astronomy.com /topics/Binomial_nom enclature). Metode identifikasi dapat digunakan juga sampai diketahui spesies dari suatu bakteri. Penggunakan kunci dikotomi akan sangat membantu praktikan sehingga tidak perlu melakukan semua uji untuk dapat mengetahui spesies dari sampel bakteri yang tidak diketahui. Dikotomi adalah pembagian organisme sesuai karakteristik yang muncul pada suatu kelompok dan karakteristik tersebut tidak ditemukan pada kelompok yang lain. Dikotomi sebagai bagian proses identifikasi spesies (kunci dikotomi) merupakan sekelompok pertanyaan berkesinambungan (³series of question´) dimana tiap lajur panah merupakan set dari karakteristik organisme yang ujungnya atau

akhir menunjukkan pada spesies tertentu. (sumber dari: anonim. Dichotomy. http://www.absoluteastronomy.com/topics/Dichotomy). Langkah pertama yang perlu dilakukan dalam pengujian ini adalah pewarnaan gram yang berfungsi untuk mengetahui jenis gram (positif yang ditandai dengan warna biru-ungu atau negatif yang ditandai dengan warna merah) dan bentuk dari sel bakteri. Metode pewarnaan gram membutuhkan 4 jenis larutan atau reagen, antara lain: kristal gentian violet (Gram I), iod (Gram II), etanol 96% (GramIII), dan safranin (Gram IV). (sumber dari: anonim. Gram staining. http://www.absoluteastronomy.com/topics/Gram_staining). Prinsip dasar dari metode pewarnaan gram adalah sebagai berikut Hal pertama yang harus dilakukan adalah fiksasi, fiksasi berfungsi untuk membunuh dan melekatkan bakteri pada kaca objek sehingga pewarnaan dapat dilakukan dengan baik. Setelah itu baru dilanjutkan dengan penambahan senyawa-senyawa pewarna. Reagen pertama yang digunakan disebut warna dasar yaitu karbol gentian violet. Pewarna ini akan menempel pada lapisan poeptidoglikan gram positif dan LPS pada gram negative. Reagen kedua untuk memperkuat penempelan warna pada membran sel bakteri yaitu pewarna lugol. Sedangkan raegen ke 3 yaitu etanol absolute digunkan untuk mencuci warna (decolorizing agent). Lunturnya tidaknya warna dasar tergantung pada komposisi dinding sel, bakteri gram negative yang mempunyai LPS warnanya akan luntur karena lemak larut dalam alkohol, dan sedangkan warna pada dinding sel bakteri gram positif tidak luntur karena warna sudah terikat pada dinding sel. Dengan kata lain, pemberian etanol memiliki 2 fungsi yaitu pada gram positif alkohol mengakibatkan peptidoglikan terdehidrasi sehingga ukuran porinya mengecil. Ini mengakibatkan kristal violet tidak dapat keluar dari sitoplasma. Sedangkan pada gram negatif alkohol mencuci dinding sel dan meninggalkan lubang kecil pada peptidoglikan. Ini mengakibakan kristal violet tercuci keluar dan sel menjadi tidak berwarna. Reagen yang terakhir adalah warna pembanding yaitu fuchsin, pewarna tandingan ini akan masuk ke dinding sel bakteri gram negatif. Sehingga didapat perbedaan warna antara gram negative dan gram positif dari warna yang terlihat. Dari hasil yang

didapat, bakteri dapat diamati bentuk , ukuran, dan jenis gram bakteri. Berikut ini adalah skema dari pewarnaan gram.

Gb. pewarnaan gram bakteri gram positif dan negatif Setelah pewarnaan gram selesai kita lakukan, kita lakukan pengamatan di mikroskop untuk melihat bentuk dan jenis bakteri. Bentuk bakteri sendiri ada bermacam-macam antara lain cocci (bulat), bacilli (batang), vibrio (koma), coccobaccil, dan masih banyak lagi. Dari berbagai bentuk tersebut, bentuk palung umum yang dimiliki oleh sebagian besar bakteri adalah bentuk cocci dan bacilli. Setelah kita mengetahui bentuk dan jenis gram bakteri (gram positif atau negatif), kita dapat melakukan berbagai uji biokimia yang jalurnya telah ditentukan berdasarkan kunci dikotomi. Kita ikuti uji apa yang harus dilakukan setelah kita ketahui bentuk dan jenis gramnya, tiap bakteri dengan bentuk dan jenis gram yang berbeda akan melalui jalur uji yang berbeda. Dari hasil uji tersebut kita bisa menentukan lagi uji apa yang harus kita lakukan selanjutnya, hal itu terus kita lakukan hingga akhirnya kita dapat menentukan spesies bakteri sampel kita. Berikut ini adalah kunci dikotomi untuk penentuan spesies bakteri gram positif dan negatif :

.

.

Uji karbohidrat ini dirancang untuk mendeteksi perubahan pH yang terjadi jika fermentasi dari karbohidrat tertentu tersebut berlangsung. Jika dihasilkan gas selama proses fermentasi maka akan timbul gelembung pada tabung Durham (yaitu tabung kecil yang letaknya terbalik). Uji fermentasi karbohidrat Keterangan : y Tabung yang di kiri menunjukkan bahwa asam yang terbentuk lebih sedikit dibandingkan dengan tabung yang paling kanan. y Tabung yang di tengah menunjukkan bahwa tidak terjadi fermentasi karbohirat. Jika bakteri tidak memfermentasikan karbohidrat tersebut warna media akan tetap merah. uji tersebut antara lain : a. Uji fermentasi karbohidrat Bakteri memproduksi asam organik ketika mereka memfermentasi karbohidrat tertentu. dan Phenol red sucrose broth dan Phenol red mannitol broth. Berikut ini adalah gambar hasil uji fermentasi karbohidrat: Gb. Phenol red dextrose broth. tidak terbentuk asam maupun gas (warna media tetap merah dan tidak terbentuk gelembung pada tabung Durham) uji negatif y Tabung yang paling kanan menunjukkan bahwa terjadi fermentasi karbohirat disertai dengan pembentukan asam dan gas (warna media berubah menjadi kuning dan terbentuk gelembung pada tabung Durham) uji positif . Media yang digunakan dalam uji karbihidrat ini adalah Phenol red lactose broth.Sebagian besar uji yang kita lakukan adalah sama dengan yang kita lakukan di penentuan genus bakteri. Asam akan menurunkan pH media dan menyebabkan indikator phenol red berubah warna menjadi kuning.

