ISOLATION AND IDENTIFICATION OF FLAVONOIDS COMPOUNDS AND TOXICITY TEST OF METHANOL

EXTRACT FROM BROWN ALGAE (Sargassum cristaefolium)

1 2 3
Muhammad Fahri , Yenny Risjani , Sasangka P
1)
Post Graduent Student of Brawijaya University
2)
Brawijaya University
3)
Brawijaya University

ABSTRACT
Indonesia has a very high potential of algae. Noted there are at least 555 species of algae in the waters of
Indonesia. Sargassum is a brown algae (Phaeophyceae) multicellular suspected of secondary metabolic
compounds such as alkaloids or flavonoids. This compound may be bioactive compounds that can be used in
the medical world, such as anticancer.
Have been isolated and identification of flavonoid compounds and test the toxicity of methanol extract of
Sargassum cristaefolium. Extraction was done by maceration increased, so that the extract of chloroform,
acetone and methanol extracts. All three extracts obtained were tested by animal test activities Brine shrimp
Artemia salina L with BSLT method. Toxicity test is to extract showed chloroform extract with LC 50 value of 1.88
ppm, acetone extract with LC50 values of 3.97 ppm and methanol extracts with LC50 values of 3.02 ppm. All
three extracts are included in the category of very toxic.
Phitochemistry test of methanol extract from S. cristaefolium is compounds such as flavonoid, flavon,
alkaloids, terpenoids and steroids. The methanol extract of Thin Layer Chromatography (TLC) qualitative and
preparative with toluene : ether : acetic acid eluent (10:10:2) and HPLC qualitative analysis. Identification of
isolates by analysis of UV-vis spectrophotometer using shift reagents and Infrared Spectrophotometry (FT-IR).
The identification with the UV-visual and IR is estimated that isolates obtained flavonoids namely 5,6,7, -
dihidroflavonol.

Key words : Isolation, Identification, Toxicity Testing, Methanol, Flavonoids, S. cirstaefolium. dihidroflavonol.

ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA FLAVONOID SERTA UJI TOKSISITAS EKSTRAK METANOL
DARI ALGA COKLAT (Sargassum cristaefolium)

ABSTRAK
Indonesia memiliki potensi alga yang sangat tinggi. Tercatat sedikitnya ada 555 jenis alga di perairan
Indonesia. Sargassum merupakan alga coklat (Phaeophyceae) multiseluler yang diduga memiliki senyawa-
senyawa metabolisme sekunder berupa alkaloid atau flavonoid. Senyawa-senyawa tersebut kemungkinan
merupakan senyawa bioaktif yang dapat digunakan dalam dunia pengobatan, misalnya sebagai antikanker.
Telah dilakukan isolasi dan identifikasi senyawa golongan flavonoid serta uji toksisitas ekstrak metanol
Sargassum cristaefolium. Ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi bertingkat, menghasilkan ekstrak
kloroform, ekstrak aseton dan ekstrak metanol. Ketiga ekstrak yang diperoleh diuji aktifitasnya dengan hewan
uji larva udang Artemia salina L dengan metode BSLT. Hasil uji toksisitas ekstrak adalah ekstrak klorofom
dengan nilai LC50 sebesar 1,88 ppm, ekstrak aseton dengan nilai LC 50 sebesar 3,97 ppm dan ekstrak metanol
dengan nilai LC50 sebesar 3,02 ppm. Ketiga ekstrak termasuk dalam kategori bersifat sangat toksik.
Uji golongan fitokimia senyawa ekstrak metanol S. cristaefolium mengandung beberapa senyawa
diantaranya flavonoid, flavon, alkaloid, terpenoid dan steroid. Isolasi ekstrak metanol dilakukan dengan
Kromatografi Lapis Tipis (KLT) kualitatif dan preparatif dengan eluen toluen:eter:asam asetat (10:10:2) serta
analisa HPLC kualitatif. Analisa Identifikasi isolat dengan spektrofotometri UV-vis menggunakan pereaksi geser
dan Spektrofotometri Infrared (FT-IR).
Hasil identifikasi menggunakan UV-visual dan IR bahwa isolat yang diperoleh diduga merupakan senyawa
golongan flavonoid yakni 5,6,7,- dihidroflavonol .

Kata Kunci : Isolasi, Identifikasi, Uji Toksisitas, Metanol, Flavonoid, S. cirstaefolium. dihidroflavonol.

PENDAHULUAN (Kamiya, et al. 1987), antiviral (Rinehart et al., 1993),

Latar Belakang
Kelautan meliputi hampir 70% dari permukaan
bumi merepresentasikan sumber terbaik bagi
kekayaan bahan alam planet ini. Berbagai literatur
mengemukakan bahwa banyak hasil bahan alam
kelautan yang mempunyai bioaktivitas antitumor
komponen sitotoksik (Schmitz et al. 1993), dan lain-
lain. Studi-studi tersebut memperlihatkan bahwa
lingkungan kelautan merupakan sumber yang kaya
akan komponen bioaktif, banyak di antaranya
memiliki struktur kimiawi yang tidak ditemukan dalam
sumber dari lingkungan terestial (Jadulco, 2002).

