You are on page 1of 16

Web Gambar Maps Berita Buku Terjemahan Gmail selengkapnya ▼

Tanya Jawab Blog Pembaruan


Kalender Foto Documents Site Grup

Pulsed-Field Gel E en id

n _t id UTF-8 2 1

en
Dari:
Inggris

id
Ke:
Bahasa Indonesia

Terjemahkan

Merjemahkan teks atau laman web


Pulsed-Field Gel Electrophoresis
and its use in Molecular Biology
Esin (HACIOÚLU) BASIM
S??leyman Demirel University, F

Terjemahan Inggris ke Bahasa Indonesia

Berdenyut-Field Gel Elektroforesis (PFGE) Teknik


dan perusahaan menggunakan dalam Biologi Molekular
Esin (HACIOÚLU) Basim
S? Leyman Demirel University, Fakultas Pertanian, Departemen Perlindungan Tanaman?,
?????? 32260 n r, Isparta - TURKEY
H? Seyin Basim?
Akdeniz University, Fakultas Pertanian, Departemen Proteksi Tanaman,
07058, Antalya - TURKEY
Diterima: 2000/06/30
Abstrak: Dalam beberapa tahun terakhir, penggunaan elektroforesis gel berdenyut-lapangan
(PFGE) dalam biologi molekuler
daerah telah dikenakan banyak penelitian. PFGE adalah alat yang ampuh untuk
mengkarakterisasi berbagai strain di
tingkat DNA, memperoleh informasi yang relevan pada ukuran genom dan membangun fisik dan
peta genetik dari kromosom bakteri yang kurang dipahami di tingkat genetik serta
dalam pemisahan kromosom pada mikroorganisme, dan dalam jangka panjang pemetaan gen
mamalia.
PFGE juga memiliki keuntungan dari memeriksa konfigurasi memanjang dan berorientasi DNA
besar
molekul dalam gel agarosa di kekuatan finite field. Dalam review ini, penggunaan PFGE dalam
biologi molekular,
karakteristik umum PFGE, berbagai jenis PFGE dan faktor yang mempengaruhi PFGE adalah
diperkenalkan.
Kata Kunci: Elektroforesis Gel Pulsed-Field (PFGE), CHEF, Biologi Molekuler, Bioteknologi,
Pembatasan Enzim.
Berdenyut-Lapangan jel Elektroforez (PFGE) 405
Turk J Biol
25 (2001) 405-418
© T? Butak?
Berdenyut-Field Gel Elektroforesis (PFGE) Teknik dan penggunaannya dalam Biologi
Molekular
406
Pengantar
Banyak kemajuan pesat yang sedang dibuat dalam biologi molekuler saat ini tergantung pada
kemampuan untuk memisahkan, ukuran dan memvisualisasikan molekul DNA. Teknik yang
paling umum untuk hal ini
Tujuan adalah bahwa standar elektroforesis gel agarosa. Gel elektroforesis (1) adalah salah satu
paling umum digunakan teknik pemisahan di laboratorium biologi modern. Its ubiquity
timbul dari kedua kesederhanaan dan fleksibilitas dari teknik ini. Elektroforesis telah
menemukan
luas digunakan dalam pengujian biologis, dan dalam pemurnian dan pemisahan protein dan
asam nukleat. Pemetaan fisik gen dan sekuensing DNA keduanya tergantung pada pemisahan
dengan elektroforesis gel (1). elektroforesis gel Konvensional molekul DNA dilakukan dengan
menempatkan DNA dalam (misalnya agarose atau poliakrilamida) matriks padat dan merangsang
molekul-molekul
bermigrasi melalui gel bawah medan listrik statis. DNA fragmen dari 100 ke 200 pasangan basa
(Bp) sampai dengan 50 pasang kilobase (kb) secara rutin dipisahkan dengan elektroforesis gel
konvensional
teknik. Di atas 50 kb, karena ukuran molekul, aksi pengayak gel adalah
hilang, dan fragmen dijalankan sebagai sebuah band, luas anomali terselesaikan dengan
mobilitas tinggi. Meskipun
fragmen yang lebih besar (hingga 750 kb) telah diselesaikan dengan teknik ini (2), gel yang
digunakan adalah
sangat rapuh karena konsentrasi agarosa sangat rendah, dan pemisahan tidak
cukup untuk sebagian besar aplikasi. Pemisahan molekul DNA dengan teknik lainnya adalah
memakan waktu.
Kebutuhan untuk analisis molekul DNA besar dalam pemetaan skala besar (3).
Pada tahun 1982, Schwartz et al. (4) memperkenalkan konsep bahwa DNA molekul yang lebih
besar dari 50 kb
dapat dipisahkan dengan menggunakan dua medan listrik bolak (PFGE yaitu). Sejak saat itu,
nomor
instrumen didasarkan pada prinsip ini telah dikembangkan, dan nilai menggunakan bidang
berdenyut
telah ditunjukkan untuk memisahkan DNA dari beberapa kb lebih dari 10 pasang megabase
(Mb).
Pengembangan PFGE telah meningkat dua perintah besarnya ukuran DNA
molekul yang dapat secara rutin difraksinasi dan dianalisis. Peningkatan ini adalah sangat
penting
dalam biologi molekular karena menyederhanakan penyelidikan sebelumnya banyak melelahkan
dan membuat
mungkin baru yang banyak. Its berbagai aplikasi mencakup semua organisme (2) dari bakteri dan
virus untuk mamalia (5). PFGE telah menunjukkan kemampuan yang bagus untuk memisahkan
kecil, alam linier
DNA kromosom ukuran mulai dari microchromosomes parasit 50-kb untuk jutaan bp
kromosom ragi. Namun, kromosom manusia utuh berbagai ukuran dari 50 juta menjadi
250 juta bp (Mb), terlalu besar untuk pemisahan PFGE langsung (6). PFGE menyediakan sarana
untuk
pemisahan rutin fragmen melebihi 6.000 kb (2, 7, 8, 9). Oleh karena itu, PFGE
memisahkan DNA dari beberapa kilobase (kb) untuk lebih dari 10 pasang megabase (Mb) (10).