Uji negatif ditunjukkan dengan tidak terbentuknya lapisan merah muda. Gb. Konversi asam amino triptofan menjadi bentuk produk metabolit yang di lakukan oleh enzim triptophanase. Gb. Pengujian ini bertujuan untuk mengetahui apakah dalam pertumbuhan bakteri dapat membentuk indol dari degradasi asam amino triptophan.b. Indole adalah komponen populer wewangian dan pendahulu untuk banyak obat-obatan. Warna merah ini dapat terbentuk karena indol yang dihasilkan oleh bakteri bereaksi dengan p-dimetilaminobenzaldehid yang terkandung dalam reagen Kovac¶s. Senyawa yang mengandung sebuah cincin indola disebut indoles. Uji Indol Indole adalah sebuah senyawa organik aromatik heterosiklik. Uji indol . Reaksi pembentukan indol Uji positif untuk uji indol ditandai dengan ketika reagen Kovac¶s ditambahkan ke media akan terbentuk lapisan berwarna merah muda pada permukaan media. karena tidak semua bakteri mampu mendegradasi tiptophan membentuk indol. Derivatif yang paling terkenal adalah asam amino triptofan. Media yang digunakan dalam uji ini adalah SIM agar deep tube .

Bila menghasilakn gas H S 2 gas tersebut akan bereaksi dengan FeSO4 dan akan membentuk presipitat berwarna hitam. Namun. Uji produksi H2S d. asetat atau format. Tes ini dilakukan dengan membagi media yang telah ditumbuhi oleh bakteri menjadi 2 bagian. Uji MRVP Media yang digunakan dalam uji ini adalah MRVP Broth. hal ini berarti bakteri menghasilkan Hidrogen Sulfit (H2S). Test ini digunakan untuk menentukan 2 hal. Indicator yang biasa digunakan adalah FeSO4 yang berfungsi untuk memadatkan media dan meningkatkan resiprasi anaerobik. Uji MR digunakan untuk menentukan apakah glukosa dapat diubah menjadi produk asam seperti asam laktat. Uji produksi H2S positif ditandai dengan perubahan warna media menjadi hitam. Gb. media ini mengandung peptone dan sodium tiosulfate sebagai sumber sulfur.c. Uji Produksi H2S Media yang digunakan untuk uji ini adalah SIM agar. y MR test Beberapa bakteri dapat menghasilkan asam sebagai hasil fermentasi glukosa. Yang satu digunakan untuk uji MR sedangkan yang satu digunakan untuk uji VP. pada umumnya asam yang dihasilkan tidak cukup banyak untuk mengubah warna metil merah menjadi merah karena kondisi yang terlalu asam dapat mengganggu kelangsungan hidup . Sedangkan uji VP digunakan untuk menentukan apakah glukosa dapat diubah menjadi asetil metil karbinol.

Uji VP . Uji MR dilakukan dengan menambahkan metil merah ke dalam tabung yang akan digunakan untuk uji MR.Sedangkan uji tersebut dikatakan negatif bila terbentuk warna kuning yang berarti glukosa diubah menjadi produk akhir yang bersifat netral. Gb. Setelah beberapa saat akan terjadi perubahan warna media menjadi mereah jika asetil metil karbinol dihasilkan oleh bakteri tersebut (uji positif). Uji MR y VP test Pertama tama larutan alfa naftol (Reagen Barrit A) dan KOH 40% (reagen Barrit B) ditambahkan ke dalam medium VP. Jika asetil metil karbinol tidak dihasilkan maka media akan berwarna kuning.mikroorganisme. Gb. Uji positif ditunjukkan dengan berubahnya warna media menjadi merah.

fccj. maka bakteri akan tumbuh dan media akan berubah warnanya menjadi biru sebagai dampak dari meningkatnya pH dari media.htm?index=0) f. Senyawa yang dapat digunakan adalah senyawa sulfat dan nitrat. Dalam metabolisme dikatakan bahwa metabolisme tersebut anaerobik jika tidak molekul oksigen yang tersedia sebagai akseptor elektron terakhir ( H+ ditangkap O2 jadi H2 O). Gb. Jika senyawa nitrat digunakan. pada media ini sitrat merupakan satu-satunya sumber karbon yang tersedia bagi bakteri. maka senyawa nitrat akan diubah menj di nitrit. mampu menggunakan senyawa anorganik lain sebagai akseptor elektron. Uji Penggunaan Sitrat Uji ini dilakukan untuk mengetes apakah bakteri tersebut dapat mengkonversi sitrat (salah satu senyawa antara dalam siklus Kreb¶s) menjadi oksaloasetat (senyawa antara lain dalam siklus Kreb¶s).edu/%7Elnorman/index. reaksi ini tidak hanya saja berhenti sampai nitrit namun dapat berlanjut . Jika bakteri dapat menggunakan sitrat. Uji sitrat (http://web. Pada beberapa organisme. Enzim yang a berperan dalam proses ini adalah nitrat reduktase. Media yang digunakan adalah Sommon¶s Citrate agar.e. Jika bakteri terssebut tidak dapat menggunakan sitrat maka bakteri tersebut tidak akan tumbuh. Pada beberapa bakteri dalam kondisi anaerob tersebut. Uji Reduksi Nitrat Semua makhluk hidup memerlukan berbagai materi organik dan anorganik. Nitrogen merupakan komponen penyusun protein dan asam nukleat yang ada di dalam jaringan hidup.

i it it l ¡   j i   i t l l it R i i i t: ¢ Reduksi it t leh nit t redukt se ¥ ¥¤ ¡ ¦ ¥¤ £ t ¢ ¢ R i it it l i l j t j i i t l l it 1 1 D l i i t it t j i i il t l l t B ji i ji i i t l i li i i i t it i j l i tt iti ji l t it i i i i t l l l t l i t il t R ji l t t i t l i i i t ti t i l t i il ti t ti l i it t i t it t i ti ji it t t l t i i t l it it i t t i i t ti Z l l t l l i it t ti t it i t t l t t j i t i i l i l t j i l l j t li i j i l i l j t it l § §   ¡   §   ¢ i l i i ti t l it t 1 t i i l i i .

