P. 1
GC/MS

GC/MS

|Views: 4,051|Likes:

More info:

Published by: Bagas Muhamad Kartiko on Mar 09, 2011
Copyright:Attribution Non-commercial

Availability:

Read on Scribd mobile: iPhone, iPad and Android.
download as DOCX, PDF, TXT or read online from Scribd
See more
See less

07/23/2013

pdf

text

original

Pemicu 5: Kromatografi Gas

BAB 1 PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang Kromatografi gas (GC) merupakan salah satu teknik spektroskopi yang menggunakan prinsip pemisahan campuran berdasarkan perbedaan kecepatan migrasi komponen-komponen penyusunnya. Kromatografi gas ditemukan pada tahun 1903 oleh Tswett dan biasa digunakan untuk mengidentifikasi suatu senyawa yang terdapat pada campuran gas. Pengidentifikasian secara lebih lanjut dapat digunakan dalam mengestimasi konsentrasi suatu senyawa dalam fasa gas. Kromatografi gas biasa digunakan untuk mengidentifikasi suatu senyawa yang terdapat pada campuran gas dan juga mempunyai peranan penting dalam mengestimasi konsentrasi suatu senyawa dalam fasa gas. Data-data yang dihasilkan oleh detektor GC adalah kromatogram yang pembacaannya memiliki fungsi tertentu tiap spesifikasinya. Pada pemicu kali ini, metode ini digunakan untuk menganalisis alkohol dan obat-obatan terlarang dalam darah. Ketika minuman beralkohol dikonsumsi, maka minuman tersebut turun melewati esofagus (kerongkongan) melalui lambung dan menuju ke usus halus. Sejumlah kecil alkohol diserap melalui aliran darah dalam membran mukus, dan sebagian besar memasuki aliran darah melalui dinding usus halus. Alkohol larut dalam air dan aliran darah dengan cepat menyalurkan etanol ke seluruh bagian tubuh dimana etanol tersebut diserap ke dalam jaringan tubuh sesuai dengan proporsi kandungan airnya.

1.2 Tujuan Makalah ini bertujuan untuk menginformasikan kromatografi gas, kromatografi gas cair dan spektroskopi massa baik dari segi pengertian, prinsip dasar, instrumentasi, analisa kualitatif dan kuantitatif dalam hubungannya dengan penentuan konsentrasi alkohol dalam darah 1.3 Definisi Masalah Menganalisis alkohol dalam darah untuk menentukan kandungan didalamnya dengan menggunakan analisis kromatografi gas.

1

Kimia Analitik_Kelompok 2

Pemicu 5: Kromatografi Gas

BAB II PEMBAHASAN
2.1 Prinsip Dasar Kromatografi Kromatografi adalah suatu teknik pemisahan molekul berdasarkan perbedaan pola pergerakan antara fase gerak dan fase diam untuk memisahkan komponen (berupa molekul) yang berada pada larutan. Molekul yang terlarut dalam fase gerak, akan melewati kolom yang merupakan fase diam. Molekul yang memiliki ikatan yang kuat dengan kolom akan cenderung bergerak lebih lambat dibanding molekul yang berikatan lemah. Dengan ini, berbagai macam tipe molekul dapat dipisahkan berdasarkan pergerakan pada kolom. Kromatografi dibagi menjadi beberapa jenis, yaitu kromatografi cair (Liquid Chromatography), Reverse phase chromatography, High performance liquid chromatography, Size exclusion chromatography.

2.2 Instrumentasi Kromatografi Gas

Komponen dasar instrumen kromatografi gas di deskripsikan sebagai berikut: • Carrier gas supply (penyedia gas pembawa) Gas pembawa haruslah gas yang inert secara kimia seperti He, N 2, H2, Ar. Gas yang dipilih biasanya menunjukkan tipe detektor yang digunakan. Laju aliran gas ini ditentukan atau diatur oleh regulator tekanan dua sisi pada tabung gas, dengan tekanan sekitar 10-50 psi dan aliran diatur 1-1000 liter gas per menit. Katup pengatur aliran diatur oleh pengatup berbentuk jarum terletak pada bagian bawah penunjuk aliran. • Sample Injection System Penginjeksian sampel adalah hal yang penting dalam kromatografi gas, terutama untuk mencegah resolusi yang buruk serta penyebaran sampel yang tidak sesuai. Alat yang biasa digunakan untuk menginjeksikan sampel adalah mycrosyringe (penyemprot mikro). Sampel gas atau cair diinjeksikan melalui diafragma silikon-karet/sekat (septum) menuju penguap cahaya pada kolom utama (port sampel biasanya sekitar 50oC di atas titik didih komponen sampel yang paling