Teknik baru PFGE mengambil keuntungan dari konfigurasi memanjang dan berorientasi
molekul DNA besar dalam gel agarose pada kekuatan finite field. Bonus penting dari
Teknik adalah kemudahan dengan ukuran genom yang dapat diukur, parameter yang
sebelumnya memiliki kesalahan cukup bila diukur dengan teknik lain. Yang penting
hasil dari penggunaan PFGE dan pencernaan pembatasan endonuklease adalah pembangunan
fisik peta. Aplikasi umum dari PFGE bisa dalam pemisahan kromosom utuh,
besar - pembatasan skala pemetaan daerah kromosom dan dalam menggunakan fragmen DNA
pemurnian sebagai bantuan dalam kloning. PFGE akan sangat memudahkan pemilihan yang
tepat sangat besar
fragmen untuk kloning, dan menyediakan analisis cepat dari daerah kromosom besar. PFGE
telah
terbukti sangat kuat dalam analisis molekul DNA besar dari berbagai sumber,
termasuk khusus genom bakteri terfragmentasi (11), mamalia (5), protozoa parasit
(12-15) dan DNA kromosom utuh dari jamur (16-18). Pengenalan PFGE
teknik untuk memisahkan molekul DNA besar memiliki efek menyegarkan pada studi
molekul DNA kromosom, struktur genom dan teori electrophoretical.
Dalam review ini, penggunaan PFGE dalam biologi molekular karakteristik umum PFGE,
berbagai jenis PFGE dan faktor yang mempengaruhi PFGE diperkenalkan.
Jenis PFGE
PFGE menyelesaikan ukuran molekul DNA hampir milimeter panjang melalui penggunaan
berdenyut-medan medan listrik, yang selektif memodulasi Mobilitas secara ukuran yang
tergantung.
Efek elektroforesis berdenyut ini telah digunakan oleh berbagai instrumen (FIGE, TAFE,
CHEF, OFAGE, PACE dan gel elektroda berputar) untuk meningkatkan resolusi ukuran baik
besar
dan molekul DNA kecil (1). Hal ini penting ketika memilih suatu sistem PFGE untuk
mengevaluasi biaya
dan kinerja dalam terang penggunaan diproyeksikan. Ada berbagai jenis PFGE. Ini adalah:
1. Bidang-Inversion Gel Elektroforesis (FIGE): Pada tahun 1986, Carle, Frank dan Olson
dikembangkan
sistem sederhana, FIGE, di mana dua bidang yang terpisah 180 ¡(19). Elektroda polaritas adalah
terbalik pada interval, dengan maju lebih lama dari waktu pulsa reverse untuk menghasilkan
maju bersih
sampel migrasi. migrasi ke depan bersih dicapai dengan meningkatkan rasio ke depan untuk
reverse kali pulsa ke 3:1. Untuk meningkatkan resolusi dari band-band oleh FIGE, durasi
kali pulsa semakin meningkat selama berlari. Ini disebut waktu Òswitch rampingÓ. Dengan
mengubah jangka waktu pulsa terus menerus selama percobaan, FIGE memiliki
keuntungan dari jalur lurus dan peralatan sederhana. Semua yang dibutuhkan adalah kotak gel
standar
dan controller pulsa. Hari ini, FIGE sangat populer untuk perpisahan fragmen yang lebih kecil.
FIGE
menyediakan resolusi diterima sampai dengan 800 kilobases (600-750 kb).
2. Transverse-Alternating Field Gel Elektroforesis (TAFE): Bentuk PFGE memungkinkan
pemisahan DNA besar fragmen dalam format sederhana, nyaman tanpa kelemahan
sebelumnya berdenyut-bidang teknik. Di TAFE, gel berorientasi vertikal dan empat sederhana
elektroda
array ditempatkan tidak pada bidang gel, tapi di depan dan di belakang itu. Contoh molekul
dipaksa untuk zigzag melalui ketebalan gel, dan semua jalur mengalami efek yang sama,
sehingga band tetap lurus (20). Sebagai molekul bergerak ke bawah gel, mereka terkena
terus-menerus variasi dalam kekuatan lapangan dan sudut reorientasi, tetapi untuk semua jalur
sama. Namun,
sudut antara medan listrik bervariasi dari puncak gel (115 ¡) ke bawah
(Sekitar 165 ¡) dan karenanya molekul masih tidak bergerak dengan kecepatan konstan selama
407
E. (HACIOÚLU) Basim, H. Basim
panjang gel. teknologi TAFE, dengan pemisahan teratur dan tajam pita DNA, akan menjadi
khusus keuntungan dalam studi genetika protozoa patogen banyak, analisis mana seperti
tidak mungkin sebelum (20). TAFE telah digunakan untuk pemisahan fragmen sampai dengan
1.600
kilobase fragmen.
3. Contour-jepit Homogen Electric Fields (CHEF): CHEF adalah yang paling banyak digunakan
aparat. Aparat CHEF memberikan solusi yang lebih canggih untuk efek distorsi
kedua tepi ruang dan elektroda pasif. CHEF memiliki 24 point
elektroda sama spasi sekitar kontur heksagonal. Dalam sistem CHEF, tidak ada
ÒpassiveÓ elektroda. Semua elektroda dihubungkan ke catu daya melalui loop eksternal
resistor, semua yang memiliki ketahanan yang sama. loop ini bertanggung jawab untuk
pengaturan
tegangan dari semua elektroda sekitar kontur heksagonal terhadap nilai-nilai yang sesuai dengan
generasi bidang seragam di setiap posisi switching alternatif. Sistem CHEF set
tegangan pada ini 24 poin. Alat ini menghasilkan medan listrik yang cukup
seragam sehingga semua jalur dari menjalankan gel lurus. CHEF menggunakan sudut reorientasi
120 ¡dengan
gradiations penyinaran electropotential dari positif ke negatif pori-pori. Molekul Facebook
untuk 7.000 kb dapat dipisahkan oleh CHEF (10).
4. Orthogonal-Lapangan Alternatif Gel Elektroforesis (OFAGE): Sebuah alat serupa yang
menggunakan dua medan listrik nonhomogen dilaporkan oleh Carle dan Olson (17) pada tahun
1984. The
kelemahan utama dari aparat adalah bahwa karena medan listrik tidak seragam,
dan sudut antara medan listrik bervariasi di seluruh gel, molekul DNA bermigrasi di
tingkat yang berbeda tergantung pada lokasi mereka di gel. Hal ini terutama bermasalah di
pemetaan genom mamalia, di mana distribusi kontinu ukuran fragmen yang dihasilkan.
Lane-ke-jalur comparisions dan estimasi ukuran untuk DNA genomik dicerna kurang
langsung ketika band diskrit lebih sedikit yang dipisahkan, seperti dengan kromosom
organisme yang lebih rendah seperti ragi. Sudut antara medan listrik bervariasi dari kurang dari
180 ¡dan
lebih dari 90 ¡. Molekul DNA dari 1.000 sampai 2.000 kb dapat dipisahkan dalam OFAGE (17,
21).