facultati e anaerob.absoluteastronomy. dan mikroaerophile menggunakan jalur respirasi aerobik selama proses degradasi karbohidrat berlangsung. berarti nitrat pada media telah direduksi oleh bakteri. dimana ia berfungsi untuk mendekomposisi hidrogen peroksida. Gb. 2H2O2 2H2O + O 2 (g) (dikutip dari http://www. Uji reduksi nitrat g. Sebaliknya jika tidak terbentuk warna merah. Satu molekul katalase dapat mengubah jutaan molekul hidrogen pe roksida menjadi air dan oksigen perdetik´. jika terakumulasi dalam jumlah besar dapat mengakibatkan kematian organisme itu sendiri.com/topics/ . mikroorganisme dapat memproduksi hidrogen peroksida sebagai produk samping. Uji Katalase ¨ ³Katalase adalah enzi umum yang ditemukan hampir pada semua mahkluk hidup yang terexpos oleh oksigen. Selama respirasi aerobik. Hidrogen Peroksida ini diproduksi ketika bakteri aerob. Jadi apabila setelah penambahan Zn warna larutan berubah menjadi merah berarti nitrat di media memang tidak direduksi oleh bakteri da dapat n dipastikan hasil uji bernilai negatif. Catalase).berfungsi untuk mereduksi nitrat menjadi nitrit dan membentuk warna merah. Hidrogen Peroksida adalah senyawa superoksida yang bersifat toksik. Oleh karena itu mikroorganisme memerlukan enzim katalase yang akan memecah H2O2 menjadi H2O dan O2.

co. maka diindikasikan oleh munculnya gelembung dari gas oksigen yang µterbebas¶ sehingga uji ini dikatakan positif. Setelah inkubasi (24 ± 48 jam pada 370C) dan koloni bakteri telah tumbuh pada media. sedan gkan jika tidak terbentuk gelembung berarti uji menunjukan hasil negatif. Jika ada enzim katalase. Uji Urease ³Enzim urease yang dihasikan bakteri untuk menguraikan urea menjadi amonia dan karbonat.Untuk menguji adanya enzim katalase oleh suatu bakteri. Amonia bergabung dengan air membentuk amonium sehingga pH air makin tinggi´ ( dikutip dari http://www. tabung yang di tengah menunjukkan uji negatif. Hasil negatif ditandai dengan tidak terbentuknya warna pink tua pada larutan.id/index. Urease adalah enzim hidrolitik yang menyerang ikatan nitrogen dan karbon pada komponen amida misalnya urea dan membentuk alkaline yang produk akhirnya adalah ammonia. Adanya amonia dalam media akan menyebabkan warna indikator berubah menjadi pink tua yang menandakan bah bakteri uji wa memiliki enzim urease sehingga dapat dikatakan reaksi ini menunjukan hasil uji positif. sedangkan tabung yang di kanan adalah media yang tidak diinokulasi. maka dapat ditambahkan hidrogen peroksida pada media. Uji Aktivitas urease . maka bakteri tersebut dapat ditumbuhkan pada media trypticase soy agar. h.indofarma. Keterangan: © abung yang paling kiri menunjukkan uji positif. Gb. Uji aktivitas urease dilakukan dengan pertama-tama menumbuhkan bakteri uji pada media urea broth yang mengandung indikator pH yaitu phenol red.php?option=com_content&task=view&id =20& Itemid=125).

Pembentukan gas ini dapat menyebabkan muncul retakan pada curd yang terbentuk. litmus dan kasein terkandung dalam medium yang dapat dimetabolisme oleh tipe bakteri yang berbeda. Penambahan litmus lebih mengarah pada perubahan pH berlaku sebagai oksidasi dan reduksi indikator. Pereduksian litmus ini akan mengubah warna media dari ungu menjadi putih susu Aktivitas biokimia bakteri dapat menghasilkan dua jenis curd. protein susu (kasein). membentuk gumpalan atau memulai peptonisasi.i. Laktosa.com/topics/ Litmus_milk). misalnya laktosa.absoluteastronomy. membentuk gas. . uji litmus milk dapat digunakan untuk menguji kemampuan bakteri dalam mereduksi litmus. lacto-albumin. Tes sendiri menunjukan ketika bakteri dapat menfermentasikan laktosa. Fermentasi biasanya diikuti juga dengan pembentukan gas. Gas yang terbentuk umumnya adalah gas hidrogen dan gas karbondioksida. Bakteri-bakteri yang mampu menggunakan laktosa sebagai sumber karbon. mereduksi litmus. Perubahan warna litmus ini akan terjadi di sekitar pH 4. Dan untuk mendeteksi perubahan digunakan indikator litmus. Uji Litmus Milk Media yang dipakai dalam uji ini adalah litmus milk yaitu media yang terdiri dari 2 komponen utama yaitu susu dan litmus. bertujuan untuk melihat kemampuan bakteri dalam menggunakan komponen-komponen yang terdapat pada susu. Litmus ini tereduksi akibat adanya peranan litmus sebagai akseptor elektron dalam proses metabolisme bakteri tersebut. berarti mempunyai enzim galaktosidase yang dapat memecah molekul laktosa menjadi glukosa. dan lactoglobulin. Oleh karena adanya asam maka akan mengakibatkan perubahan warna litmus dari ungu menjadi merah muda. Selain mendekteksi peristiwa diatas. ³Litmus milk adalah medium berbasis susu untuk membedakan spesies antar bakteri. yaitu acid curd dan rennet curd bergantung pada mekanisme pembentukannya.´(dikutip Jadi dari uji ini http://www. Proses berikutnya adalah fermentasi karbohirat yang akan menghasilkan asam sebagai produk akhirnya.