2

Kimia Analitik_Kelompok 2

Pemicu 5: Kromatografi Gas

menguap). Biasanya ukuran sampel bervariasi dari 0.1 µL hingga 20 µL. Kolum kapiler membutuhkan sampel yang lebih kecil ( ~ 10-3 µL). • Kolom Kolom merupakan “jantung” kromatografi gas, dimana terjadi pemisahan kompone-komponen cuplikan. Pada kromatografi gas terdapat dua jenis kolom yang biasa dipakai, antara lain kolom tertutup dan kolom kapiler. Panjang kolom kromatografi antara 2-50 meter atau bahkan lebih. Biasanya terbuat dari stainless steel, gelas, silica gabungan, atau teflon. Agar cocok pada saat termostating, biasanya dibentuk spiral dengan diameter 10-30 cm. Temperatur kolom yang optimal tergantung pada titik didih dari sampel serta derajat pemisahan yang dibutuhkan. Ada dua tipe kolom yang biasa digunakan dalam kromatografi gas, packed column dan open tubular column. Secara umum yang paling sering dipakai adalah packed column. • Variabel yang mempengaruhi efisiensi Variabel Kecepatan linear fasa mobile Koefisien difusi fasa mobile Koefisien difusi fasa stationary Capacity factor diameter Ketebalan liquid • Detektor Fungsi detektor adalah untuk memonitor gas pembawa yang keluar dari kolom dan merespon perubahan komposisi yang terelusi. Karakteristik dari sebuah detektor yang ideal adalah K’ dp df cm cm DS Cm2s-1 DM Cm2s-1 Simbol u Satuan Cms-1

3

Kimia Analitik_Kelompok 2

Pemicu 5: Kromatografi Gas

• •

Sensitifitas yang cukup (10-8-10-5yang baik Stabilitas serta reproduksibilitas g/s) Respon linier terhadap larutan yang memiliki beberapa tingkat magnitudo Beda temperatur dengan temperatur ruang sedikitnya 400 ºC Respon cepat terhadap waktu dan laju alir Realibilitas yang tinggi serta mudah digunakan Selektif dalam merespon kelas-kelas larutan yang berbeda Tidak merusak sample

• • • • • •

Detektor yang digunakan dibagi menjadi beberapa jenis, diantaranya: •

Detektor Konduktivitas Termal Detektor Flame-Ionization

Recorder Fungsi recorder adalah sebagai alat untuk mencetak hasil percobaan pada

sebuah kertas yang hasilnya disebut kromatogram (kumpulan puncak grafik). Akurasi suatu kromatogram pada suatu daerah pembacaan ditentukan oleh pemilihan pencatat sinyalnya. Respon melewati skala penuh haruslah 1 detik. Kepekaan perekam adalah 10mV dan berjangkauan dari 1-10 mV. Output dari detektor akan dikirim ke perekam. Sebuah kromatogram khas ditunjukkan pada detektor tegangan (y-axis) diplot sebagai fungsi dari waktu (xaxis). Identitas masing-masing puncak dapat ditentukan dengan menyuntikkan sampel murni dari masing-masing komponen campuran dan mencatat waktu retensi mereka. 2.2 Analisa Kualitatif dan Kuantitatif Kromatografi gas biasa digunakan untuk menentukan kemurnian campuran organik. Kontaminasi dinyatakan dengan penampilan additional peak. Teknik ini berguna untuk mengevaluasi efektivitas dari prosedur tingkat kemurnian. Dalam teori, retention time digunakan untuk mengidentifikasi komponenkomponen dalam campuran. Namun dalam kenyataannya, aplikasi dari data-data tersebut terbatas oleh jumlah variabel yang harus dikontrol untuk menghasilkan hasil

4

Kimia Analitik_Kelompok 2

Pemicu 5: Kromatografi Gas

yang bersifat reproduible. Walaupun begitu, gas kromatografi merupakan alat yang menyediakan informasi mengenai ada atau tidaknya senyawa dalam suatu campuran dengan menggunakan standard referensi. Kromatogram dari suatu campuran standard dan dengan sampel tidak boleh menghasilkan peak yang baru dari peak campuran standard. Hubungan antara faktor selektivitas untuk senyawa A dan B adalah

α=K K

B A

=t t

RB RA

=k −t k
M

− tM

` B ` A

Jika campuran standard adalah senyawa B dan α

adalah sebuah indeks untuk

mengidentifikasi senyawa A, merupakan perhitungan faktor selektivitas untuk senyawa murni relatif terhadap campuran standard dan perhitungan ini digunakan untuk menentukan zat terlarut. • Analisis Kuantitatif Kromatografi Gas Sinyal detektor dari gas kromatografi biasa digunakan untuk analisa kuantitaf dan semi kuantitatif. Analisa kuantitatif dari gas kromatografi berdasarkan perbandingan tinggi dari puncak analit dengan standard. Untuk menganalisa gas kromatografi secara kuantitatif terdapat beberapa metode, yaitu: • Analisa berdasarkan Tinggi Puncak

Tinggi dari sebuah peak dari suatu kromatorgram merupkan jarak tegak lurus antara puncak peak terhadap garis hubung peak. Tinggi dari puncak kromatografi didapatkan dengan menghubungkan baselines pada dua bagian puncak dengan garis lurus dan semua variabel terkontrol kondisinya harus disesuaikan dengan temperatur kolom, laju alir eluent, dan laju injeksi sampel.