5. Rotating Gel Elektroforesis (RGE): Di Inggris pada tahun 1987, Selatan (22) dijelaskan
novel PFGE sistem yang berputar gel antara dua sudut mengatur sedangkan elektroda tidak aktif.
Dalam
RGE, medan listrik seragam dan band lurus karena hanya satu set elektroda adalah
digunakan. RGE memudahkan untuk melakukan waktu dan ramping tegangan. Hal ini juga
memungkinkan pengguna untuk mempelajari
efek dari sudut yang berbeda, dan bahkan untuk bervariasi ini, selama percobaan-sudut ramping.
RGE menggunakan bidang homogen tunggal dan perubahan orientasi medan listrik dalam
kaitannya
ke gel dengan terputus-putus dan secara berkala berputar gel. Switch kali terlalu lama di RGE.
Molekul-molekul DNA bermigrasi di jalur lurus, karena bidang homogen, dan DNA
molekul dari 50 kb menjadi 6.000 kb dapat dipisahkan dengan menyesuaikan frekuensi gel
rotasi. Selain itu, sudut reorientasi dapat dengan mudah diubah hanya dengan mengubah
sudut rotasi (2, 23).
Berdenyut-Field Gel Elektroforesis (PFGE) Teknik dan penggunaannya dalam Biologi
Molekular
408
6. Programmable mandiri-Controlled Elektroda (PACE): PACE The
sistem elektroforesis menawarkan kontrol yang lebih tepat semua parameter medan listrik oleh
peraturan independen dari tegangan pada tanggal 24 elektroda disusun dalam kontur tertutup.
The
fleksibilitas dari sistem PACE berasal dari kemampuannya untuk menghasilkan jumlah yang
tidak terbatas
listrik bidang homogenitas dikendalikan, gradien tegangan, orientasi dan durasi. The PACE
sistem dapat melakukan semua bidang berdenyut sebelumnya beralih rejimen (FIGE yaitu,
OFAGE, PHOGE,
berdenyut searah), serta menghasilkan tegangan dijepit bidang statis homogen. The
sistem PACE memisahkan fragmen DNA dari 100 bp hingga lebih dari 6 Mb. Kemampuan
untuk mengubah
reorientasi sudut antara bidang bolak izin kecepatan peningkatan pemisahan untuk
molekul DNA besar. Sebuah sistem komputer berbasis dikenal sebagai PACE, dirancang oleh
Lai et al. (1) dapat
PFGE menjadi perangkat utama. Ini adalah alat yang sangat berguna untuk mempelajari variabel
seperti pulsa
waktu, suhu, konsentrasi agarosa, tegangan dan sudut antara bidang mempengaruhi DNA
migrasi PFGE (24).
7. Berdenyut-Homogen Orthogonal Lapangan Gel Elektroforesis (PHOGE): Mayor
perbedaan antara instrumen dan kotak gel lainnya dengan medan listrik homogen adalah bahwa
reorientasi sudut lapangan adalah 90 ¡. PHOGE menggunakan sudut reorientasi 90 ¡, namun
DNA
molekul menjalani empat reorientasi per siklus bukan dua. jalur DNA di PHOGE melakukan
tidak berjalan lurus, sebuah fenomena yang telah dijelaskan untuk gel berjalan melibatkan
beberapa
bidang listrik dengan cara ini. Sistem ini memisahkan fragmen DNA hingga 1 Mb (23).
Peralatan PFGE
Komponen dasar dari suatu sistem PFGE terdiri dari kotak gel dengan beberapa cara
suhu peraturan, satu unit switching untuk mengendalikan medan listrik, pendingin dan power
suplai (1).
Kotak Gel
Desain dasar dari kotak PFGE terdiri dari gel amobil dalam array elektroda
dan sarana yang beredar buffer elektroforesis. gradien tegangan dari 10 volt / cm
umum digunakan dalam PFGE. Gradien Tegangan setinggi 15 volt / cm telah digunakan dalam
bidang
inversi pemisahan klon kosmid (1). Suhu buffer dikendalikan oleh
mekanisme pertukaran panas. Umumnya, buffer adalah diresirkulasi seluruh kotak gel
menggunakan
inlet dan outlet port (17, 24).
Pasokan Listrik Tegangan Tinggi
kontrol tepat dari gradien medan listrik yang diperlukan untuk memperoleh PFGE konsisten
perpisahan. peringkat Output catu daya karenanya harus cukup tinggi untuk memenuhi
409
E. (HACIOÚLU) Basim, H. Basim
baik tegangan dan arus persyaratan dari kotak gel. Sebuah kotak PFGE khas gel telah elektroda
yang adalah 25 sampai 50 cm. Untuk mencapai kisaran umum digunakan dari gradien tegangan
sebesar 1,5
untuk 15 volt / cm membutuhkan power supply dengan tegangan maksimum 750 volt. The
arus ditarik pada tegangan ini dalam kotak PFGE kebanyakan sekitar 0,5 ampere pada 14 ¡C
menggunakan 0.5x
TBE (1x TBE adalah 89 mM Tris pH:. 7 89 mM asam Borat dan 2 mM EDTA) sebagai
penyangga berjalan (1).
Switch Unit
Kemampuan untuk mengendalikan reproducibly interval saklar sangat penting untuk pemisahan
(24). The
terbatas kecepatan relay dapat beralih tidak akan mengakomodasi puasa switching diperlukan
untuk
PFGE pemisahan molekul DNA kecil (2-50 kb). Relay biasanya dikontrol oleh
komputer. Untuk mengatasi kelemahan dari relay elektromekanik, tegangan tinggi solid-state
elektronik telah menggantikan relay elektromekanik di baru-baru ini dirancang PFGE komersial
sistem. Unit-unit switching ini umumnya didasarkan pada penggunaan semikonduktor oksida
logam
transistor efek medan (MOSFET) di switching baik dan elektroda sirkuit kontrol tegangan.
Desain ini menawarkan keuntungan dari peningkatan kehandalan, kemampuan kecepatan tinggi
switching (0,1 ms) dan tegangan yang cukup (750 V) dan arus (0,5 ampere) peringkat (1). Ini
aparat memiliki kemampuan untuk mengontrol sudut reorientasi antara medan listrik.
Namun, instrumen tersebut tidak dapat menyediakan cukup cepat switching untuk perbaikan
pemisahan molekul DNA yang lebih kecil dari 50 kb.
Program Komputer
kontrol hati-hati dari interval switch sangat penting dalam mengendalikan resolusi di PFGE. A
unit switching serbaguna harus memiliki perangkat lunak dengan karakteristik yang sama.