Apabila tabung digoyangkan. Degradasi dari kasein menjadi rantai polipeptida yang lebih pendek ini diikuti dengan pelepasan produk akhir yang bersifat basa yang mengakibatkan perubahan warna litmus dari ungu menjadi biru tua. uji litmus milk juga dapat digunakan untuk menguji kemampuan bakteri dalam mendegradasi kasein. suatu enzim yang bekerja pada kasein dan membentuk paracasein yang dengan keberadaan ion kalsium akan diubah menjadi calcium paracaseinate dan membentuk gumpalan lembut dan bersifat semisolid. Sedangkan rennet curd. diproduksi oleh beberapa organisme yang mampu memproduksi renin. Beberapa bakteri dapat menghasilkan enzim proteolisis yang dapat memecah protein menjadi asam amino dan hal itu dapat dilihat dari media yang menjadi jernih kecoklatan. maka gumpalan akan ikut bergerak. Uji litmus milk . Gb. Naiknya nilai pH ini akan menimbulkan pita berwarna ungu tua pada bagian atas media. Bagian lain dari susu yang dapat digunakan adalah protein susu. Proses pemecahan ini akan mengakibatkan pelepasan amonia yang akan meningkatkan kebasaan dari media.Acid curd terbentuk karena adanya asam organik pada media dan dapat menyebabkan presipitasi berupa calcium caseinate dari kasein susu membentuk gumpalan yang tidak dapat larut. Gumpalan yang terbentuk keras dan tidak dapat berpindah dari dinding tabung walaupun tabung dimiringkan. Kegunaan lainnya.

2. Alfa hemolisis umumnya terjadi karena peroksida yang dihasilkan oleh bakteri.Selain berbagai uji di atas. ada beberapa uji lain yang tidak kita lakukan dalam penentuan genus bakteri. Hemolysis (Microbiology). Peristiwa ini juga dapat dikatakan hemolisis parsial atau hemolisis tidak sempurna. (sumber dari: anonim.absoluteastronomy. Ada Hemolisis jenis ini dapat diketahui dengan munculnya warna gelap dan kehijauan pada media disekeliling atau di bagian bawah koloni bakteri. hal ini ditandai dengan tidak berubahnya media disekeliling atau bagian bawah koloni bakteri Darah yang digunakan untuk agar ini adalah tanpa molekul fibrin sehingga dapat dipastikan pembekuan darah tidak terjadi di media. Uji hemolitik Hemolisis adalah pemecahan sel darah merah oleh suatu subtansi yang disebut hemolisin. Kemampuan koloni bakteri dalam memecahkan sel darah merah ketika bakteri tumbuh dapat digunakan beberapa dalam tipe mengklasifikasikan hemolisis antara lain. organisme jenis ini tidak dapat melakukan pemecahan sel darah merah atau hemolisis.com /topics/Hemolysis_(microbiology) ) . karena jika terjadi pembekuan darah dapat mengganggu deteksi visual dari reaksi hemolisis. 3. dimana sel darah merah sepenuhnya terlisiskan. . Uji-uji tersebut antara lain: a. Hemolisis gamma Disebut juga non-hemolisis. Hal itu dapat dilihat dengan munculnya area transparan dan terang pada media disekeliling koloni atau di bagian bawah koloni bakteri. Hemolisis Alfa mikroorganisme tertentu. Hemolisis Beta Kadang-kadang disebut juga hemolisis sempurna atau complete hemolysis. http://www.

Staphylococcus aureus. Uji Bile Esculin Uji ini digunakan untuk mengisolasi dan mengidentifikasi anggota dari genus Enterococcus.com/2007/ 12/principles-of-test-used-byteam.com /topics/Bile_esculin_agar) c.blogspot.absoluteastronomy. Bakteri yang dikatakan dapat menghidrolisis esculin adalah ketika muncul warna hitam akibat interaksi ferric citrate dengan esculetin yang merupakan hasil hidrolisis esculin setelah bakteri diinkubasi selama 24-48 jam pada 37ÛC. Bile Esculin Agar http://www.(sumber gambar dari: http://randstarteam. Ada tidaknya pigment dapat digunakan dalam mengidentifikasi suatu bakteri. Uji Pigmen Pigment bakteri dapat digolongkan menjadi dua yaitu pigmen bakteri yang dapat larut dalam air dan yang larut di dalam minyak. aureus mampu memproduksi staphyloxanthin (sebuah karotenoid) sebagai antioksidan yang membantu mikroba tetap hidup walau ada substansi penyebab oksidasi seperti hidrogen peroksida. . Namun warna dari pigment tidak dapat dijadikan acuan karena terkadang warna dari suatu koloni bakteri tergantung dari kondisi dan lingkungan hidupnya.html) Gb. (sumber dari: anonim.absoluteastronomy. Uji hemolisis b. http://www.com/ topics/Staphylococcus_aureus). (sumber dari: anonim. Beberapa strain dari S.

d. Principles of Test used by the team: Laboratory test Principles. contohnya SDS (Sodium Dodecyl Sulphate). 2007.html) . Spesies Enterococcus akan dapat bertahan pada konsentrasi garam yang lebih tinggi dibandingkan dengan gram positive cocci yang lain. Uji 6. Principles of Test used by the team: Laboratory test Principles. (sumber dari: anonim.com/2007/ 2/principles-of-test-used-byteam. 2007.5% NaCl dengan yang tidak teradaptasi pada konsentrasi garam ini.html) e. dinding sel bakteri Pneumococcus akan mengalami lisis sedangkan kelompok alfa hemolisis yang lain tidak mengalami lisis sehingga kelompok ini disebut bile insoluble (pada media akan terlihat keruh).blogspot. Uji Bile Solubility Uji digunakan untuk membedakan golongan bakteri alfa hemolisis. ketika ditumbuhkan pada media ini. Media yang digunakan mengandung bile atau bile salt. http://randstarteam. Pada kultur bile soluble media akan terlihat jernih.com/2007/ 2/principles-of-test-used-byteam.blogspot. http://randstarteam. (sumber dari: anonim.5% Sodium Chloride Broth NaCl dipakai untuk membedakan antara gram positive cocci yang akan dapat bertumbuh dalam 6.