Analisa berdasarkan Area Puncak

5

Kimia Analitik_Kelompok 2

Pemicu 5: Kromatografi Gas

Luas puncak tidak bergantung pada temperatur kolom, laju alir eluent, dan laju injeksi sampel. Oleh karena itu, analisa berdasarkan luas puncak ini lebih baik digunakan sebagai parameter analisa dibandingkan analisa berdasarkan tinggi puncak. • Analisa dengan Kurva Kalibrasi dengan Standard Metode lain untuk analisa kuantitatif gas kromatografi adalah metode kurva kalibrasi. Dalam metode ini, kromatogram standard dan tinggi puncak di plot sebagai fungsi konsentrasi. Dimana kurva kalibrasi ini memiliki hubungan yaitu sumbu x merupakan konsentrasi sedangkan sumbu y adalah tinggi puncak (peak) sehingga akan terdapat persamaan garis Y = bX + a. dimana slope = b. (seperti bagian jawaban pemicu). • Metode Internal Standard

Metode terbaik untuk analisa kuantitatif gas kromatografi adalah metode internal standard, karena ketidakpastian dari pemasukkan dari injeksi sampel dapat dihindari. Dalam prosedur ini, kuanititas yang ditentukan dalam sebuah standard internal terbagi menjadi dua, yaitu untuk standard dan sampel. Parameter dari metode ini adalah rasio luas (tinggi) puncak analit dengan luas (tinggi) dari puncak standard internal. a. b. sampel darah diambil dari subjek sesegera mungkin oleh petugas yang berwenang alkohol ataupun desinkfektan organik volatil lainnya tidak boleh digunakan untuk membersihkan kulit dimana spesimen darah akan diambil. Larutan benzalkonium klorida ataupun larutan desinfektan lainnya dapat digunakan c. d.
e.

Pengambilan sampel darah menggunakan jarum kering dan steril atau menggunakan wadah yang kedap udara dengan jarum steril. Alkohol ataupun pelarut organik volatil lainnya tidak boleh digunakan untuk membersihkan wadah. Sampel darah harus ditambahkan antikoagulan dan pengawet.

2.4 Aplikasi Kromatografi Gas • Analisis Alkohol dalam Darah

6

Kimia Analitik_Kelompok 2

Pemicu 5: Kromatografi Gas

Sampel darah secara kuantitatif ditambahkan pada larutan yang telah ditambahkan larutan standar. Lalu larutan itu diinjeksikan dan dianalisamenggunakan detektor dalam Gas Chromatograph. Komputer yang terintegrasi akan memberikan data dan hasil. Seseorang dikatakan bebas-alkohol bila dengan menggunakan analisis ini didapat hasil lebih kecil dari 0,01 gram alkohol per 100 ml darah. Dan untuk sampel darah yang diambil post-mortem1 dikatakan negatif (bebas alkohol) bila hasilnya lebih kecil dari 0,02 gram alkohol per 100 ml darah. Teknik analisis ini sangat akurat dan sensitif dan merupakan prosedur standar untuk analisis alkohol dan senyawa-senyawa volatil dalam bidang toksikologi forensik. Teknik ini menghasilkan molekular fingerpint atau spektrum massa yang unik. Spektrum ini dapat digunakan untuk mengidentifikasi ada atau tidaknya alkohol dalam sampel. Dan, alkohol dalam darah dapat diketahui jumlahnya, walaupun dalam kuantitas kecil. Dengan menggunakan analisis darah, sampel yang sama dapat diuji beberapa kali, jika sampel dijaga dengan baik. Analisis GC-MS merupakan prosedur yang spesifik, dan bila alat-alatnya dihangatkan secara teratur, penentuan alkohol dapat dilakukan dalam 6-8 menit.

Tugas I Susunlah beberapa isu penting yang berkaitan dengan analisis alkohol dalam darah, paling sedikit tujuh isu. Jawab 1. Etanol dalam tubuh Di dalam tubuh, etanol atau C2H5OH diencerkan oleh cairan tubuh. Kemudian untuk mengeliminasi etanol dalam tubuh, tubuh melakukan proses metabolisme (oksidasi). 2. Makanan dan jenis kelamin mempengaruhi penyerapan dan metabolisme etanol dalam tubuh.