Fahri, M. (2010) 1
 Indonesia memiliki potensi alga sangat tinggi
dengan panjang pantai sekitar 81.000 Km (Bengen,
2001). Tercatat sedikitnya ada 555 jenis alga di
perairan Indonesia. Sebanyak 555 jenis dalam 4 suku
alga yang dikenal, yakni alga biru (Cyanophyceae),
alga hijau (Chlorophyceae) alga coklat
(Phaeophyceae) dan alga merah (Rhodophyceae).
Sargassum cristaefolium merupakan salah satu
golongan alga coklat (Phaeophyceae). Makroalga
jenis ini belum banyak dimanfaatkan dan
dibudidayakan oleh masyarakat Indonesia.
Sargassum merupakan alga multiseluler yang diduga
memiliki senyawa-senyawa hasil metabolisme
sekunder berupa alkaloid atau flavonoid. Senyawa-
senyawa tersebut kemungkinan merupakan senyawa
bioaktif yang dapat digunakan dalam dunia
pengobatan, misalnya sebagai antikanker
(Khurniasari, 2004).
Skrining awal untuk menguji bahan alam dengan
uji toksisitas terhadap larva udang Artemia salina L.
sering digunakan untuk mengetahui senyawa aktif
yang terkandung dalam ekstrak tanaman, karena
relatif murah, cepat, dan hasilnya dapat dipercaya. Uji
senyawa aktif dilakukan dengan larva udang Artemia
salina L. sampai diperoleh isolat aktif. (Ledenberg,
1992).
Isolasi dan identifikasi senyawa bioaktif dari S.
cristaefolium dimaksudkan untuk mengetahui
senyawa-senyawa yang memiliki potensi untuk
digunakan dalam berbagai bidang yang dapat
meningkatkan peluang pemanfaatan alga coklat ini
sebagai alternatif baru sebagai bahan pengobatan.
Dalam penelitian ini dilakukan analisa fitokimia
terhadap senyawa golongan flavonoid yang terdapat
dalam S. cristaefolium. Tahapan penelitian meliputi
pembuatan ekstrak S. cristaefolium, isolasi senyawa
flavonoid secara KLT (Kromatografi Lapis Tipis) dan
analisa HPLC (High Performance Liquid
Chromatography) dan dilanjutkan identifikasi dengan
analisa senyawa kimia secara spektrofotometri UV-
vis menggunakan pereaksi geser dan
Spektrofotometri Infrared (FT-IR). Sedangkan uji
potensi daya toksisitas ekstrak senyawa dengan
metode BSLT (Brine Shrimp Lethality Test).
Rumusan Masalah
Apakah kandungan senyawa bioaktif flavonoid
yang terkandung dalam ekstrak alga coklat S.
cristaefolium. Apakah ekstrak senyawa yang terdapat
pada S. cristaefolium mempunyai daya toksisitas
sehingga memiliki potensi untuk dikembangkan
dalam dunia pengobatan seperti antikaknker atau
antitumor.
Tujuan Penelitian
(1) Isolasi dan Identifikasi senyawa flavonoid yang
terdapat dalam S. cristaefolium.
(2) Mengetahui daya toksiksitas ekstrak senyawa
pada S. cristaefolium sebagai uji pre-skrening
awal untuk senyawa yang memiliki potensi dalam
dunia pengobatan.
Manfaat Penelitian
(1) Dapat memberikan informasi tentang metode
isolasi dan identifikasi senyawa flavonoid dari S.
cristaefolium.
(2) Memberikan informasi tentang daya toksisitas
ekatrak senyawa dari S. cristaefolium sehingga
dapat menjadi dasar pertimbangan untuk
mengetahui potensi bioaktif senyawa sebagai
salah satu alternatif bagi pengobatan berbasis
bahan alam.
(3) Memberikan informasi kandungan senyawa dari
S. cristaefolium sehingga dapat dimanfaatkan
secara optimal dan dapat memberikan nilai
tambah dan nilai ekonomis serta peluang baru
bagi pengembangan lahan usaha budidaya laut
khususnya alga coklat yang bermanfaat dalam
peningkatan pendapatan dan kesejahteraan
masyarakat pesisir pada umumnya.
METODELOGI PENELITIAN
Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian dilakukan di Laboratorium Kimia
Organik Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan
Alam (FMIPA) dan Laboratorium Reproduksi Ikan
Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan (FPIK),
Universitas Brawijaya pada Bulan Juli 2009 sampai
dengan Mei 2010.
Rancangan Penelitian
Ekstrak kasar yang diperoleh dari ekstraksi
maserasi bertingkat dilakukan uji prekrening awal
dengan hewan uji Artemia salina dengan metode
Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Keaktifan ekstrak
senyawa dilihat dari nilai LC50 pada uji toksisitas.
Ekstrak yang aktif dilanjutkan dengan isolasi senyawa
dengan KLT kualitatif dan preparatif serta HPLC.
Identifikasi senyawa dengan Spektrokopis UV-vis
menggunakan pereaksi geser dan Spektrokopis
Infrared.
Rancangan Uji Toksisitas
Uji toksisitas menggunakan rancangan
eksperimental dengan perlakuan perbedaan
konsentrasi ekstrak S. cristaefolium terhadap
kematian larva Artemia salina L umur 48-72 jam
setelah penetasan telur. Konsentrasi ekstrak yang
digunakan adalah 0 μg/ml (kontrol), 6,25 μg/ml, 12,5
μg/ml, 25 μg/ml, 50 μg/ml, 100 μg/ml dengan 5 kali
ulangan. Penempatan perlakuan dilakukan secara
acak. Parameter yang digunakan adalah jumlah A.
salina L yang mati dari total larva hewan uji.
Kemudian di hitung nilai LC50 dengan menggunakn
analisa probit (50% kematian hewan uji). Uji toksisitas
untuk mendapatkan nilai Lethal Concentration 50
(LC50) dari ekstrak tersebut. Ekstrak yang bersifat
toksik dengan diketahui dari nilai LC50 pada uji
toksisitas.
Prosedur Penelitian
Ekstraksi Metabolit Sekunder S. cristaefolium
Alga coklat S. cristaefolium yang digunakan
dalam penelitian ini berasal dari perairan Sumenep
Fahri, M. (2010) 2
Madura, yang telah dikeringkan dengan kadar air
sekitar 10-20 %. Sampel dalam bentuk serbuk halus
kering digunakan untuk diekstraksi.
Ekstraksi senyawa bioaktif dari S. cristaefolium
menggunakan metode maserasi bertingkat.
Sebanyak 500 gram sampel diekstraksi
menggunakan pelarut dengan kepolaran berbeda.
Pelarut non polar kloroform sebanyak 1 liter (1000 ml)
selama 24 jam pertama kemudian disaring. Maserasi
dengan pelarut kloroform ini sebanyak 3 kali. Setelah
itu ampas dikeringkan hingga terbebas dari pelarut
kloroform dan dimaserasi kembali selama 24 jam
menggunakan pelarut semi polar aseton sebanyak 1
liter (1000 ml) kemudian disaring. Maserasi dengan
pelarut aseton ini sebanyak 2 kali. Setelah itu ampas
kembali dikeringkan sampai terbebas dari pelarutnya.
Selanjutnya dimaserasi kembali dengan pelarut polar
yaitu metanol sebanyak 1 liter (1000 ml) selama 24
jam kemudian disaring. Maserasi dengan pelarut
metanol ini sebanyak 2 kali. Ketiga ekstrak yang
diperoleh dipekatkan dengan rotary vacum
0
evaporator pada suhu 60 C sampai diperoleh ekstrak
pekat kloroform, aseton, dan metanol. Asumsi
perbandingan pelarut kloroform, aseton, dan metanol
dengan sampel secara berturut-turut sebanyak 6:1,
4:1 dan 4:1.
Ketiga ekstrak pekat yang diperoleh selanjutnya
diuji toksisitasnya dengan mengunakan larva udang
Artemia salina L.
Uji Toksisitas Ekstrak Metode BSLT
. Media penetasan berupa air laut buatan dengan
melarutkan garam dapur sebanyak 38 gram dalam
1000 ml air tawar sehingga salinitas air berkisar 32-
35 ppm. Salinitas ini sesuai dengan salinitas habitat
hidup alami dari A. salina L. Media penetasan ini
ditempatkan dengan pencahayaan yang cukup.
Wadah penetasan A. salina L menggunakan botol
plastik transparan ukuran volume 1500 ml yang
dimodifikasi dengan perlengkapan aerasi kuat
Sebanyak 1 gram kista A. salina L dimasukan