Nitrate Broth .Tabung .Cawan petri .Phenol Red Lactose Broth .Medium SIM Agar .Crystal violet (Gram I) . B. Bahan : .Simmon¶s Citrate Agar .Phenol Red Sucrose Broth .Safranin (Gram IV) .Barrit A dan Barrit B .Phenol Red Dextrose Broth .Lampu spiritus 2.Gram¶s iodine (Gram II) .Hotplate stirrer . C) . Alat : .Objek glass .Beker glass .MRVP Broth .Etanol 95% (Gram III) .Pipet .Medium Litmus Milk .Sampel bakteri (Sampel A.H2 O2 3% .Reagen kovac¶s .Erlemeyer .Jarum ose . ALAT DAN BAHAN 1.Urea Broth .III.Starch Agar .Medium TSA .

membiarkan selama 3 menit. y Bakteri Gram positif dan bentuk morfologinya Bacilli Beberapa bakteri yang mungkin terdapat dalam sampel adalah Corynebacterium spp. Membilas preparat secara hati-hati dnegan air f. Dari hasil pewarnaan gram. ada beberapa kemungkinan has yang kita il dapatkan antara lain : y Bakteri Gram positif dan bentuk morfologinya cocci Beberapa bakteri yang mungkin terdapat dalam sampel adalah Micrococcus spp. 2. lankah -langkahnya adalah sebagai berikut : a. c. Staphylococcus spp dan Streptococcus spp. dan Lactobacillus spp. b. maka dilakukan uji biokimia yaitu uji katalase. y Bakteri Gram negatif dan bentuk morfologinya cocci . maka dilakukan pewarnaan spora.Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita. Menetesi preparat dengan larutan lugol (Gram II) beberapa tetes. CARA KERJA 1. Kemudian mengeringkan di udara atau dengan cara menyerap kelebihan air dengan tissue. d. Menetesi preparat dengan larutan fuchsin (Gram IV) beberapa tetes. Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita. e. Mendiamkan selama 3 menit. Menetesi preparat olesan bakteri yang telah difiksasi dengan beberapa tetes larutan karbolgentian violet (Gram I). Membilas dengan air. h. g. Melakukan pewarnaan gram untuk menentukan jalur uji yang harus dilakukan agar kita dapat mengetahui spesies sampel.lahan dengan Gram III hingga tidak ada pewarna yang terlunturkan. Membilas dengan air. Membilas preparat dengan air. Membiarkan selama 1 menit.IV. Mengamati preparat di mikroskop dan mencatat hasilnya. Mencuci dengan larutan Gram III (alkohol 96%) dengan cara memiringkan preparat kemudian menetesi perlahan.

maka dilakukan uji mannitol. maka dilakukan uji biokimia yaitu uji glukosa. 2. Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita. Bila uji Mannitol menunjukkan negatif.. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah Streptococcus spp. 3. Moraxella spp. Bila uji katalase menunjukkan negatif.luteus. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah S.Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita. Bila uji Mannitol menunjukkan positif maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah Staphylococcus aureus. dan Neisseria spp.Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita. Enterobacter spp. M.. maka jalur uji yang harus dilakukan : 1.Beberapa bakteri yang mungkin terdapat dalam sampel adalah Branhamella spp.epidermis.. 1b. Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita. Uji Bile Esculin .. Bakteri Gram positif dan bentuk morfologinya cocci. S. Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita. M. Uji Katalase 1a. Klebsiella spp. 2b.. Escherichia spp.varians. dan Pseudomonas spp. dan Staphylococcus spp. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah Micrococcus spp. Saprophyticus. Bila uji katalase menunjukkan positif. maka dilakukan uji biokimia yaitu uji laktosa. Proteus spp. maka dilakukan Uji Pigment. Uji Mannittol 2a. A. maka dilakukan uji bile esculin. y Bakteri Gram negatif dan bentuk morfologinya Bacilli Beberapa bakteri yang mungkin terdapat dalam sampel adalah Citrobacter spp.

mitis. maka dilakukan Uji Hemolysis. Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita.5% NaCl Broth 5a. 6.5% NaCl Broth menunjukkan negatif maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah S. 4b. Saprophyticus dan S.mitis dan S. maka dilakukan uji pada 6.pneumoniae. maka dilakukan Uji Fermentasi Glukosa. maka dilakukan Uji Fermentasi Fruktosa. maka dilakukan Uji Bile Solubility. Bila uji Hemolysis menunjukkan positif. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah S.3a. Bila uji Pigment menunjukkan positif maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah M. Bila uji Bile Esculin menunjukkan positif maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah E. Bila uji pada 6.bovis.5% NaCl Broth. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah alpha hemolysis yaitu S. 5b. Faecalis dan S. Bila uji Pigment menunjukkan negatif.5% NaCl Broth menunjukkan positif maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah E. 6b.pneumoniae dan S.epidermis. Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita.pyogenes. Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah S. Uji pada 6. . Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita. S. Uji Pigment 4a. 5.luteus dan M. 3b. Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah S. Bila uji Bile Esculin menunjukkan negatif. Bila uji pada 6. varians. Faecalis.bovis.pyogenes. Uji Hemolysis 6a. 4. Bila uji Hemolysis menunjukkan negatif.

Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita. Uji Bile Solubility 9a. 9b. Bila uji Fermentasi Glukosa menunjukkan positif maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah M.subtilis. varians. Bila uji Fermentasi Glukosa menunjukkan positif maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah S. 7b. maka dilakukan uji mannitol. maka dilakukan uji katalase. 2. Bila uji Fermentasi bakteri Glukosa yang ada menunjukkan dalam negatif maka S. Uji mannitol 2a. Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah Corynebacterium spp. Uji Fermentasi Glukosa 7a. Megaterium dan B. sampel adalah 9.7. mitis. dan Lactobacillus spp. Uji Fermentasi Fruktosa 8a. kemungkinan saprophyticus. 1b. maka jalur uji yang harus dilakukan : 1. 8. Uji pewarnaan spora 1a. Bila tidak ditemukan adanya spora. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah B. 8b. B. luteus. Bila terdapat spora dalam sampel. epidermis. Bakteri Gram positif dan bentuk morfologinya Bacilli. Bila uji mannitol menunjukkan positif. Bila uji Fermentasi Glukosa menunjukkan negatif maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah M. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah Bacillus spp. Bila uji Bile Solubility menunjukkan positif maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah S. Untuk .pneumoniae. Bila uji Bile Solubility menunjukkan negatif maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah S.

maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah C. Bila uji katalase menunjukkan positif. Bila uji mannitol menunjukkan negatif. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah L. Megaterium. casei dan L. Bila uji Fermentasi Glukosa menunjukkan positif (terbentuk asam dan gas). 4. Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita.mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita. Bila uji katalase menunjukkan positif. maka dilakukan Uji Reduksi Nitrat. Bila uji mannitol menunjukkan positif. xerosis. Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita. Bila uji mannitol menunjukkan positif. 3b. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah B. delbrueckii Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita. 5. Kutscheri. maka dilakukan Uji Voges-Proskauer. maka dilakukan Uji Fermentasi Glukosa. 5b. cereus.fermentum. Bila uji katalase menunjukkan positif. Bila uji Fermentasi Glukosa menunjukkan negatif (hanya terbentuk asam). Bila uji katalase menunjukkan negatif. Uji Fermentasi Glukosa 6a. 6. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah Corynebacterium spp. Uji katalase 3a. Uji Reduksi Nitrat 5a. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah B. 3. 6b. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah B. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah Lactobaciillus spp.subtilis. Uji Voges-Proskauer 4a. . 4b. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah C. maka dilakukan Uji Fermentasi Mannitol. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah L. 2b.

Bila uji Fermentasi Mannitol menunjukkan negatif. Bila uji Reduksi Nitrat menunjukkan positif. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah B.sicca . 2b. Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita. Maka jalur uji yang harus dilakukan : 1. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah N. 7a. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah L. Uji Fermentasi Glukosa 1a. Bila uji Reduksi Nitrat menunjukkan negatif. Bakteri Gram negatif dan bentuk morfologinya cocci. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah L. 1b. casei 7b. Bila uji Fermentasi Mannitol menunjukkan positif. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah Branhamella spp dan Moraxella spp.7. Bila uji Reduksi Nitrat menunjukkan positif. 2.catarrhalis 2b. C. maka dilakukan Uji Reduksi Nitrat .Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita. bovis . mucosa . maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah N. delbrueckii. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah Neisseria spp. Bila uji Fermentasi Glukosa menunjukkan positif. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah M. Uji Fermentasi Mannitol. maka dilakukan Uji Reduksi Nitrat. Uji Reduksi Nitrat Untuk uji glukosa positif 2a. Untuk uji glukosa negatif 2a. Bila uji Reduksi Nitrat menunjukkan negatif. Bila uji Fermentasi Glukosa menunjukkan negatif.

Uji Fermentasi Laktosa 1a. 2b. Bila uji Fermentasi Laktosa menunjukkan positif.. Bakteri Gram negatif dan bentuk morfologinya Bacilli.Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita. freundii. maka dilakukan Uji Reduksi Nitrate. Enterobacter spp. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah C. maka dilakukan Uji Fermentasi Glukosa 2. Uji Fermentasi Glukosa 3a. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah C. maka jalur uji yang harus dilakukan : 1. dan Klebsiella spp..D. dan Klebsiella spp. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah Proteus spp. 1b.Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita. Escherichia spp.Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah Citrobacter spp. Bila uji produksi indol menunjukkan positif. Enterobacter spp. Bila uji Fermentasi Laktosa menunjukkan negatif. Bila uji Fermentasi Glukosa menunjukkan negatif. maka dilakukan Uji Metyl Red . Bila uji Fermentasi Glukosa menunjukkan positif. maka dilakukan Uji Produksi Indole. maka dilakukan Uji Penggunaan Citrate . maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah Pseudomonas spp. 3b. coli. Uji Produksi Indole 2a.Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita. maka dilakukan Uji Produksi Indole . dan Pseudomonas spp.Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita. Bila uji produksi indol menunjukkan negatif. Intermedius dan E. Escherichia spp.. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah Proteus spp. . 3.Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita.

maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah C.. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah E. Uji Reduksi Nitrate 7a. freundii dan K. maka dilakukan Uji aktivitas urease.Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita. maka dilakukan Uji Litmus Milk. maka dilakukan Uji Produksi H2S. Uji Metyl Red 5a. Bila uji Metyl Red menunjukkan negatif. Bila uji Penggunaan Citrate menunjukkan negatif. 7b. maka dilakukan Uji aktivitas urease .Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita. vulgaris dan P. . Bila uji Metyl Red menunjukkan positif. maka dilakukan Uji Produksi H2S. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah P. Bila uji Produksi Indole menunjukkan positif. Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita. ( II ) 7. Uji Penggunaan Citrate 4a. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah E. ( II ) 6b. mirabilis dan P. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah C. inconstans. ( I ) 6.Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita. Pneumoniae. Aerogenes dan K.ozaenae. coli. Bila uji Penggunaan Citrate menunjukkan positif. Uji Produksi Indole 6a. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah P.rettgeri.fluorescens. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah P.mallei. Intermedius 4b. Bila uji Reduksi Nitrate menunjukkan positif.Untuk mengetahui lebih detail tentang spesies sampel kita. Bila uji Reduksi Nitrate menunjukkan negatif. 5.( I ) 5b.aeruginosa dan P. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah P.4. Bila uji Produksi Indole menunjukkan negatif.

8. Pneumoniae. 9. . maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah P. Uji Litmus Milk 12a.fluorescens yang mengalami reaksi alkaline.ozaenae. Aerogenes.aeruginosa yang mengalami peptonization 12b. 11. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah P. 9b. 12.rettgeri. 10b. Uji Produksi H 2S( I ) 8a. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah E. Bila uji aktivitas urease menunjukkan negatif. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah K. 10. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah K. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah P. 11b. Bila uji aktivitas urease menunjukkan negatif. Bila uji Produksi H2S menunjukkan positif. mirabilis. freundii 8b. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah P.Bila uji Litmus Milk menunjukkan positif. Bila uji aktivitas urease menunjukkan positif. Bila uji Produksi H2S menunjukkan negatif.Bila uji Litmus Milk menunjukkan positif. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah C. Bila uji aktivitas urease menunjukkan positif. vulgaris. Bila uji Produksi Indole menunjukkan negatif. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah P. Uji aktivitas urease( I ) 9a. maka kemungkinan bakteri yang ada dalam sampel adalah P. inconstans. Bila uji Produksi Indole menunjukkan positif.. Uji aktivitas urease( II ) 11a. Uji Produksi H 2S( II ) 10a.