1 post mortem : sesudah kematian

7

Kimia Analitik_Kelompok 2

Pemicu 5: Kromatografi Gas

Semakin tinggi kandungan lemak pada makanan yang dikonsumsi, semakin banyak waktu yang diperlukan untuk mengosongkan lambung maka semakin lama proses penyerapan alkohol akan terjadi. 3. Wanita memiliki konsentrasi alkohol dalam darah (BAC/Blood Alcohol Concentration) lebih tinggi setelah mengkonsumsi alkohol dalam jumlah yang sama dengan pria Jika di konsumsi dalam dosis rendah, etanol dapat menekan penghambat otak sehingga dapat membuat pikiran lebih jernih, namun pada dosis tinggi etanol memiliki beragam dampak buruk, yaitu jaringan saraf memproduksi gejala klasik keracunan : pembicaraan kacau, langkah tidak stabil, persepsi sensorik terganggu, dan ketidakmampuan untuk bereaksi dengan cepat, dsb. 4. Mengetahui kadar alkohol dalam darah (BAC) Untuk mengetahui kadar alkohol dalam darah dapat dengan menggunakan tabel BAC (Blood Alcohol Concentration). Caranya yaitu dengan menemukan tabel berat badan, lalu melihat jumlah porsi total minuman beralkohol yang telah dikonsumsi. 5. Analisis Alkohol dalam darah Analisis alkohol dalam darah dapat dilakukan dengan menggunakan metoda analisis GC/MS pada darah maupun pada urine, ataupun yang sering digunakan menggunakan analisis napas (breath analysis). 6. Analisis dengan GC/MS Analisis darah menggunakan GC/MS sangat akurat namun biayanya mahal dan memerlukan petugas terlatih untuk pengambilan dan penelitian sampel darah. 7. Parameter bebas alkohol dengan GC/MS pada darah Pada analisis etanol dengan GC/MS pada darah, seseorang dikatakan bebas-alkohol bila dengan menggunakan analisis ini didapat hasil lebih kecil dari 0,01 gram alkohol per 100 ml darah. Dan untuk sampel darah yang diambil post-mortem dikatakan negatif (bebas alkohol) bila hasilnya lebih kecil dari 0,02 gram alkohol per 100 ml darah.
8. Analisis napas (Breath analysis)

Analisis napas mudah untuk dilaksanakan namum kurang akurat dan metode analisis ini tidak spesifik terhadap etanol.

8

Kimia Analitik_Kelompok 2

Pemicu 5: Kromatografi Gas

9. Parameter bebas alkohol untuk analisis napas Untuk metode analisis napas, hasil dikatakan negatif (subjek yang dites tidak memiliki kandungan alkohol/kandungan alkohol sangat rendah) bila hasil tes lebih kecil dari 0,01 gram per 210 liter . 10. Akurasi analisis alkohol dalam darah Analisis alkohol dalam darah yang paling akurat adalah analisis darah menggunakan GC/MS, lebih akurat dari analisis napas, dan yang paling tidak akurat adalah analisis urine.

Tugas II Bila anda hendak menggunakan metode GC/MS dalam analisis darah 1. Parameter apa saja yang harus anda ketahui ? • Rasio partisi Pada saat fasa bergerak mengalir sepanjang kolom terjadi kesetimbangan dinamis antara komponen yang terlarut. Untuk zat terlarut spesies A, kesetimbangan dinamis yang terlibat dapat dilihat pada persamaan dibawah ini.
Abergerak⇌Adiam

Konstanta kesetimbangan untuk reaksi diatas adalah rasio partisi / koefisien partisi, yang nilainya
K=cscm

…(1)

Dimana K = rasio partisi / koefisien partisi, cs= konsentrasi molar analitik dari zat terlatur saat berada dalam fasa diam, dan cm= konsentrasi molar analitik dari zat terlarut saat berada dalam fasa bergerak. Idealnya rasio partisi konstan dalam jangkauan konsentrasi zat terlatur yang bervariasi dan cs berbanding lurus dengan cm. • Waktu Retensi Pada lampiran gambar 1 dapat dilihat sebuah kromatogram sederhana yang memiliki 2 puncak. Puncak kecil yang berada di kiri merepresentasikan spesies yang tidak ditahan oleh fasa diam. Waktu (tM) setelah injeksi sampel sampai dengan munulnya puncak ini seringkali dinamakan waktu mati (dead time). Waktu mati memberikan pengukuran dari laju migrasi rata-rata dari fasa bergerak dan merupakan

9

Kimia Analitik_Kelompok 2

Pemicu 5: Kromatografi Gas

suatu parameter yang penting dalam mengidentifiasi puncak analit. Seringkali suatu sampel akan mengandung spesies yang tidak ditahan, jika mereka tidak memiliki spesies yang tidak ditahan maka penambahan spesies dengan sifat seperti ini dapat dilakukan untuk membantu identifikasi puncak. Puncak lebih besar yang terdapat di bagian kanan lampiran gambar 1 merupakan puncak dari spesies analit. Waktu yang diperlukan puncak ini untuk mencapai detektor atau waktu yang diperlukan spesies analit untuk keluar dari kolom dan mencapai detektor dinamakan waktu retensi (tR). Laju linear rata-rata dari migrasi zat terlarut (v) dan kecepatan linear rata-rata dari spesies dalam fasa bergerak (u) diberikan pada persamaan dibawah ini
v=LtR u=LtM

…(2) …(3)

Dimana L = panjang dari kolom Nilai dari v juga dapat dinyatakan dalam u dan rasio partisi (K) dengan cara mengekspresikan nilai laju v sebagai fraksi dari kecepatan pada fasa bergerak. Penurunannya adalah sebagai berikut:
v=u×fraksi waktu zat terlarut dalam fasa bergerak v=u×jumlah mol zat terlarut dalam fasa bergerakjumlah mol total v=u×cMVMcMVM+csVs=u×11+ csVscMVM v=u×11+KVsVM

…(4)