dalam media 1500 ml air laut buatan dengan
pemberian aerasi yang cukup. Suhu penetasan
0
adalah ± 25-30 C dan pH ± 6-7. Telur akan menetas
setelah 18-24 jam dan larvanya disebut nauplii.
Nauplii siap untuk uji BSLT setelah larva ini berumur
48 jam (Subyakto, 2003).
Konsentrasi masing-masing sampel dibuat 5
konsentrasi berbeda yaitu 6,25 μg/mL, 12,5 μg/mL,
25 μg/mL, 50 μg/mL, dan 100 μg/mL dan masing-
masing dengan kontrol (0 μg/mL). Ekstrak pekat
kloroform, aseton dan metanol ditimbang sebanyak
50 mg dan dilarutkan dengan menggunakan 5 ml
pelarutnya masing-masing. Selanjutnya, larutan
dipipet masing-masing sebanyak 500 μL, 250 μL, 125
μL, 62,5 μL, dan 31,25 μL, kemudian dimasukkan ke
dalam botol vial, pelarutnya diuapkan selama 24 jam.
Masing-masing vial dimasukkan 2 mL air laut, 10 μL
dimetil sulfoksida (DMSO) sebagai emulsigator, 10
ekor larva udang, dan setetes larutan ragi roti,
kemudian ditambahkan air laut sampai volumenya
menjadi 5 mL, sehingga konsentrasi masing-masing
menjadi 100, 50, 25, 12,5 dan 6,25 ppm.
Pada control dimasukkan 2 mL air laut dalam
botol vial, 10 μL dimetil sulfoksida, 10 ekor larva A.
salina L dan setetes larutan ragi roti, kemudian
ditambahkan air laut sampai volumenya menjadi 5
mL. Pengamatan Uji Toksisitas ini untuk mengetahui
nilai Lethal Concentration 50 (LC50) dengan
menghitung jumlah larva A. salina yang mati setelah
perlakuan dengan pemberian ekstrak senyawa
dengan konsentrasi berbeda dari S. cristaefolium
setelah 24 jam dari perlakuan.
Analisis Hasil Uji Toksisitas
Efek toksisitas dianalisis dari pengamatan
dengan persen kematian dengan rumus perhitungan
sebagai berikut ini :
Jumlah Larva Yang Mati
% Larva = X 100 %
Jumlah Larva Uji
Dengan mengetahui kematian larva A. salina,
kemudian dicari angka probit dan dibuat persamaan
garis :
Y = Bx + A
dimana :
Y = Log konsentrasi
X = Angka probit
Dari persamaan tersebut kemudian dihitung LC50
dengan memasukkan nilai probit (50 % kematian).
Apabila pada kontrol ada larva yang mati, maka %
kematian ditentukan dengan rumus Abbot (Meyer et
al., 1982).
T–K
% Kematian Larva = X 100 %
10
Dimana :
T = Jumlah larva uji yang mati
K = Jumlah larva kontrol yang mati
10 = Jumlah larva uji
Uji Fitokimia Metabolit Sekunder
a. Pemeriksaan Falvonoid, Fenolik dan Saponin.
- Flavonoid, ekstrak air (aqueous extract) ditetesi
larutan amoniak encer dan ditetesi asam sulfat
pekat. Terbentuknya warna kuning
mengindikasikan adanya flavonoid. Cara lain
dengan menambahkan HCl pekat dan beberapa
butir serbuk magnesium ke dalam ekstrak air.
Pewarnaan oranye sampai merah
mengindikasikan adanya flavonoid.
- Fenolik, ekstrak dalam tabung reaksi ditetesi
larutan FeCl3. Pewarnaan biru atau biru keunguan
menunjukkan positif fenolik.
- Saponin, ekstrak dalam tabung reaksi dikocok
kuat, pembentukan busa permanen (sekitar 15
menit) dan tidak hilang dengan penambahan 1
tetes HCl pekat menunjukkan positif adanya
saponin.
b. Pemeriksaan Alkaloid (Maldoni, 1991)
Penambahan larutan kloroform-amoniak 0,05 N
pada ekstrak kloroform dalam tabung reaksi
kemudian ditambahkan H2SO4 2 N (10-20 tetes).
Pemberian pereaksi Meyer (1-2 tetes) dan pereaksi
Dragendorff (1-2- tetes). Uji positif alkaloid ditandai
dengan adanya endapan putih yang relatif banyak
Fahri, M. (2010) 3
(+4), kabut putih tebal (+3), kabut tipis (+2) dan kabut
putih tipis (+1) untuk uji pereaksi Meyer dan pereaksi
Dragendorff menunjukkan adanya endapan jingga
sampai merah coklat.
c. Pemeriksaan Terpenoid/Streoid (Libermann-
Burchard : AC2O/H2SO4)
Pemberian anhidrida asam asetat (AC2O)
sebanyak 1-2 tetes dalam ekstrak kloroform dan
sebagai pembanding menggunakan H2SO4 pekat (1-2
tetes). Perubahan warna menjadi merah atau merah
keunguan mengindikasikan terpenoid dan hijau atau
hijau kebiruan untuk streoid.
Uji terpenoid (Salkowski Test) dengan pemberian
H2SO4 pekat pada ekstrak kloroform sehingga
terbentuk 2 lapisan fasa cair. Terbentuknya warna
coklat kemerahan pada antar muka lapisan
menunjukkan adanya terpenoid.
Isolasi Senyawa Bioaktif Flavonoid
KLT Kualitatif
Kromatografi Lapis Tipis (KLT) menggunakan plat
silika gel F254 dengan ukuran 2 X 10 cm. Ekstrak
pekat S. cristaefolium ditotolkan pada plat silika jarak
1 cm dari bagian bawah dengan pipa kapiler.
Selanjutnya, dikeringkan dan dielusi dalam larutan
eluen yang dipersiapkan sesuai dengan tujuan
senyawa apa yang akan diisolasi. Larutan eluen
ditempatkan pada bejana kaca dengan bagian tutup
yang lebar. Selama perendaman bejana ditutup agar
media jenuh dengan larutan eluen. Ekstrak akan
ditarik ke atas oleh eluen sampai jarak 1 cm dari
bagian atas plat. Plat selanjutnya dikeringkan.
Pengamatan warna yang muncul dibawah penyinaran
sinar ultra violet dengan panjang gelombang 256-366
nm. Plat disemprot dengan dengan pelarut dari
campuran vanili 0,25 ml dan etanol 25 ml kemudian
disemprotkan dengan H2SO4 untuk memperkuat
penampakan warna yang muncul pada plat. Untuk
mengetahui nilai RF dengan mengukur jarak antara
titik awal dengan pusat bercak yang dihasilkan
senyawa dan dibagi dengan jarak antara titik awal
dan garis depan (jarak yang ditempuh oleh
pengembang). Eluen yang memberikan hasil terbaik
akan digunakan dalam pemisahan dengan KLT
preparatif.
memastikan kemurnian dari isolat maka dilakukan
analisis dengan menggunakan metode HPLC analitik
dengan komposisi gradien (eluen) metanol-air ada
kolom fase terbalik (reversed phase) C-18 (RP-18)
dan detektor Photo Dioda Array untuk merunut
keberadaan senyawa utama. Kemudian dilakukan
isolasi senyawa utama dengan HPLC preparatif,
Pada penggunaan HPLC preparatif, dibuat gradien
seoptimal dan sesingkat mungkin dengan cara
mengubah atau mengganti konsentrasi eluen.
Selanjutnya, setelah didapatkan senyawa utama,
dilakukan penentuan struktur dengan metode
spektroskopis.
Identifikasi Senyawa Bioaktif Flavonoid
Spektrofotometri UV-vis
Isolat hasil KLT dimasukkan ke dalam kuvet dan
diamati spektrumnya pada panjang gelombang 200-
600 nm. Identifikasi dilanjutkan dengan penambahan
pereaksi geser NaOH 2 M. AICl3 5 %, NaOAc, H3BO3,
kemudian diamati pergeseran puncak serapannya.
Tahapan prosedur penggunaan pereaksi geser
sebagai berikut :
1. Isolat yang diduga sebagai senyawa utama
diamati pada panjang gelombang 200-600 nm,
direkam dan dicatat hasilnya.
2. Isolat dari tahap 1 ditambahkan 3 tetes NaOH 2
M kemudian dikocok sehingga homogen dan
diamati hasilnya.
3. Isolat tahap 1 ditambahkan 6 tetes pereaksi AICl 3
5 % dalam metanol kemudian dicampur hingga
homogen dan diamati hasilnya.
4. Isolat tahap 1 ditambahkan serbuk NaOAc kira-
kira 250 mg, campuran dikocok sampai homogen
dan diamati spektrumnya, selanjutnya
ditambahkan serbuk H3BO3 kira-kira 150 mg
dikocok sampai homogen dan diamati
spektrumnya.
Spektrometri Infrared
Isolat hasil KLT preparatif yang menunjukkan
adanya senyawa utama berdasarkan identifikasi
dengan spetrofotometri UV-vis diuapkan pelarutnya.
Isolat pekat diteteskan pada pelet KBr, dikeringkan
kemudian dibuat spektrumnya.