V. HASIL PERCOBAAN y Sampel bakteri A9 Pewarnaan gram Pewarnaan spora : bakteri gram positif. . y Sampel bakteri B9 Pewarnaan gram : bakteri gram negatif. bentuk bacilli. : memiliki spora Uji fermentasi manitol : uji + Uji VP : uji + Jadi bakteri sampel A9 adalah Bacillus subtilis. Uji fermentasi laktosa : uji + Uji indol Uji MR Uji Urea : uji ± : uji ± : uji ± Jadi bakteri sampel B9 adalah Enterobacter aerogenes. : uji + : uji + Jadi bakteri sampel C9 adalah Staphylococcus aureus. y Sampel bakteri C9 Pewarnaan gram Uji katalase Uji manitol : bakteri gram positif. bentuk cocci. bentuk bacilli.

Bakteri tersebut berwarna ungu setelah diwarnai dengan pewarnaan gram. Hasil yang kami dapatkan adalah bakteri A9 positif memiliki spora Oleh karena . dari hasil pewarnaan gram dan bentuk morfologinya dapat disimpulkan bahwa bakteri sampel A merupakan 9 bakteri gram positif dengan bentuk bacil sehingga uji berikutnya yang harus dilakukan (sesuai dengan kunci dikotomi) adalah uji pewarnaan spora. y Uji Pewarnaan spora Uji pewarnaan spora ini dilakukan menggunakan pewarna malachite green dan fuchsin. Bakteri gram positif (berwarna ungu) dengan selnya berbentuk bacilli. . untuk uji berikutnya yang harus dilakukan sesuai dengan kunci dikotomi adalah uji fermentasi manitol.VI. Sampel A9 Jal uji yang dilakukan adalah sebagai berikut : y Pewarnaan Gram & Morfologi Uji morfologi pada sampel A9 menunjukkan bahwa bakteri tersebut termasuk ke dalam golongan bakteri gram positif dengan bentuk bacilli. maka akan muncul warna hijau pada preparat bakteri tersebut jika bakteri tidak memiliki spora maka hanya akan terlihat warna merah. Hal ini disebabkan karena dinding sel bakteri tersebut tersusun dari lapisan peptidoglikan yang tebal sehingga ketika dibilas dengan gram III (alkohol 96%) warna ungu dari k ristal violet tidak hilang. Oleh karena itu. Bila bakteri tersebut memiliki spora. itu. PE B .

Uji manitol + Warna media yang tadinya merah tua berubah menjadi oranye y Uji Voges-Proskauer Media yang digunakan dalam uji VP ini adalah MRVP broth. Sehingga uji yang harus dilakukan berikutnya sesuai dengan kunci dikotomi adalah uji Voges-Proskauer. pada kultur setelah penambahan reagen Barritt mengindikasikan . Pada uji ini. bakteri A9 menunjukkan hasil positif yaitu warna medium yang tadinya merah berubah menjadi agak kekuningan.Warna biru ditengah-tengah sel bakteri menunjukkan bbakteri tersebut memiliki spora. y Uji Fermentasi manitol Uji Fermentasi manitol ini dilakukan pada medium Phenol Red Manitol Broth. Hal ini berarti bakteri tersebut dapat memfermentasi manitol dan dari proses fermentasi tersebut dihasilkan asam yang ditandai dengan berubahnya warna indikator phenol red menjadi kuning. Reagen yang digunakan dalam uji ini adalah reagen Barrit A dan Barrit B yang mengandung campuran -naphthol alkoholik dan larutan 40% potassium hydroxide (KOH) Keberadaan warna merah . Uji Voges-Proskauer digunakan untuk menentukan kemampuan beberapa organisme untuk memproduksi produk akhir non asam atau netral seperti asetilmetil -karbinol yang berasal dari metabolisme glukosa.

Hal ini disebabkan karena dinding sel bakteri ini tersusun dari lapisan lipopolisakarida sehingga ketika dicuci dengan gram III (alkohol) lapisan tersebut akan larut sehingga warna ungu dari karbol violet juga luntur. Hasil pengujian sampel kita menunjukkan uji positif. Dengan demikian dari hasil pewarnaan gram dan pengamatan morfologi dapat disimpulkan bahwa bakteri B9 merupakan bakteri gram negatif dengan bentuk bacilli sehingga untuk uji berikutnya yang harus dilakukan adalah uji fermentasi laktosa. Sampel B9 Jalur uji yang dilakukan adalah sebagai berikut : y Pewarnaan Gram & Morfologi Hasil uji morfologi pada sampel B9 menunjukkan bahwa bakteri pada sampel B termasuk ke dalam golongan bakteri gram negatif dengan bentuk bacilli. Bakteri tersebut berwarna ungu setelah diwarnai dengan pewarnaan gram.keberadaan acetylmethylcarbinol dan merupakan hasil positif. Uji VP + erbentuk cincin berwarna merah setelah penambahan reagen Barrit A dan Barrit B. Bakteri gram negatif (berwarna merah) dengan bentuk sel bacilli. 2. dengan demikian dapat kita simpulkan bahwa sampel bakteri A9 adalah Bacillus subtilis. dan bila tidak ada berarti hasilnya negatif. .

tidak terbentuk cincin merah yang menandakan uji positif. untuk melakukan pengujian kita perlu menambahkan reagen Kovac Setelah . untuk uji berikutnya yang harus dilakukan sesuai dengan kunci dikotomi adalah uji indol. e uji berikutnya yang harus dilakukan sesuai dengan kunci dikotomi adalah uji metil red. Oleh karena itu. Ol h karena itu. Uji Laktosa + Warna media yang tadinya merah berubah menjadi merah kekuningan. Hasil yang didapatkan adalah bakteri B9 dapat memfermentasi laktosa.y Uji Fermentasi Laktosa Uji Fermentasi Laktosa ini dilakukan pada medium phenol red lactosa broth. Uji Indol idak terbentuk cincin merah setelah ditetesi reagen Kovac¶s. Hasil yang negatif ini berarti bahwa bakteri B9 tidak memiliki enzim triptophanase yang dapat memecah asam amino triptophan menjadi indol. Hasil uji positif ini ditunjukkan dengan perubahan warna media yang tadinya merah menjadi merah kekuningan. . berarti bakteri B9 tidak memiliki enzim triptophanase. reagen kovac ditambahkan tidak terjadi perubahan pada media. y Uji Produksi Indol Media yang digunakan untuk uji indol adalah SIM agar.