Dimana Vs = volume dari fasa diam dan VM = volume dari fasa bergerak. • Faktor kapasitas Faktor kapasitas merupakan parameter eksperimental yang menyatakan perbandingan mol komponen analit dalam fasa diam terhadap mol komponen dalam fasa gerak, yang nilainya tergantung pada temperatur. Faktor ini banyak digunakan untuk mendeskrispsikan laju migrasi zat terlarut dalam kolom. Untuk spesies A nilai faktor kapasitasnya adalah sebagai berikut. (dengan KA adalah nilai rasio partisi untuk spesies A)
k'A=KAVsVM

…(5) …(6)

Persamaan 5 dapat disubstitusi ke persamaan (4).
v=u×11+k'A

10

Kimia Analitik_Kelompok 2

Pemicu 5: Kromatografi Gas

Agar nilai k’A dapat dicari dalam kromatogram maka persamaan (2) dan (3) dapat disubstitusi ke persamaan (6)
LtR=LtM×11+k'A k'A=tR-tMtM

…(7) …(8)

Besarnya faktor kapasitas menentukan laju elusi komponen. Jika k’ > 1 maka elusi akan berlangsung dengan cepat dan jika k’ > 20-30 maka waktu elusi akan berlangsung sangat panjang. • Faktor Selektivitas atau Pemisahan Faktor Selektivitas adalah faktor yang menyatakan ukuran untuk distribusi relatif komponen diantara fasa diam dan fasa gerak yang nilainya tergantung pada temperatur. Faktor selektivitas disebut juga faktor pemisahan. Faktor seletivitas untuk dua spesies A dan B dinyatakan dengan rumusan: α=KBKA=tR2tR1 gambar 2. • Jumlah dan Tinggi Plat Rata-Rata Plat teoritik adalah istilah yang berasal dari teori destilasi yang kemudian diadaptasi ke dalam kromatografi. Plat ini menandakan suatu titik dalam kolom dimana terdapat kesetimbangan antara fasa cair dan gas (platnya hanya imaginer). Jumlah plat teoritik (n) dapat diukur dengan menggunakan rumus di bawah ini.
n=16tRWb2

…(9)

Untuk ilustrasi akan nilai tR2 dan tR1 yang lebih jelas dapat dilihat pada lampiran

…(10)

Dimana tR = waktu retensi dan Wb = lebar puncak pada pita elusi hasil kromatografi. Ilustrasi yang dapat memperjelas nilai Wb dapat dilihat pada lampiran gambar 3. Walaupun tR didefinisikan sebagai waktu, tetapi sebenarnya kita dapat mengukur jarak pada kertas daftar perekam dalam cm atau mm, perlu diingat bahwa t R dan Wb harus diukur dalam satuan yang sama. Tinggi plat teoritik disebut juga HETP (Height Equivalent Theoritical Plate). HETP berfungsi untuk merepresentasikan efisiensi dari kolom. Nilai HETP secara sederhana dapat dicari dengan menggunakan rumus dibawah ini.
HETP=H= Ln

…(11)

11

Kimia Analitik_Kelompok 2

Pemicu 5: Kromatografi Gas

Dimana L = panjang kolom, dan n = jumlah plat teoritik. Semakin besar nilai N maka semakin kecil nilai HETP dan semakin besar efisiensi kolom. • Variabel yang Mempengaruhi Efisiensi Kolom Faktor-faktor yang menyebabkan pelebaran pita elusi adalah difusi difusi longitudinal / memanjang, efek transfer massa untuk fasa bergerak (karena difusi eddy) dan fasa diam. Nilai efisiensi kolom non-linear dapat dihitung melalui persamaan dibawah ini.
HETP=H=Bu+csu+cMu

…(12)

Dimana B = koefisien difusi longitudinal, cs dan cM = koefisien transfer massa untuk fasa diam dan bergerak. • Suku B/u untuk difusi longitudinal

Laju dari perpindahan sebanding dengan perbedaan konsentrasi diantara wilayah dan juga sebanding dengan koefisien difusi dari spesies DM. Difusi longitudinal menghasilkan perpindahan zat terlarut dari konsentrasi tinggi di tengah pita ke bagian dengan konsentrasi rendah di bagian sampingnya, yang menjadi penyebab utama pelebaran pita ketika laju difusi molekul tinggi. Efek dari difusi ini dapat dilihat pada lampiran gambar 4 pada saat terjadi penurunan nilai H pada awal kurva.

Suku csu untuk koefisien transfer massa dalam fasa diam

Koefisien transfer massa untuk fasa diam ini berbanding lurus dengan kuadrat dari ketebalan film pada partikel pendukung d2f dan berbanding terbalik dengan koefisien difusi Ds dari zat terlarut pada film. Dengan film yang tebal, rata-rata molekul harus berjalan jauh untuk mencapai permukaan dan dengan koefisien difusi yang lebih kecil rata-rata molekul berjalan lebih lambat. Hal-hal ini mengakibatkan laju yang kecil dari transfer massa dan peningkatan dari tinggi plat.