KLT Preparatif HASIL DAN PEMBAHASAN

Pemisahan dengan KLT preparatif menggunakan
plat silika gel F254 dengan ukuran 10 X 20 cm. Ekstrak Ekstraksi
pekat hasil ekstraksi ditotolkan sepanjang plat pada Hasil ekstraksi S. cristaefolium selengkapnya
jarak 1 cm dari garis bawah dan 1 cm dari garis tepi. disajikan dalam Tabel 1, sebagai berikut :
Selanjutnya dielusi dengan menggunakan eluen yang
memberikan hasil pemisahan terbaik pada KLT Tabel 1. Hasil Ekstraksi S. cristaefolium.
kualitatif. Noda yang diperoleh dikerok dan dilarutkan No Jumlah Pelarut Jumlah Lama Ekstrak Ekstrak
dengan metanol. Kemudian disentrifuge untuk Serbuk Pelarut Maserasi Kasar Pekat
(gram) (ml) (jam) (ml) (mg)
mengendapkan silikanya. Supernatan yang diperoleh
1 500 Kloroform 3000 3 x 24 1838 53
dipekatkan sehingga diperoleh isolat berdasarkan
2 500 Aseton 2000 2 x 24 1169 34
harga RF-nya. 3 500 Metanol 2000 2 x 24 1247 14

Analisa HPLC kualitatif Ekstrak pekat yang diperoleh digunakan dalam uji
Uji HPLC kualitatif dilakukan untuk mengetahui toksisitas dengan metode BSL) menggunakan larva
komposisi kandungan senyawa yang terkandung A. salina umur 48-72 jam untuk mengetahui
dalam ekstrak Sargassum cristaefolium. Untuk kemampuan aktifitas senyawa dalam ekstrak. Dari uji