Algoritma
harus cukup cepat sehingga kali beralih setidaknya sesingkat 1 ms dapat dicapai dan beralih
increment interval harus memiliki minimal resolusi 1 ms. Linear beralih ramping Interval telah
menjadi prosedur yang paling sering digunakan karena pelaksanaannya sederhana. maksimum
run time harus sekitar dua minggu untuk memungkinkan pemisahan molekul DNA yang sangat
besar.
Hal ini dikendalikan oleh sebuah program komputer (1).
Cooler
resirkulasi Penyangga merupakan faktor penting, karena menghilangkan variasi suhu di dalam
gel sehingga dapat mengurangi kerusakan buffer karena elektrolisis. migrasi molekul DNA
sensitif
untuk suhu, dan dengan demikian suhu seragam di seluruh gel diperlukan untuk memastikan
bahkan
migrasi di masing-masing jalur. Buffer diresirkulasi melalui ruang gel oleh reciprocating
solenoid pompa pada laju sekitar 450 ml / menit. buffer ini dingin dalam tangki reservoir dengan
dingin
air (5 ¡C) beredar melalui kaca tabung penukar panas. Buffer suhu demikian
dipertahankan pada 13-15 ¡C seluruh lari khas (17, 24).
Berdenyut-Field Gel Elektroforesis (PFGE) Teknik dan penggunaannya dalam Biologi
Molekular
410
Menjalankan Kondisi PFGE
pemisahan PFGE peka terhadap berbagai molekul dan lingkungan yang berbeda
variabel. Prinsip variabel yang signifikan adalah sifat molekul DNA, nadi
waktu, bentuk listrik lapangan, kuat medan listrik, komposisi gel, sampel
konsentrasi dan suhu.
1. Pulse Waktu: Dalam PFGE, DNA dikenakan bergantian untuk dua medan listrik pada waktu
yang berbeda
sudut waktu yang disebut waktu pulsa. Molekul-molekul mungkin harus mengubah arah
sebelumnya
untuk gerak translasi bersih. Setiap kali lapangan diaktifkan, molekul yang lebih besar lebih lama
perubahan arah dan memiliki sedikit waktu untuk bergerak selama pulsa masing-masing,
sehingga mereka bermigrasi lebih lambat dari
molekul yang lebih kecil. Molekul sangat kecil sehingga waktu reorientasi mereka adalah singkat
dibandingkan dengan
waktu pulsa akan menghabiskan sebagian besar durasi pulsa dalam gerak elektroforetik
konvensional dimana
Ukuran resolusi sangat terbatas. Sebagai akibatnya, resolusi di PFGE kemungkinan besar akan
optimal untuk
molekul dengan waktu reorientasi sebanding dengan waktu pulsa. Pada kuat medan penerapan
sekitar 10 V / cm, 0,1 kali s pulsa menyelesaikan DNA secara optimal dalam berbagai ukuran 5-
kb, sementara pulsa
kali 1.000 s pada 3 / cm V digunakan untuk menyelesaikan 3-7 molekul Mb. Pulse kali dipilih
sehingga
bahwa molekul DNA dengan ukuran yang ditargetkan menghabiskan sebagian besar durasi pulsa
reorientasi
daripada bergerak melalui gel, yang account untuk jangka waktu yang lama, biasanya hari
atau minggu, diperlukan untuk fraksinasi molekul DNA besar. Molekul DNA kromosom
Saccharomyces cerevisiae dalam kisaran 10 Mb membutuhkan elektroforesis semakin besar
variabel sekitar
satu minggu (25).
2. Bidang Listrik Bentuk: Sejumlah konfigurasi berbeda medan listrik adalah
digunakan dalam percobaan PFGE awal. Itu jelas bahwa aspek-aspek tertentu pada bentuk
bidang
yang penting dalam mencapai pemisahan resolusi tinggi PFGE. kuat medan listrik dapat
disesuaikan untuk menyempurnakan berbagai ukuran resolusi PFGE efektif. Resolusi PFGE
dipengaruhi
dengan jumlah dan konfigurasi elektroda yang digunakan, karena mengubah bentuk
diterapkan medan listrik. Variabel yang paling penting tampaknya sudut antara alternatif
bidang listrik. Konfigurasi elektroda yang paling efektif menghasilkan sudut lebih dari 110 ¡. A
sudut terus meningkat antara ladang menghasilkan band penajaman yang sangat meningkatkan
resolusi. Sudut antara bidang alternatif selalu lebih besar dari 90 ¡mana yang baik
resolusi diamati. Dalam kasus resolusi yang sangat baik, sudut lapangan biasanya berkisar dari
120 ¡
untuk 150 ¡. Sebaliknya, di mana resolusi miskin terlihat, sudut-sudut lapangan biasanya berkisar
dari
110 ¡¡ke 150 (25). Sudut 90 ¡atau lebih kecil tidak efektif, mungkin karena DNA
molekul mudah menjadi berorientasi di tengah-tengah antara dua bidang yang diterapkan. Sudut
yang lebih besar dari
90 ¡lebih efektif (25). Sementara studi selengkapnya mengenai sudut optimal yang diperlukan,
maka
jelas bahwa sudut dalam kisaran 120 -150 ¡¡menyediakan sangat resolusi tinggi (25). Lapangan
kekuatan
yang mengurangi, atau sudut yang meningkatkan, semakin sepanjang arah gerakan DNA bersih
menghasilkan band mengasah karena molekul di bagian depan masing-masing zona DNA selalu
bermigrasi
lebih lambat dari orang-orang di belakang.
411
E. (HACIOÚLU) Basim, H. Basim
3. Listrik Field Strength: mobilitas Elektroforesis didefinisikan sebagai kecepatan per unit
lapangan. Dalam elektroforesis biasa kebanyakan, mobilitas adalah independen dari kekuatan
medan. Ini
kemerdekaan diharapkan jika sifat-sifat molekul tidak langsung diubah oleh
proses pemisahan. Kekuatan lapangan mempengaruhi mobilitas dalam dua cara. Mobilitas dari
100-500
kb DNA menunjukkan ketergantungan sekitar linier pada kekuatan lapangan. Kekuatan lapangan
mempengaruhi
ukuran DNA transisi antara dua zona resolusi (25).
4. Reorientasi Angle: The pelebaran sudut reorientasi akan menghasilkan band tajam
dan resolusi yang lebih baik. Pemisahan kromosom ragi hampir identik bagi mereka
kromosom dipisahkan dengan sudut reorientasi 110 dan 165 ¡¡. Namun, ketika
reorientasi sudut dari 105 ke 165 ¡¡digunakan untuk memisahkan molekul dengan ukuran S.
cerevisiae (200-3,000 kb), ada perbedaan 4 kali lipat antara kecepatan DNA diamati dengan
berbeda ini sudut (1). Peningkatan mobilitas diperoleh dengan sudut reorientasi kecil
bahkan lebih menonjol ketika memisahkan molekul yang lebih besar. Kebanyakan tersedia
secara komersial
berdenyut-bidang kotak gel menggunakan sudut tetap sebesar 120 ¡antara bidang bergantian.