Suku cMu untuk koefisien transfer massa dalam fasa bergerak

Suku ini berbanding terbalik dengan koefisien difusi dari larutan analit dalam fasa bergerak DM dan merupakan fungsi dari nilai kuadrat diameter partikel packing d2p, kuadrat dari diameter kolom dc2dan laju aliran. Kontribusi dari suku ini terhadap nilai H tidak linear sesuai dengan u karena juga tergantung dari kekompleks-an kecepatan pelarut. Pelebaran daerah pada fasa bergerak dikarenakan oleh penyebaran molekul analit dalam kolom akibat packing kolom yang tidak seragam, sehingga analit

12

Kimia Analitik_Kelompok 2

Pemicu 5: Kromatografi Gas

mengambil jalan yang tidak sama panjangnya (dapat dilihat pada lampiran gambar 5). Efek yang juga disebut difusi eddy. Pada kecepatan fasa bergerak yang rendah, molekul tidak terlalu terdispersi oleh difusi ini, pada saat kecepatan lumayan cepat pelebaran pita akibat difusi ini dapat diamati, dan pada saat kecepatan cukup tinggi efek dari difusi ini menjadi tidak bergantung dari laju aliran. (Rangkuman dari ketiga faktor ini terhadap HETP/H dapat dilihat pada lampiran gambar 6.) • Resolusi Kolom

Resolusi kolom (Rs) dapat mengukur kemampuan kolom untuk memisahkan dua analit secara kuantiitatif. Untuk lebih jelasnya dapat dituliskan dalam persamaan berikut:

RS =

2[ ( t R ) B − ( t R ) A ] 2 ∆Z = WA + WB W A + WB

…(13)

Dimana

merupakan jarak puncak analit A dan B yang terbaca pada

∆Z
kromatogram. Resolusi kolom dapat dipengaruhi oleh faktor selektivitas, kapasitas sepasang zat terlarut pada kolom yang dapat dilihat pada persamaan berikut: …(14)

RS =

N  α − 1  k ' B     4  α  1 + k ' B   

Dimana

α

adalah faktor selektivitas. Dari persamaan di atas dapat digunakan

juga untuk mencara jumlah piringan yang dibutuhkan untuk mencapai resolusi kolom dengan nilai tertentu.

13

Kimia Analitik_Kelompok 2

Pemicu 5: Kromatografi Gas

…(15)  2 α N = 16RS    α −1
2

 1 + k 'B    k'   B  

2

Selain itu resolusi kolom dapat mempengaruhi retention time (tR), dan kita dapat melihat hubungan keduanya sebagai berikut: …(16)

( t R ) B = 16RS

H  α  (1 + k ' B )   2 u  α − 1  ( k 'B )
2 2

3

2. Mengapa metode GC-MS sering digunakan untuk penentuan kandungan alkohol dan obat obatan terlarang dalam darah ? Metode GC/MS memiliki beberapa keuntungan dibanding metode analisis alkohol lainnya, yaitu :

sangat akurat, spesifik dan sensitif dan merupakan prosedur standar untuk analisis alkohol dan senyawa-senyawa volatil dalam bidang toksikologi forensik. Akurat dan spesifik karena teknik ini menghasilkan molekular fingerpint atau spektrum massa yang unik. Spektrum ini dapat digunakan untuk mengidentifikasi ada/tidaknya alkohol dalam sampel. Sensitif karena alkohol dalam darah dapat diketahui jumlahnya, walaupun dalam kuantitas kecil.

 Dengan menggunakan analisis darah GC/MS, sampel yang sama dapat diuji beberapa kali, jika sampel dijaga dengan baik.

Waktu yang diperlukan cepat (penentuan alkohol dapat dilakukan dalam 6-8 menit) bila alat-alatnya dihangatkan secara teratur.

Reagents • • Absolute etanol n-Propanol

Hasil yang diperoleh:

14

Kimia Analitik_Kelompok 2

Pemicu 5: Kromatografi Gas

• •

Dari 5 L larutan standar etanol dan n propanol masing-masing menunjukkan Sebanyak 5 L dari campuran sampel standar menghasilkan data sebagai No etanol (mL) 1 2 3 4 5 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 n-propanol (mL) 1.9 1.8 1.7 1.6 1.5 3.75 7.50 11.25 15 18.75 Tinggi puncak Etanol(mm)

puncak pada 2.4 dan 7.2 menit berikut:

• •

Dari hasil injeksi 5 L sampel darah diperoleh puncak pada 2.4 menit dengan Pada salah satu campuran standar etanol dan n-propanol yang digunakan

tinggi senilai 12,5 mm menunjukkan data sbb: lebar dasar puncak pada etanol dan n-propanolberturut-turut adalah 1.45 menit dan 3,65 menit Tugas III : Bagaimana anda menentukan:
1.

Konsentrasi senyawa etanol dalam sampel darah Resolusi kolom (Rs) [tanpa satuan] Jumlah piringan rata-rata (N rata-rata) Tinggi piringan (H) dalam meter Panjang kolom bila resoliusi kolom menjadi 1.5 Waktu elusi senyawa etanol dalam kolom yang telah diperpanjang

2. 3. 4. 5. 6. Jawab
1.