Fahri, M. (2010) 4
toksisitas dapat diketahui ekstrak yang aktif untuk
dilanjutkan ke tahap isolasi dan identifikasi senyawa.
Uji Toksisitas
Hasil pengamatan mortalitas A. salina dalam uji
toksisitas dengan metode BSLT diperoleh persentase
mortalitas hewan uji dari masing-masing konsentrasi
ekstrak yang diujikan. Berdasarkan data tersebut
dilakukan perhitungan dan analisa probit dengan
program SPSS13 untuk mencari nilai LC50 dari
masing-masing ekstrak yang diujikan. Hasil
perhitungan analisa probit ekstrak kloroform, aseton
dan metanol dari S. cristaefolium disajikan pada
Tabel 2 berikut :
Tabel 2. Hasil perhitungan uji BSLT ekstrak
kloroform, aseton dan metanol dari S.
cristaefolium
Dosis Ekstrak Mortalitas Persamaan Garis
(ppm) (%)
Kloroform
mortalitas 70 persen, konsentrasi 25 ppm sebesar 80
persen, pada konsentrasi 50 ppm sebesar 82 persen
dan 80 persen pada konsentrasi 100 ppm.
Penurunan mortalitas dengan semakin meningkatnya
konsentrasi ini diduga karena ekstrak kasar masih
banyak mengandung senyawa yang bekerja saling
kontraproduktif satu sama lainnya. Nilai LC 50 ekstrak
kloroform dari hasil analisa probit dengan selang
kepercayaan p = 0.00 adalah 1.88 ppm yang berarti
mortalitas hewan uji mencapai 50% pada saat
konsentrasi ekstrak senyawa mencapai 1.88 ppm.
Nilai LC50 ini termasuk dalam kategori sangat toksik
karena nilai LC50-nya dibawah 30 ppm.
Hubungan antara persentase mortalitas dengan
konsentrasi ekstrak aseton disajikan pada Gambar 2
berikut ini.
100
95 96
LC50 92
90 90 90
(µg/mL) 88
85

% Mortality
6.25 72 80
y = 0.067x + 88.58
12.5 70 Y=0.093x+73.16 1.88 75
R² = 0.720
25 80 R2=0.437 70
50 82 65
100 80
60
Aseton
6.25 90 55
12.5 88 Y=0.067x+88.58 3.97 50
25 92 R2=0.720
0 6 12 18 24 30 36 42 48 54 60 66 72 78 84 90 96 102
50 90 Dosis (µg/mL)
100 96
Metanol
6.25 80 Gambar 2. Hubungan persentase mortalitas dengan
12.5 84 Y=0.099x+83.75 3.02 konsentrasi dosis ekstrak aseton dari S
25 92 R2=0.498 cristaefolium.
50 90 Berdasarkan nilai LC50 hasil analisa probit
100 92
Ket : P = 0.00 dengan SPSS13
dengan selang kepercayaan p = 0.00 pada ekstrak
aseton yaitu sebesar 3,97 ppm menunjukkan bahwa
Dari data persentase mortalitas larva A. salina angka mortalitas hewan uji mencapai 50% pada saat
pada ekstrak kloroform tersebut, dapat dibuat grafik konsentrasi ekstrak senyawa mencapai 3,97 ppm.
yang menunjukkan hubungan antara persentase Berdasarkan nilai LC50 maka ekstrak aseton
mortalitas dengan konsentrasi (dosis) ekstrak yang termasuk dalam kategori sangat toksik karena berada
larut dalam kloroform seperti pada grafik Gambar 1 dibawah 30 ppm (Meyer et. al, 1982).
berikut ini : Grafik hubungan antara persentase kematian
dengan konsentrasi dosis ekstrak metanol disajikan
pada Gambar 3 berikut ini.
100
y = 0.093x + 73.16
95
90 R² = 0.437 100
85 95
82
% Mortality

80 80 80 92 92
90 90
75
70 72 70 85
84
% Mortalitas

65 80 80 y = 0.099x + 83.75
60 75 R² = 0.498
55 70
50 65
0 6 12 18 24 30 36 42 48 54 60 66 72 78 84 90 96 102 60
Dosis (µg/mL
55
50
Gambar 1. Hubungan persentase mortalitas dengan
0 6 12 18 24 30 36 42 48 54 60 66 72 78 84 90 96 102
konsentrasi ekstrak kloroform dari S Dosis (µg/mL)
cristaefolium.
Gambar 3. Hubungan persentase mortalitas dengan
Grafik diatas menujukkan bahwa konsentrasi konsentrasi ekstrak metanol dari S.
dosis ekstrak kloroform pada 6,25 ppm mortalitas cristaefolium.
mencapai 72 persen. Pada dosis 12,5 ppm