5. Voltage: Seperti waktu switch, pilihan dari tegangan yang digunakan dalam PFGE juga harus
bervariasi
dengan ukuran DNA yang akan dipisahkan. Sedangkan gradien tegangan 6-10 / cm V dapat
digunakan untuk
molekul yang terpisah sampai 1 Mb, memecahkan molekul lebih besar dari ini dalam bidang gel
berdenyut membutuhkan
penurunan gradien tegangan (14, 24). Pemisahan kromosom dari ragi S. pombe
(3 Mb, 5 Mb dan 6 Mb) mensyaratkan bahwa gradien tegangan tidak melebihi 2 V / cm. Bahkan
lebih besar
kromosom crassa N. (lebih besar dari 12 Mb) dipisahkan sebesar 1,5 / cm V (15). Praktis
efek adalah untuk meningkatkan waktu habis untuk molekul DNA yang lebih besar. Dengan
demikian, pemisahan elektroforesis
kromosom crassa N. dibutuhkan sampai 7 hari. Ketika gradien tegangan direduksi menjadi
DNA besar yang terpisah, interval switching harus diperpanjang (15).
6. Suhu: Dalam elektroforesis gel konvensional, molekul DNA dijalankan di kamar
temperatur tetapi, di PFGE, DNA dijalankan pada suhu rendah (antara 4 ¡¡C dan 15 C).
Suhu memiliki efek dramatis pada mobilitas DNA dalam PFGE. Suhu antara 14 ¡C dan
22 ¡C umumnya dianggap sebagai kompromi terbaik antara kecepatan dan resolusi sementara gel
dapat dijalankan pada suhu kamar, biasanya diperlukan untuk mengedarkan buffer melalui panas
exchanger untuk mengusir panas yang dihasilkan oleh gradien tegangan yang digunakan selama
paling berdenyut
lapangan berjalan (2, 25). Kecepatan DNA lambda di 34 ¡C dua kali bahwa pada 4 ¡C. Namun,
gel jalankan
pada temperatur setinggi 34 ¡C menunjukkan berkurang resolusi (1).
7. interval Switch: Determinan terpenting mobilitas di PFGE adalah
interval di mana arah medan listrik diaktifkan. Jika interval switching
meningkat di luar waktu yang dibutuhkan untuk fragmen untuk reorientasi, maka fragmen akan
menghabiskan
sebagian besar jangka gel bermigrasi, seperti dalam elektroforesis konvensional, dengan
kerugian yang dihasilkan
dalam resolusi. Pemilihan interval switching yang tepat untuk PFGE harus mencerminkan
ukuran
berbagai fragmen untuk diselesaikan. Birren et al. (24) telah mengukur kecepatan DNA
molekul dari 50 sampai 1.000 kb di PFGE dengan waktu beralih dari 5-300 s. Tertinggi
Berdenyut-Field Gel Elektroforesis (PFGE) Teknik dan penggunaannya dalam Biologi
Molekular
412
resolusi untuk molekul dengan ukuran yang diberikan diperoleh dengan menggunakan saklar
interval terpendek yang
izin pemisahan dari berbagai ukuran lengkap dari fragmen (26).
8. Agarosa Konsentrasi: Konsentrasi agarosa akan mempengaruhi pemisahan diperoleh
dengan PFGE. Migrasi DNA yang lebih cepat terjadi pada gel agarosa konsentrasi rendah. DNA
l
monomer (48,5 kb) bermigrasi 50% lebih cepat dalam PFGE sebesar 0,6% dibandingkan dengan
agarose gel 1%. The
pita DNA yang cukup menyebar di gel 0,7% menjadi semakin tajam seperti agarosa yang
konsentrasi dibesarkan di 1,4% dan 1,8% gel berulang kali identik. Jarak bermigrasi oleh
sampel identik menunjukkan penurunan dalam kecepatan sebagai konsentrasi agarosa adalah
meningkat (24).
9. Restriction Enzim: Kemampuan enzim restriksi (RES) untuk memotong DNA pada spesifik
urutan basa telah sangat merangsang pertumbuhan teknologi DNA rekombinan. Atas
1.900 Res diketahui, dan ada 275 yang tersedia dari perusahaan yang berbasis di seluruh dunia
(27). Enzim restriksi umum, EcoR I dan Hind III, mencerna bakteri dan mamalia
DNA untuk fragmen rata-rata sekitar 4 kb dalam ukuran terlalu kecil untuk PFGE. Untuk ini
Alasannya, disarankan untuk menggunakan enzim yang memiliki situs relatif sedikit dan
memberikan fragmen-fragmen yang lebih besar
dari DNA target dalam PFGE (27). Setiap enzim memproduksi sejumlah besar fragmen kecil
(Lebih kecil dari 10 kb) adalah tidak mungkin berguna untuk PFGE dan pemetaan. Faktor utama
dalam memilih
enzim restriksi yang cocok adalah komposisi dasar (% G + C content) dari DNA target.
Analisis oleh PFGE dan enzim langka-restriksi telah berguna untuk mendapatkan yang relevan
informasi tentang ukuran genom, karakteristik berbagai strain di tingkat DNA (28), menyusul
sejarah genetik strain tertentu, membangun peta fisik dan genetik dari bakteri
kromosom kromosom dan dinamika belajar antara bakteri (29-31). Enzim yang
mengenali urutan lebih besar dari 6 pb yang berpotensi berguna dalam pemetaan genom karena
mereka
menghasilkan fragmen besar (27). Saat ini, ada sembilan pembatasan enzim komersial
tersedia dengan urutan pengakuan 8-bp. Dari jumlah tersebut, Bukan aku, SFI saya, SRF aku,
Ase I, Pac I dan Swa saya
jarang-pemotong dalam genom dengan kandungan G + C sekitar 35-55%. Bawah dan di atas ini
margin jumlah fragmen menjadi terlalu kecil dan terlalu besar, masing-masing. Pac Saya
(AATTAATT), Swa I (ATTTAAAT), PME I (GTTTAAAC) dan SSE 83871 (CCTGCAGG)
yang baru
pasar (32). Di sisi lain, Pac I dan Swa aku enzim akan berguna khususnya bagi
genom dengan isi G + C pada kisaran 45-65% (32). Pasangan 4-bp urutan 5O-CTAG-
3o tampaknya dipilih melawan dalam genom bakteri yang paling (33). tetranucleotide ini
merupakan bagian dari
urutan pengakuan Spe I (A / CTAGT), Xba I (T / CTAGA), nhé I (G / CTAGC) dan Avr II
(C / CTAGG). CTAG jarang ditemukan pada prokariota paling dan endonuklease restriksi bahwa
menyertakan urutan urutan pengakuan mereka dipotong genom bakteri jarang (32).