Menentukan konsentrasi senyawa etanol dalam sampel darah

Dari data-data yang didapat bisa diketahui konsentraasi etanol untuk masing masing sampel, yaitu :

15

Kimia Analitik_Kelompok 2

Pemicu 5: Kromatografi Gas

No Hexachlorobenzene Pentachlorobenzene (mL) (mL)

Konsentrasi (ml/ml) Hexachlorobenzene dalam sampel standar

1 2 3 4 5

0.1 0.2 0.3 0.4 0.5

1.9 1.8 1.7 1.6 1.5

5% 10% 15% 20% 25%

Dari data tersebut dapat dibuat sebuah kurva kalibrasi standar dengan tinggi puncak etanol sebagai sumbu y dan konsentrasi etanol dalam sampel standar sebagai sumbu x. Kurva Kalibrasi Standar

Dari grafik di atas, diperoleh persamaan garis y = 0.75 x. Untuk mengetahui kandungan etanol dalam sampel darah yang mempunyai puncak 2.4 menit dan tinggi 12,5 digunakan persamaan : y = 0.75x dimana: y adalah tinggi puncak gelombang (mm) dan x adalah konsentrasi (%) maka : y = 0.75 x 12,5 = 0.75 x x = 16,67% Sehingga diperoleh kandungan senyawa etanol dalam 2 ml sampel sebesar 16,67% atau sama dengan 0,3344 mL. Maka, kandungan senyawa etanol dalam 5 L sampel darah :
5 μL2x103 μLx 0.3344 x103 μL=0.83355 μL

2.

Menentukan resolusi kolom

Data-data yang diketahui adalah sebagai berikut:

16

Kimia Analitik_Kelompok 2

Pemicu 5: Kromatografi Gas

( tR ) A ( tR ) B

= waktu retensi etanol= 2,4 menit

= waktu retensi n-propanol= 7,2 menit

WA= lebar dasar puncak etanol= 1,45 menit WB= lebar dasar puncak n-propanol= 3,65 menit Persamaan yang digunakan untuk mencari nilai Rs adalah sebagai berikut:

RS =

2[ ( t R ) B − ( t R ) A ] 2 ∆Z = WA + WB W A + WB
2[ 7,2menit − 2,4menit] 1,45menit + 3,65menit 9,6menit = 1,88 5,1menit

RS =

RS =

Jadi, nilai resolusi kolom (Rs) = 1.88 3. Data-data yang diketahui adalah sebagai berikut: = waktu retensi n-propanol = 7,2 menit

( tR ) B ( tR ) A
WA WB

= waktu retensi etanol

= 2,4 menit

= lebar dasar puncak etanol = lebar dasar puncak n-propanol

= 1,45 menit = 3,65 menit

Persamaan yang dugunakan untuk mencari nilai jumlah piringan rata-rata (N rata-rata) adalah sebagai berikut:

17

Kimia Analitik_Kelompok 2

Pemicu 5: Kromatografi Gas

t  N = 16 R  W 

2

Perhitungan jumlah piringan untuk etanol:
t  N = 16 R  W 
2

 2,4 menit  N = 16  = 43,833  1,45menit 
Perhitungan jumlah piringan untuk n-propanol:
t  N = 16 R  W 
2

2

 7,2 menit  N = 16  = 62,258  3,65menit 
Perhitungan jumlah piringan rata-rata:
N rata-rata=N hexachlorobenzene+N pentachlorobenzene2 N rata-rata=43,833+62,2582=53,045

2

Jadi, jumlah piringan rata-rata (N rata-rata) = 53,045

4.

Tinggi piringan (H) dalam meter

Misal : panjang kolom (L) = 50 cm  permisalan Maka, tinggi piringan (H):

18

Kimia Analitik_Kelompok 2

Pemicu 5: Kromatografi Gas

H =

50 cm L = = 0.943 cm N 53.045

5.

Panjang kolom bila resoliusi kolom menjadi 1.5 Panjang kolom bila resoliusi kolom menjadi 1.5 (Rs)2 Dari persamaan:

N = 16 RS

2

 α    α − 1   

2

 1 + k 'B   k' B 

   

2

diketahui bahwa α dan k’B konstan (tidak berubah) dengan berubahnya N dan L, sehingga didapat persamaan:

( RS )1 ( RS ) 2

=

N1 N2

Subtitusi (Rs)1 = 1.88 ; (Rs)2 = 1.5 ; N1 = 53.045 ke dalam persamaan di atas, sehingga didapat jumlah piringan (N2) bila resolusi diharapkan menjadi 1.5:
1.88 = 1 .5 53.03 N2
2

 1 .5  N 2 = 53.045    1.88  N 2 = 33.76 ≈ 34

Jadi, panjang kolom bila resolusi kolom diharapkan menjadi 1.5:
L=NH L = 34 × 0.943 cm = 32.062 cm ≈ 32 cm

19

Kimia Analitik_Kelompok 2

Pemicu 5: Kromatografi Gas

6. elusi senyawa etanol dalam kolom yang telah diperpanjang

Waktu Diketahui persamaan waktu (tR)B yang dibutuhkan untuk mengelusi 2 senyawa tersebut dengan resolusi Rs adalah:
16 RS H  α   =  α − 1  u  
2 2