Fahri, M. (2010) 5
 Hasil analisa probit dengan selang kepercayaan
p = 0.00 diperoleh nilai LC50 dari ekstrak metanol
yaitu sebesar 3.02 ppm. Ini berarti bahwa mortalitas
hewan uji sebesar 50 persen dicapai pada saat
konsentrasi dosis ekstrak metanol sebsar 3.02 ppm.
Berdasar pada nilai LC50 ini maka ekstrak metanol
dikategorikan sebagai sangat toksik.
Dari hasil analisa data uji toksisitas ini,
memperlihatkan bahwa semakin besar nilai
konsentrasi dosis ekstrak, maka mortalitas larva A.
salina juga semakin besar. Hal ini sejalan dengan
Harbone (1994), bahwa semakin tinggi konsentrasi
ekstrak maka sifat toksiknya juga semakin tinggi.
Kematian larva uji pada kontrol (0 ppm) disebabkan
oleh kematian alami. Sedangkan kematian pada
perlakuan pemberian ekstrak disebabkan oleh
pengaruh sifat toksik dari ekstrak yang terlarut dalam
media hidup larva tersebut.
Menurut Meyer et. al, (1982) tingkat toksisitas
dari ekstrak tanaman dapat ditentukan dengan
melihat harga LC50-nya. Suatu ekstrak dianggap
sangat toksik bila memiliki nilai LC50 di bawah 30
ppm, dianggap toksik bila nilai LC50 30-1000 ppm dan
dianggap tidak toksik bila nilai LC50 di atas 1000 ppm.
Semakin kecil harga LC50 semakin toksik suatu
senyawa.
Lebih jauh, Meyer (1982) dan Anderson (1991)
menjelaskan bahwa aktifitas ketoksikan suatu ekstrak
dalam BSLT jika ekstrak dapat menyebabkan
kematian 50% larva uji pada konsentrasi kurang dari
1000 ppm. Dengan demikian, berdasarkan nilai LC50
yang diperoleh dari ketiga ekstrak yang diujikan maka
dinyatakan bersifat sangat toksik karena memiliki nilai
LC50 dibawah 30 ppm..
Ekstrak yang paling toksik dapat dilihat dari
kemampuan menyebabkan kematian hewan uji yang
lebih besar dengan konsentrasi lebih kecil. Hal ini
menunjukkan bahwa secara berturut-turut ekstrak
paling toksik berdasarkan nilai LC50 adalah ekstrak
kloroform dengan nilai 1,88 ppm, ekstrak metanol
dengan nilai 3,02 ppm dan ekstrak aseton dengan
nilai 3,97 ppm.
Isolasi Senyawa Flavonoid
Uji Golongan Senyawa
Uji golongan fitokimia senyawa dari ekstrak kasar
S. cristaefolium sebagai uji pendahuluan dan
panduan dasar keberadaan senyawa bioaktif
flavonoid dalam rangka isolasi. Hasil uji golongan
mengandung senyawa golongan flavonoid, alkaloid,
steroid dan terpenoid. Secara ringkas, hasil uji
golongan ekstrak dapat dilihat pada Tabel 3 sebagai
berikut :
Tabel 3. Hasil Uji Golongan Senyawa Ekstrak Kasar
S. cristaefolium.
Ekstrak Pereaksi Hasil / Warna Dugaan
Kloroform H2SO4 Orangye/Kuning Flavon, Flavonoid
Tua
Meyer Endapan Putih Alkaloid
Dragendorff Endapan Alkaloid
Oranye
Salkowski Endapan Terpenoid, Steroid
Merah/Oranye
Aseton H2SO4 Tidak Ada Negatif Flavon,
Endapan Flavonoid
Meyer Tidak Ada Negatif Alkaloid
Endapan
Dragendorff Tidak Ada Negatif Alkaloid
Endapan
Salkowski Tidak Ada Negatif Terpenoid
Endapan
Metanol H2SO4 Endapan Terpenoid, Steroid
Oranye
Meyer Endapan Putih Alkaloid
Dragendorff Endapan Alkaloid
Oranye
Salkowski Endapan Flavon, Flavonoid
Merah/Oranye
Hasil uji golongan (fitokimia) yang dilakukan,
menunjukkan bahwa senyawa metabolit sekunder
yang terdapat pada ekstrak S. cristaefolium
mengandung senyawa flavonoid. Harbone (1987)
menjelaskan bahwa pada uji fitokimia terhadap
senyawa golongan flavonoid akan menunjukkan hasil
positif dengan terjadinya perubahan warna berupa
warna kuning kemerahan (oranye). Hal ini dibuktikan
dengan pembentukan warna yang terbentuk yaitu
warna kuning kemerahan (oranye).
Kromatografi Lapis Tipis
Berdasarkan hasil uji toksisitas diketahui bahwa
ekstrak metanol merupakan ekstrak yang mempuyai
aktifitas yang sangat aktif (sangat toksik) dengan nilai
LC50 sebesar 3,02 ppm. Pada uji golongan ekstrak
metanol juga mengandung beberapa senyawa
diantaranya flavonoid, flavon, alkaloid, terpenoid dan
steroid. Pelarut metanol merupakan pelarut yang
bersifat polar. Pelarut polar memiliki kemampuan
yang lebih baik dalam melarutkan senyawa organik
dari bahan alam terutama senyawa fenol dan
flavonoid. (Harbone, 1987).
Dengan demikian, uji tahap lanjut untuk
mengisolasi dan mengidentifikasi senyawa flavonoid
yang terdapat dalam ekstrak yang aktif dilakukan
pada ekstrak metanol dari S. cristaefolium. Ekstrak
metanol dilanjutkan ke tahap pemisahan dan
pemurnian selanjutnya dengan Kromatografi Lapis
Tipis (KLT) kualitatif dan preparatif.
Analisa pemisahan senyawa dari ekstrak metanol
dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) kualitatif
menggunakan beberapa eluen. Penggunaan
berbagai macam komposisi dan eluen ini
dimaksudkan mampu untuk memisahkan senyawa
flavonoid yang terkandung dalam S. cristaefolium.
Hasil KLT kualitatif berupa pola pemisahan pada
kromatogram dari berbagai eluen yang digunakan.
Berdasarkan pola kromatogram yang terbentuk pada
plat silika gel dapat ditentukan resolusi senyawa
flavonoid dan jenis flavonoid yang terdapat dalam
ekstrak. Markham (1988), bahwa eluen yang
digunakan untuk memisahkan komponen dari bahan
alam yang diduga mengandung senyawa flavonoid
adalah n-butanol : asam asetat : air (BAA) dengan
komposisi (4:1:5), dan metanol : kloroform (7:3).
Eluen yang digunakan pada KLT kualitatif ini
adalah n-butanol : asam asetat : air (BAA) dengan
komposisi (4:1:5), metanol : kloroform (7:3), asam
asetat : benzene (2:8), etil asetat : n-heksan (7:5) dan
Fahri, M. (2010) 6
toluen : eter : asam asetat (10:10:2). Hasil KLT Data hasil analisa HPLC kualitatif terhadap
kualitatif dengan beberapa eluen tersebut disajikan ekstrak metanol S. cristaefolium menunjukkan bahwa
dalam Table 4. puncak utama senyawa yang terdapat dalam ekstrak
metanol berada pada puncak kedua dengan waktu
Tabel 4. Hasil KLT kualitatif beberapa eluen dari retensi (waktu hambat/tambat) 20.03 menit serta area
ekstrak metanol S. cristaefolium. persentase senyawa sebesar 38.505 %. Puncak ini
No Eluen Komposisi Hasil pada KLT kualitatif mempunyai nilai Rf 0.88 cm dan
1 n-butanol : asam 4:1:5 Senyawa tidak menunjukkan warna oranye keungunan menyala
asetat : air (BAA) memisah, warna
ungu kekuningan pada sinar UV 366 nm. Sedangkan puncak yang juga
2 metanol : kloroform 7:3 Senyawa terpecah, menunjukkan warna oranye menyala pada sinar UV
tidak memisah, 366 nm hasil KLT kualitatif dengan nilai Rf 0.77
warna seragam ditunjukkan oleh puncak keempat pada hasil HPLC
3 asam asetat : 2:8 Senyawa bergerak
benzene lurus, tidak memisah,
dengan waktu retensinya 29.92 menit dan area
warna seragam persentase senyawa sebesar 7.757 %.
4 etil asetat : n- 7:5 Noda 3 berhimpitan,
heksan warna ungu, biru Identifikasi Senyawa Flavonoid
muda dan ungu
muda
Identifikasi Pendahuluan
5 toluen : eter : asam 10:10:2 9 Noda, warna Identifikasi pendahuluan terhadap warna
asetat oranye, coklat, kromatogram pada plat silika gel hasil KLT kualitatif
kuning kehijauan, berdasarkan penampakan warna kromatogram yang
terbentuk. Penampakan warna diamati dengan sinar
Hasil pemisahan secara KLT kualitatif UV pada panjang gelombang 254 nm dan 366 nm
menunjukkan bahwa eluen yang memberikan hasil baik sebelum maupun sesudah disemprot dengan
terbaik adalah toluen : eter : asam asetat (10:10:2) pelarut berflourenses (larutan vanila 5% dalam etanol
mampu memberikan resolusi terbaik, terlihat dari dan H2SO4). Warna kromatogram dari masing-masing
terbentuknya noda yang terpisah dan jumlah noda noda yang terbentuk hasil KLT kualitatif disajikan
yang paling banyak yaitu 9 noda. Campuran eluen dalam Tabel 5.
lain yang menghasilkan noda adalah etil asetat : n-
heksan (7:5) tetapi tidak mampu memisah dengan Tabel 5. Harga RF dan warna noda kromatogram
baik noda yang masih berhimpitan dan jumlah noda hasil KLT kualitatif dengan eluen toluen :
hanya 3 noda. Sedangkan eluen lainnya tidak dapat eter : asam asetat (10:10:2).
memisahkan senyawa yang terlihat dari gerak Noda RF Warna Noda/Hasil
senyawa yang membentuk garis lurus. Dengan Tampa Sinar UV Vanila 5% dalam
demikian, eluen terbaik yang digunakan dalam UV + etanol+Sinar UV
Semprot 254 nm 366 nm 254 nm 366 nm
pemisahan senyawa flavonoid pada analisa 1 0.94 Hijau Coklat Coklat - Coklat
Kromatografi Lapis Tipis (KLT) preparatif adalah muda muda muda
eluen campuran toluen : eter : asam asetat (10:10:2). 2 0.88 Hijau biru Coklat Oranye Biru Oranye
Hasil pemisahan dengan Kromatografi Lapis Tipis muda muda muda terang
(KLT) preparatif hampir sama dengan KLT kualitatif 3 0.83 - - Putih - Coklat
muda
hanya berbeda pada kuantitas ekstrak lebih banyak 4 0.77 Hijau - Coklat Biru Oranye
yang digunakan. Penggunaan plat silika gel dengan kuning oranye muda ungu
ukuran yang besar dan lebih banyak. Noda-noda 5 0.72 Hijau biru Coklat Ungu - -
yang dihasilkan pada KLT preparatif ditandai muda muda
6 0.66 Coklat Coklat Coklat Coklat Ungu
selanjutnya dikerok dan dilarutkan pada pelarut
muda muda muda
metanol. Isolat yang diperoleh tersebut kemudian 7 0.61 Ungu - Coklat - Ungu
diidentifikasi dengan spektrofotometri UV-visual dan muda muda muda
Inframerah (FT-IR). 8 0.55 Oranye Coklat Coklat Biru Biru
kuning muda hitam
9 0.44 Hijau Coklat Coklat Coklat Coklat
HPLC kuning biru biru
Hasil analisa HPLC kualitatif terhadap ekstrak
metanol S. cristaefolium disajikan dalam gambar 4 Berdasarkan Tabel 5 tersebut, penampakan
sebagai berikut. warna kromatogram noda 2 dengan Rf 0,88 cm
tampak hijau kebiruan, pada sinar UV 254 nm
sebelum disemprot dengan pelarut berflourensens
(vanila 5 % dalam etanol dan H2SO4) tampak coklat
muda dan tampak oranye pada sinar UV 366 nm.
Untuk noda 4 dengan Rf 0,77 cm berwarna hijau
kekuningan. Sebelum disemprot tidak tampak pada
UV 254 nm dan terlihat coklat oranye pada UV 366
nm. Pada sinar UV 254 nm setelah disemprot tampak
biru muda dan oranye keunguan pada sinar Uv 366
Gambar 4. Hasil HPLC ekstrak metanol S.cristaefolium. nm.