PFGE besar fragmen DNA yang dihasilkan menggunakan jarang memotong Swa I dan Pac saya
endonuklease restriksi yang digunakan dalam analisis genom axonopodis Xanthomonas pv.
vesicatoria, agen penyebab penyakit bercak daun lada dan tomat, dan kondisi yang optimal
untuk pencernaan dalam analisis genom ditentukan (26, 34-36).
413
E. (HACIOÚLU) Basim, H. Basim
Berdenyut-Bidang Aplikasi
Penuh pemahaman sistem biologi membutuhkan pengetahuan tentang struktur dan fungsi
gen dan pengaturan mereka pada kromosom. PFGE telah digunakan untuk memisahkan DNA
molekul sama besar dengan 12 Mb. Kemampuan untuk menganalisis fragmen besar seperti akan
sangat memudahkan
peta pembangunan fisik (1).
Kemampuan untuk memisahkan, mengisolasi dan menganalisis megabase ukuran fragmen DNA
sudah
memberikan wawasan ke dalam organisasi genom organisme yang beragam seperti bakteri dan
manusia
(2).
PFGE digunakan dalam bidang-bidang berikut:
1. Munculnya teknik PFGE untuk resolusi molekul DNA yang besar telah memberikan
pendekatan baru analisis untuk genom bakteri (37). The PFGE fragmen DNA yang diperoleh
menggunakan enzim berbeda adalah teknik yang kuat untuk resolusi cepat dari genom bakteri
menjadi beberapa fragmen besar kecil.
2. The PFGE fragmen DNA yang diperoleh dengan menggunakan endonuklease menghasilkan
pola diskrit
band berguna untuk pemetaan sidik jari dan fisik dari kromosom (38).
3. PFGE Teknik ini berguna untuk menentukan tingkat keterkaitan antara berbagai
strain dari spesies yang sama (38).
4. PFGE telah terbukti menjadi metode yang efisien untuk estimasi ukuran genom dan
konstruksi peta kromosom, serta menjadi berguna untuk karakterisasi bakteri
spesies (39-41). PFGE teknologi telah terbukti tak ternilai untuk perkiraan yang akurat dari
genom
ukuran dan dalam konstruksi peta fisik beragam organisme prokariotik
(42,43).
5. PFGE adalah alat yang ampuh untuk karakterisasi genom dan telah menyebabkan
pembangunan
peta fisik lebih dari 180 kromosom bakteri (44).
6. PFGE telah terbukti sangat kuat dalam analisis molekul DNA besar dari
berbagai sumber termasuk DNA kromosom utuh dari jamur (16), protozoa parasit (45)
dan khususnya terfragmentasi genom bakteri (26, 38) dan mamalia (5, 6).
7. PFGE menyederhanakan banyak penyelidikan melelahkan sebelumnya dan membuat banyak
kemungkinan baru
investigasi. Teknik ini telah digunakan secara luas dalam aplikasi untuk semua organisme dari
bakteri virus (2).
8. Ragi Buatan Kromosom (YAC) perpustakaan telah dibangun oleh PFGE (2).
9. PFGE eksperimen digunakan dalam pembangunan tikus transgenik (2).
10. PFGE juga telah menunjukkan dirinya berguna dalam studi mengenai radiasi dan kerusakan
DNA yang diinduksi
perbaikan, ukuran organisasi dan variasi dalam centromers mamalia (2, 46).
Berdenyut-Field Gel Elektroforesis (PFGE) Teknik dan penggunaannya dalam Biologi
Molekular
414
11. Banyak investigasi langsung melibatkan studi organisasi genom. Misalnya, dalam
menentukan kedekatan fisik dari dua gen, sedangkan menentukan ukuran gen sangat besar
atau saat mengidentifikasi lokasi istirahat kromosom (2, 46).
12. PFGE akan memainkan peran utama dalam pemetaan genom manusia (47). Fisik
pemetaan kromosom manusia melibatkan pemesanan dan mengukur jarak antara menetapkan
penanda DNA yang unik untuk kromosom itu. Mengingat ukuran besar dari kromosom
terlibat (50,000-300,000 kb), PFGE adalah metode untuk mengejar (47).
13. PFGE digunakan untuk menentukan urutan penanda lebih tepat daripada yang dimungkinkan
dengan
analisis keterkaitan genetik, dan dengan peta PFGE tersedia, spidol baru dapat dengan cepat
dilokalisasi
dalam bahwa daerah (32).
14. Sebuah mutasi baru dapat dipetakan dengan kloning gen, diikuti dengan analisis restriksi dan
hibridisasi, untuk satu set fragmen restriksi yang diperintahkan oleh PFGE (47).
15. PFGE akan sangat memudahkan pemilihan tepat fragmen DNA besar untuk kloning. RES
yang spesifik untuk memotong urutan jarang terjadi, digunakan untuk membuat DNA besar
fragmen yang kemudian dipisahkan oleh PFGE. Dengan blotting dan hibridisasi fragmen
mengandung gen yang diinginkan ditentukan. Wilayah ini pulih dari gel dan kloning
(2, 23).
16. PFGE memungkinkan untuk isolasi mudah dari fragmen restriksi individu untuk lebih lanjut
pembatasan pemetaan, penyisipan gen dan pemetaan gen fungsional (13).
Hasil
Perkembangan PFGE selama dekade terakhir telah menyebabkan koleksi cerdik
desain yang bisa diterapkan. instrumen TodayÕs menyelesaikan pesanan DNA beberapa kali
lipat lebih besar dari
dimungkinkan dengan elektroforesis konvensional, yang memungkinkan studi langsung utuh
kromosom dari ragi dan parasit manusia. Penyelidikan saat ini berpusat pada yang lebih baik
pemahaman teknik ini, yang akan mendukung desain generasi baru dari perangkat
untuk memisahkan fragmen yang lebih besar dan, akhirnya, seluruh genom manusia.
Analisis seluruh genom merupakan pendekatan revolusioner untuk genetika, dan
ketersediaan jumlah besar informasi dari proyek-proyek ini akan memungkinkan baru konseptual
pendekatan dalam banyak bidang penelitian biologi. Hal ini jelas bahwa pada saat ini, tidak ada
satu
teknik atau strategi sudah cukup untuk menyusun peta kromosom manusia utuh.