(tR ) B

 (1 + k ' B ) 3     ( k' ) 2  B  

dari persamaan di atas, diketahui bahwa tR ~ RS 2, sehingga diperoleh persamaan:

(t R A )1 Rs1 2 = (t R A ) 2 Rs2 2
Jadi, waktu elusi etanol pada kolom yang telah diperpanjang tsb:

2.4 (1.88) = (t RA ) 2 (1.5) 2 ( t RA ) 2 = 1.528 menit = 91.67 det ik
2

20

Kimia Analitik_Kelompok 2

Pemicu 5: Kromatografi Gas

BAB 3 PENUTUP
Kromatografi merupakan salah satu metode pemisahan komponen-komponen campuran di mana cuplikan berkesetimbangan di antara dua fasa, fasa gerak yang membawa cuplikan dan fasa diam yang menahan cuplikan secara selektif. alcohol dalam darah dapat di analisa melalui metode analisis kromatografi gas. Pada kromatograf, jumlah peak (puncak) menunjukkan jumlah komponen yang terdapat dalam cuplikan, sedang luas peak menunjukkan konsentrasi komponen. Terdapat beberapa parameter yang digunakan dalam menganalisis suatu campuran melalui metode kromatografi, diantaranya yaitu waktu retensi. Waktu retensi yaitu lamanya cuplikan berada pada kolom kromatografi hingga cuplikan tersebut terelusi dan terdeteksi oleh detektor dan dicatat oleh kromatograf dalam bentuk suatu puncak. Berikutnya yaitu resolusi kolom, yaitug ukuran kuantitatif dari kolom yang menunjukkan kemampuan kolom tersebut untuk memisahkan dua zat terlarut. Analisis dalam kromatografi gas dapat bersifat analisis kualitatif maupun kuantitatif. Analisis kualitatif berupa pengidentifikasian senyawa yang terkandung dalam suatu campuran dengan menggunakan perbandingan waktu retensi antara analit standar dengan sampel. Sedangkan analisis kuantitatif dapat diaplikasikan untuk mengetahui nilai-nilai yang berhubungan dengan kromatogram. Nilai-nilai yang dapat diketahui adalah resolusi kolom, konsentrasi sampel (dengan metode kurva kalibrasi), efisiensi, dan lain-lain. Penggunaan Gas kromatografi dapat dipadukan dengan spektroskopi massa guna memperoleh data yang lebih akurat dalam mengidentifikasi senyawa gas. Banyaknya variasi hasil mendukung pengolahan data sehingga pengidentifikasian berlangsung lebih mudah dan baik. Kadar

21

Kimia Analitik_Kelompok 2

Pemicu 5: Kromatografi Gas

DAFTAR PUSTAKA

• • • • •

Christian, Gary D., J.E. O’Reilly. 1986. Instrumental Analysis. Allynan Bacon Inc: USA. Day, R.A. dan Underwood,A.L. 1986. Analisis Kimia Kuantitatif (terjemahan). Edisi kelima. Jakarta: Erlangga. Hendayana, Sumar.1995. Kimia Analitik Instrumen. Semarang: IKIP Semarang Press. Skoog, D.A., et.al., Fundamentals of Analytical Chemistry Sixth Edition. Saunders College Publishing:London. Anonim. Kromatografi. http://file.upi.edu/Direktori/D%20-%20FPMIPA/JUR. %20PEND.%20KIMIA/196611151991011%20-%20HOKCU %20SUHANDA/KULIAH%20KIMIA%20INSTRUMEN/KROMATOGRAFI %20SFC.pdf (di akses pada 13 Desember 2010)

• •

Anonim. Kromatografi. http://id.wikipedia.org/wiki/Kromatografi (di akses pada 13 Desember 2010) Anonim. Kromatografi. http://www.chem-istry.org/materi_kimia/kimia_dasar/pemurnian-material/kromatografi/ (di akses pada 13 Desember 2010)

Anonim, “Analysis of Blood Plasma for Ethanol by Gas Chromatography” http://www.oberlin.edu/chem/ForChemLab/Alcohol/AlcoholPStudents.pdf (6 Desember 2010)

22

Kimia Analitik_Kelompok 2

Pemicu 5: Kromatografi Gas

LAMPIRAN

Gambar 1. Kromatogram/Pita Elusi untuk Campuran 2 Komponen

Gambar 2. Pengukuran untuk Menentukan Nilai α dan R

23

Kimia Analitik_Kelompok 2

Pemicu 5: Kromatografi Gas

Gambar 3. Pita Elusi Kromatografik yang menunjukkan pengukuran tR dan w untuk menghitung nilai n (jumlah plat teoritik)

Gambar 4. Isoterm-Isoterm Linear dan Non-Linear (a) dan bentuk pita elusi yang bersangkutan (b)

Gbr 5: Instrumentasi Kromatografi Sumber: http://lansida.blogspot.com/2010/06/gc-kromatografigas.html

24

Kimia Analitik_Kelompok 2

You're Reading a Free Preview

Download
scribd
/*********** DO NOT ALTER ANYTHING BELOW THIS LINE ! ************/ var s_code=s.t();if(s_code)document.write(s_code)//-->