Fahri, M. (2010) 7
 Dari 9 noda tersebut, noda ke 2 dan ke 4 Markham (1988), sistem hidroksilasi pada flavon
memperlihatkan warna oranye terang keunguan ditunjukkan dengan pemunculan puncak yang
(lembayung) pada UV 366 nm setelah disemprot kadang-kadang berupa bahu pada spektrum pita I.
maka dapat diduga pada kedua noda tersebut Spektrum UV-vis isolat ekstrak metanol S.
terdapat senyawa flavonoid golongan flavon, cristaefolium yang disolasi disajikan dalam Gambar 5
isoflavon, flavonol, dihidroflavonol atau flavanon dan 6.
(Markham, 1998).
Kedua noda senyawa ini (2 dan 4) dilakukan
isolasi dengan kromatografi lapis tipis (KLT)
preparatif karena warna oranye menyala pada
gelombang UV 366 nm setelah disemprot dengan
larutan berflourensens vanila 5 % dalam etanol dan
H2SO4 pekat mengindikasikan keberadaan
kandungan senyawa flavonoid. Markham (1988),
vanila 5 % dalam etanol dan H2SO4 pekat
perbandingan 4:1 akan menimbulkan bercak merah Gambar 5. Spektrum UV Isolat Noda ke 2 Rf 0,88
atau merah lembayung segera setelah penyemprotan cm.
dan pemanasan (dengan pengering rambut) oleh
katekin dan proantosiniadin. Bila bercak terbentuk
lebih lambat disebabkan oleh flavanon dan
dihidroflavonol. Pereaksi bereaksi dengan semua
flavonoid yang mempunyai pola oksidasi lingkar-A
floroglusinol dan lingkar-C jenuh.