Namun, penggunaan gabungan banyak teknik baru yang kuat membawa analisis
genom mamalia dalam jangkauan.
PFGE telah memungkinkan pengembangan sistem kloning YAC dan akan memainkan utama
peran dalam pemetaan genom manusia. Teknik PFGE akan berguna untuk membangun
tingkat keterkaitan antara strain yang berbeda dari spesies yang sama.
415
E. (HACIOÚLU) Basim, H. Basim
aplikasi Masa Depan untuk teknik PFGE mungkin termasuk perpisahan protein dan asam nukleat
sequencing dan studi tentang topologi DNA. PFGE memungkinkan konstruksi fisik-map untuk
hampir
setiap organisme. teknik PFGE harus segera menyediakan peta fisik dan aplikasi mereka untuk
sejumlah luas mikroorganisme. Sebagai metode pemetaan fisik dengan cepat menggusur genetik
metode untuk tugas kromosom, adalah penting untuk memahami perilaku DNA sirkular
spesies di gel berdenyut-lapangan.
Analisis dengan PFGE dapat digunakan untuk menetapkan peta jangka panjang berdasarkan
penanda anonim
yang telah terbukti secara genetik terkait. Idealnya, daerah ditargetkan sudah jenuh dengan
spidol, memungkinkan pembangunan beberapa peta tumpang tindih. Namun, untuk genom
tanaman,
spidol jarang berkelompok dengan kepadatan yang cukup untuk memungkinkan pembangunan
segera
peta rinci berdasarkan beberapa spidol.
Referensi
1. Lai, E., Birren, BW, Clark, SM, Simon, MI, Hood, L. Elektroforesis Pulsed-Field Gel.
Biotechniques, 7: 34 -
42, 1989.
2. Gardiner, K. Elektroforesis Pulsed-Field Gel. Kimia Analitik, 63: 658-665, 1991.
3. Selatan, EM, Penatua, JK Pulsed-Field Gel Elektroforesis. Diedit oleh A. Monaco P., Press
Oxford, IRL, 1-119,
1995.
4. Schwartz, DC, Saffran, W., Welsh, J., Haas, R., Goldenberg, M., penyanyi, CR New teknik
untuk memurnikan
besar DNA dan mempelajari prioreties mereka dan kemasan. Cold Spring Harbor Simposium di
Biologi Kuantitatif,
XLVII: 189-195, 1982.
5. Smith, CJ, Coote, JG, Parton, R. R plasmid-mediated kromosom mobilisasi dalam Bordetella
pertussis. J. Gen.
Microbiol, 1432:. 2685-2692, 1986.
6. Smith, CL, penyanyi, komunikasi CR arus di probe DNA biologi molekuler. Aplikasi dalam
genetik dan
penyakit menular dan kanker. Diedit oleh Lerman LS, Laboratorium Spring Harbor Dingin,, 87-
95 1986.
7. Steward, G., Furst, A., Avdalovic, N. Transverse Elektroforesis Alternating Field (TAFE).
Biotechniques, 6: 68-73,
1988.
8. Maloy, SR, Cronan, JE Jr, Freifelder, D. Genetika mikroba. Jones dan Penerbit Bartlett, Edisi
Kedua,
45-47, 1994.
9. Kaufmann, ME, Pitt, Metode TL di Laboratorium Bakteriologi Praktis. Disunting oleh H.
Chart, FL, CRC Press Inc,
83, 1994.
10. Levene, SD Metode dalam Biologi Molekuler, Elektroforesis Gel Pulsed-Field. Eds. M.
Burmeister dan L.
Ulanovsky, Totowa, NJ, Humana Press, 345-365, 1992.
11. Smith, CL, Econome, JG, Schutt, A., Klco, S., penyanyi, CR Peta fisik dari Escherichia coli
K12
genom. Science, 236: 1448-1453, 1987.
12. VanderPloeg, LHT, Schwartz, DC, penyanyi, CR, Borst, P. antigenik variasi dalam brucei
Trypanosoma dianalisis
oleh elektroforetik pemisahan molekul DNA kromosom-ukuran. Sel, 37: 77-78, 1984.
Berdenyut-Field Gel Elektroforesis (PFGE) Teknik dan penggunaannya dalam Biologi
Molekular
416
13. Smith, CL, Klco, SR, penyanyi, CR Genome analisis pendekatan praktis. Diedit oleh K.
Davis E., Washington
DC, IRL Press, Oxford, 41-72, 1988.
14. Vollrath, D., Davis, RW Isolasi molekul DNA lebih dari 5 megabases oleh kontur-dijepit
homogen
bidang listrik. Nucl. Asam. Res, 15:. 7865-7876, 1987.
15. Orcbach, MJ, Vollrath, D., Davis, RW, Yanofsky, C. Sebuah kariotipe elektroforesis crassa
Neurospora. Mol.
Cell. Biol, 8:. 1469-1473, 1988.
16. Schwartz, DC, penyanyi, CR Pemisahan DNA kromosom ragi berukuran oleh berdenyut-
field gel gradien
elektroforesis. Sel, 37: 67-75, 1984.
17. Carle, GF, Olson, MV Pemisahan molekul DNA kromosom dari ragi oleh ortogonal
alternasi--field
gel elektroforesis. Nucl. Asam Res, 14: 5647-5663, 1984..
18. Carle, GF, Olson, MV Sebuah kariotipe elektroforetik untuk ragi. Proc. Natl. Acad. Sci, 82:.
3756-3760, 1985.
19. Carle, GF, Frank, F., Olson, MV elektroforesis pemisahan molekul DNA besar oleh inversi
berkala
medan listrik. Science, 232: 65-68, 1986.
20. Steward, G., Furst, A., Avdalovic, N. Transferse Elektroforesis Alternating Field (TAFE).
Biotechniques, 6: 68-73,
1988.
21. Chu, G., Vollrath, D., Davis, RW Pemisahan molekul DNA besar dengan kontur-dijepit
listrik homogen
bidang. Science, 234: 1582-1585, 1986.
22. Selatan, EM, Anand, R., Brown, WR, Fletcher, DS model A untuk pemisahan molekul DNA
besar dengan
menyeberangi lapangan elektroforesis gel. Nucl. Asam Res, 15:. 5925-5943, 1987.
23. Ziegler, A., jilid, A. Metode dalam Biologi Molekuler, Pulsed-field gel elektroforesis. Eds.
M. Burmeister, L.
Ulanovsky, Totawa, NJ, Humana Press, 63-72, 1992.
24. Birren, BW, Lai, E., Clark, SM, Houd, L., Simon, MI kondisi Dioptimalkan untuk berdenyut-
field gel elektroforesis
pemisahan DNA. Nucl. Asam Res, 16:. 7563-7581, 1988.