air dan amonia. bakteri B menunjukkan hasil negatif. Namun. etapi karena sebenarnya uji tersebut hasilnya negatif. pada saat melakukan pengujian kami melakukan kesalahan. uji selanjutnya yang harus dilakukan adalah uji aktivitas urease. . bakteri menunjukkan hasil negatif yaitu ditandai dengan tidak berubahnya warna media dari ungu menjadi pink tua. Media yang digunakan untuk uji ini adalah urea broth. Pada uji ini. Seperti terlihat pada gambar. kami terlalu banyak menambahkan indikator metil merah sehingga warna media berubah menjadi kemerah merahan. Oleh karena itu. Karena hasil uji urease ini hasilnya negatif maka kami dapat menyimpulkan bahwa sampel bakteri B9 adalah Enterobacter aerogenes. Pada uji ini. Uji MR Warna media terlihat merah karena kami terlalu banyak menambahkan reagen Kovac. warna merah ini lama kelamaan agak memudar karena sebenarnya bakteri B tidak dapat membentuk asam dalam jumlah besar sehingga tidak mampu mengubah indikator metil merah menjadi merah. Namun. warna merah pada media lama kelamaan akan memudar y Uji akti itas urease Uji aktivitas urease digunakan untuk mengetaui kemampuan bakteri B9 untuk melakukan degradasi urea menggunakan enzim urease.y Uji Metil Red Uji metil merah dilakukan dengan menggunakan medium MRVP Broth. Hal ini berarti bakteri tidak memiliki enzim urease sehingga tidak dapat memcah urea menjadi karbon dioksida.

dari hasil pewarnaan gram dan bentuk morfologinya dapat disimpulkan bahwa bakteri sampel C9 merupakan bakteri gram positif dengan bentuk cocci sehingga uji berikutnya yang harus dilakukan sesuai dengan kunci dikotomi adalah uji aktivitas katalase Bakteri gram positif (warna ungu) dengan sel berbentuk cocci. Bakteri tersebut berwarna ungu setelah diwarnai dengan pewarna gram. Oleh karena itu. Hal ini disebabkan karena dinding sel bakteri tersebut tersusun dari lapisan peptidoglikan yang tebal sehingga ketika dibilas dengan gram III (alkohol 96%) warna ungu dari k ristal violet tidak hilang. Sampel C9 Jalur uji yang dilakukan adalah sebagai berikut : y Pewarnaan Gram & Morfologi Uji morfologi pada sampel C9 menunjukkan bahwa bakteri tersebut termasuk ke dalam golongan bakteri gram positif dengan bentuk cocci. berarti bakteri B9 tidak memiliki enzim urease.Uji Urease Warna media tidak berubah menjadi pink tua. . 3.

untuk uji berikutnya yang harus dilakukan adalah uji fermentasi mannitol. Tiap bakteri memiliki sifat dan kharakteristik yang khas sehingga jalur uji yang dilakukan untuk tiap bakteri berbeda-beda sesuai dengan kunci dikotomi yang dijadikan pedoman. yaitu dapat memfermentasikan manitol. Dengan demikian dapat kita simpulkan bahwa bakteri sampel C9 adalah      St phyl  .y Uji aktivitas katalase Uji aktifitas katalase dilakukan dengan menggunakan medium TSA dan selanjutnya dilakukan penambahan reagen berupa H2 O2 3%. VII. KESIMPULAN Identifikasi spesies bakteri sampel yang diberikan dilakukan dengan melihat bentuk dan jenis gram bakteri lalu dilanjutkan dengan berbagai uji biokimia. Hasil positif tersebut ditunjukkan dengan adanya gelembung ± gelembung gas pada permukaan koloni ketika ditetesi dengan H2 O2 3%. bakteri C9 menunjukkan hasil positif. Pada uji ini. Hasil uji positif ini ditunjukkan oleh warna media yang berubah menjadi merah kekuningan. Dengan demikian dapat kita simpulkan bahwa : Bakteri A9 adalah Bacillus subtilis . y Uji Fermentasi Mannitol Uji Fermentasi Mannitol ini dilakukan pada medium phenol red mannitol broth. Hal ini berarti bakteri sampel B dapat memecah hidrogen peroksida menjadi air dan karbondioksida sesuai reaksi berikut Oleh karena itu. Bakteri sampel C menunjukkan hasil positif pada uji ini yang artinya bakteri sampel C memiliki enzim katalase.

com/topics/ Catalase 6. Dichotomy. Anonim.html 13. Anonim.com/topics/Gram_staining). Principles of Test used by the team: Laboratory test Principles. 2007.absoluteastronomy.id/index.html) .com/ topics/Staphylococcus_aureus 12. anonim.absoluteastronomy.com/2007/12/principles-of-test- used-by-team.Bakteri B9 adalah Enterobacter aerogenes Bakteri C9 adalah Staphylococcus aureus VIII.absoluteastronomy. http://www. http://www. http://www. 4.com/topics/Dichotomy 3.htm?index=0 5. Anonim.html 10. DAFTAR PUSTAKA 1.blogspot. Binomial Nomenclatrure.absoluteastronomy.edu/%7Elnorman/index. http://www.co.com/2007/12/principles-of-test- used-by-team. Staphylococcus aureus. Gram staining.com /topics/Hemolysis_(microbiology) 9.absolute astronomy.blogspot.com /topics/Bile_esculin_agar 11.fccj. 2007. http://www. http://www.absoluteastronomy.com/2007/12/principles-of-test-used-by-team.absoluteastronomy.absoluteastronomy. anonim. http://randstarteam. Hemolysis (Microbiology). Bile Esculin Agar http://www. http://randstarteam.com /topics/Binomial_nom enclature 2. Principles of Test used by the team: Laboratory test Principles. anonim.com/topics/ Litmus_milk 8. http://www. Anonim. http://web. http://www. http://randstarteam.blogspot. Anonim.php?option=com_content task=view i d=20 Itemid=125 7.indofarma.