25. Cantor, CR, Gaal, A., Smith, CL resolusi tinggi pemisahan dan penentuan ukuran akurat
dalam Pulsed-field gel
elektroforesis DNA. 3. Pengaruh bentuk medan listrik. Biokimia, 27: 9216-9221, 1988.
26. BasÝm, E., BasÝm, H., Stall, RE, Jones, JB Bakteriyel genom analizinde PFGE (Pulsed-
Field Gel Elektroforesis)
y?? nteminin belirlenmesi koßullarÝnÝn optimal. Biyoteknoloji (K kem??) Dergisi, 23 (2): 107-
112, 1999.
27. Bhagwat, SEBAGAI Restriction enzim: Properties dan digunakan. Metode dalam enzim,
216: 199-224, 1992.
28. Grouthues, D., T mmler, B. Baru pendekatan dalam analisis gen dengan elektroforesis gel
berdenyut-bidang:?? Aplikasi ke
analisis spesies Pseudomonas. Mol. Microbiol, 5:. 2763-2776, 1991.
29. Kohara, Y., Akiyama, K., Isono, K. peta fisik dari kromosom E. coli seluruh: Aplikasi yang
baru
strategi untuk analisis cepat dan penyortiran perpustakaan genom besar. Sel, 50: 495-508, 1987.
30. Chang, N., Taylor, DE Penggunaan berdenyut-lapangan elektroforesis gel agarosa untuk
ukuran genom spesies Campylobacter
dan untuk membangun Sal yang saya peta Campylobacter jejuni UA580. J. Bakteriologi, 172:
5211-5217, 1990.
31. BasÝm, E. Pulsed-field jel y elektroforez? Ntemi ile domates telah biberde yaprak lekesi
etmeni? (Xanthomonas
axonopodis pv. vesicatoria) o nÝn genom b? y??? kl?? U?? n?? saptanmasÝ n fiziksel
olußturulmasÝ haritasÝnÝn ve. Doktora
tezi, Akdeniz? NIV?., Fen Bilimleri Enst., Bitki Koruma Anabilim Daly, 83 sayfa, 1998.
32. Burmeister, M. Metode dalam Biologi Molekuler. Eds. M. Burmeister, L. Ulanovsky, New
Jersey, Humana Press, 259 -
284, 1992.
417
E. (HACIOÚLU) Basim, H. Basim
33. Bautsch, Pulsed-field W. elektroforesis gel, protokol, metode dan teori. Eds. M. Burmeister,
L. Ulanovsky,
Humana Press, 185-201, 1992.
34. McClelland, M., Jones, R., Patel, J., Nelson, M. Pembatasan endonuklease untuk pemetaan
berdenyut-bidang bakteri
genom. Nucl. Asam Res, 15:. 5985-6005, 1987.
35. HacÝoÛlu, E., BasÝm, H., Stall, pembatasan RE Jarang-pemotongan endonuklease berguna
untuk menentukan ukuran genom
dan fisik peta axonopodis Xanthomonas pv. vesicatoria. Fitopatologi, 86: 77-78, 1996.
36. HacÝoÛlu, E., BasÝm, H., Stall, RE Optimized kondisi Pac I dan Swa I untuk analisis
genom Xanthomonas
axonopodis pv. vesicatoria oleh PFGE. Biotecniques, 22: 1024-1026, 1997.
37. Dempsey, JAF, Livaker, W., Madhure, A., Snodgrass, TL, Cannon, JG peta fisik dari
kromosom
Neisseria gonore FA1090 dengan lokasi penanda genetik, termasuk opa dan gen pil. J.
Bakteriologi, 173:
5476-5486, 1991.
38. Correia, A., Martin, JF, Castro, JM Pulsed-field gel elektroforesis analisis genom asam
amino
memproduksi Corynebacteria: Kromosom ukuran dan keragaman pola pembatasan.
Mikrobiologi, 140: 2841 -
2847, 1994.
39. BasÝm, H., Stall, RE, Minsavage, J., Jones, J. kromosom transfer gen antara strain
Xanthomonas
axonopodis pv. vesicatoria oleh konjugasi. Fitopatologi, 89: 1044-1049, 1999.
40. Churin, YN, Shalak, DI, Borner, T., Shestakov, SV Fisik dan peta genetik dari kromosom
dari
cyanobacterium uniseluler Synechocystis sp. PCC strain 6803. J. Bakteriologi, 177: 3337-3343,
1995.
41. Roussel, Y., Pebay, M., Guedon, G., Simonet, JM, Decaris, B. Fisik dan peta genetik
Streptococcus
thermophilus A054. J. Bakteriologi, 176: 7413-7422, 1994.
42. Bourke, B., Sherman, P., Louie, H., Hani, E., Islur, P., Chan, VL Fisik dan peta genetik dari
genom
Campylobacter upsaliensis. Mikrobiologi, 141: 2417-2424, 1995.
43. Pyle, LE, Taylor, T., Finch, LR peta genom beberapa strain didalam cluster theMycoplasma
mycoides. J.
Bakteriologi, 172: 7265-7268, 1990.
44. Bourgeois, PL, Lautier, M., Berghe, LVD, Gasson, MJ, Ritzenthaler, P. Fisik dan peta
genetik dari
Lactococcus lactis subsp. cremoris MG1363 kromosom: Perbandingan dengan Lactococcus
lactis subsp. lactis
IL 1403 revals sebuah inversi genom besar. J. Bakteriologi, 177: 2840-2850, 1995.
45. VanderPloeg, LHT, Schwartz, DC, penyanyi, CR, Borst, P. antigenik variasi dalam brucei
Trypanosoma dianalisis
oleh elektroforetik pemisahan molekul DNA kromosom-ukuran. Sel, 37: 77-78, 1984.
46. Suwanto, A., Kaplan, S. Fisik dan pemetaan genetik dari Rhodobacter sphaeroides 2-4,1.
Genom: Keberadaan
dari dua kromosom sirkuler yang unik. J. Bakteriologi, 171: 5850-5859, 1989.
47. Larsen, F., Gunderson, G., Prtdz, H. Pilihan enzim untuk pemetaan berdasarkan CpG pulau
dalam genom manusia.
Gata, 9 (3): 80-85, 1992.
Berdenyut-Field Gel Elektroforesis (PFGE) Teknik dan penggunaannya dalam Biologi
Molekular
418
Google Terjemahan untuk:PenelusuranVideoEmailTeleponObrolanBisnis
Tentang Google TerjemahanMatikan terjemahan instanPrivasiBantuan

You might also like