Spektrofotometri Ultra Violet Cahaya Tampak (UV-

vis)
Identifikasi senyawa flavonoid dengan
spektrofotometri UV-visual ini berdasarkan pada Gambar 6. Spektrum UV Isolat Noda ke 4 Rf 0,77
serapan cahaya oleh molekul dalam daerah cm.
ultraviolet dan tampak tergantung dari transisi Dari spektrum UV-vis setelah penambahan
elektroniknya. Markham (1988), Spektrofotometri pereaksi geser NaOH, AlCl3, NaOAc, dan campuran
serapan Ultra Violet dan serapan Tampak (UV-vis) NaOAc dan H3BO3 terhadap isolat memberikan pola
barangkali merupakan cara tunggal yang paling pergeseran yang berbeda-beda. Hasil pergeseran
berguna untuk menganalisis struktur flavonoid. spektrum UV dari isolat noda 2 dan 4 dengan adanya
Analisis dengan spektrofotometri UV-vis berguna pereaksi geser disajikan dalam Lampiran 7 dan Tabel
dalam mengidentifkasi jenis golongan senyawa 6.
flavonoid dan menentukan pola oksigenasinya. Tabel 6. Pergeseran rentang panjang gelombang
Kedudukan gugus hidroksil fenol bebas pada inti puncak spektrum UV-vis Isolat 4 dengan
flavonoid dapat ditentukan dengan menambah adanya pereaksi geser.
pereaksi geser ke dalam larutan cuplikan dan Pereaksi Geser Pita I Pita II Pergeseran Pergeseran Dugaan
(nm) (nm) Pita I Pita II Substitusi
mengamati puncak serapan yang terjadi. (nm) (nm)
Senyawa flavonoid mengandung cincin aromatik MeOH 300-550 240-285
yang tersusun dari 15 atom karbon dengan inti dasar MeOH+NaOH 300-550 240-285 +5 7-OH
MeOH+AICl3 300-550 240-285 tetap 5-OH
tersusun dalam konjungasi C6-C3-C6 (dua inti MeOH+NaOAc 300-550 240-285 kekuatan 6,7 –di OH
aromatik dihubungkan dengan atom karbon). Pita menurun
MeOH+NaOAc 300-550 240-285 +8
spektrumnya dapat terserap kuat pada panjang +H3BO3
gelombang UV disebabkan oleh keberadaan dari
cincin aromatik tersebut. Profil pita yang memberikan Berdasarkan Markham (1988) dapat diamati
spektrum UV khas flavonoid dapat diidentifikasi lebih bahwa pola grafik hidroksilasi isolat noda 4 yang
lanjut dengan pereaksi geser. Pereaksi geser ini diisolasi tersebut mengarah pada flavanon
untuk menentukan kedudukan gula dan gugus (naringenin) atau dihidroflavonol. Hal ini secara jelas
hidroksil fenol pada inti flavonoid dengan cara dapat diamati dari adanya pola dua puncak utama
mengamati pergeseran puncak (peak) serapan yang dari isolat noda ke 4 ini. Rentang serapan spektrum
terjadi. utama UV-visual flavonoid untuk flavanon dan
Pereaksi geser yang digunakan adalah NaOH, dihidroflavonol berada ada 275-295 nm pada pita II.
AlCl3, NaOAc, dan campuran NaOAc dan H3BO3. Rentang serapan spektrum utama UV-visual
Identifikasi dan analisa struktur flavonoid dengan flavonoid ini sesuai dengan spektrum yang muncul
spektrum UV dilakukan terhadap isolat noda oranye pada serapan pita II isolat noda 4 yaitu 280 nm.
yaitu noda 2 dan 4. Melihat perubahan spektrum dengan pereaksi
Menurut Markham (1988) dan Mabry (1970), geser pada isolat noda ke 4 dengan Rf 0,77 cm
spektrum khas flavonoid terdiri dari dua pita yaitu (Tabel 8) dengan didukung oleh pustaka (Markham,
pada rentang panjang gelombang 240-295 nm (pita 1998; Mabry, 1970) maka dapat dijelaskan bahwa
II) dan 300-350 nm (pita I). Lebih lanjut, menurut dengan adanya pereaksi geser NaOH terjadi

Fahri, M. (2010) 8
pergeseran pita II sebesar 5 nm ke kanan mengarah
pada substitusi posisi 7-OH. Penambahan pereksi ‘3 CH3
geser AICl3 tidak terjadi pergeseran pada pita I (tetap) ‘2 ‘4
mengarah pada substitusi posisi 5-OH. Penambahan 1
B
pereaksi geser NaOAc (asam asetat) menurunkan HO 8 O ‘5
7 9 2 ‘1
kekuatan pita II yang mengarah pada substitusi posisi
‘6
6,7 atau 7,8 atau 3, 4’-di OH (gugus yang peka A C
6
terhadap basa). Pada pita I dengan pereaksi geser 3
HO 10
AICl3 ini mengalami pergeseran sebesar 7 nm 5 4
mengarah ada 7-OH. Sedangkan penambahan
NaOAc dan H3BO3 (asam borat) terjadi pergeseran OH O
pita I ke kanan sebesar 8 nm yang mengarah pada
substitusi o-di OH pada cincin A (6,7). Pergeseran 8
nm ini hanya menambah 1 nm dari pergeseran oleh Pita II (Cincin A) Pita I (Cincin B dan C)
NaOAc yang berarti tidak signifikan atau tetap (tidak
ada pergeseran). Hal ini membuktikan bahwa pada Gambar 7. Dugaan Struktur Senyawa 5,6,7,-
cincin B terjadi proses metilasi atau glikolisasi yang dihidroflavonol yang diperoleh.
menghambat hidrolisis (ionisasi). Dengan demikian
diduga bahwa isolat yang diisolasi adalah senyawa Untuk isolat noda ke 2 yang diisolasi dengan
flavonoid golongan dihidroflavonol yakni 5,6,7- melihat serapan panjang gelombang dari adanya
dihidroflavonol. pereaksi geser menunjukkan serapan panjang
Markham (1982), lebih jauh memaparkan bahwa gelombang berada diluar rentang panjang gelombang
spektrum khas jenis flavonoid utama dengan pola dari spektrum khas flavonoid (240-295 nm pita II dan
oksigenasinya yang setara (5,7,4’) adalah kekuatan 300-350 nm pita I) yaitu sebesar 610-660 nm pada
nisbi yang rendah pada pita I dalam dihidroflavon, pita I dan 408 nm pada pita II. Ini dapat diduga bahwa
dihidroflavonol dan isoflavon serta kedudukan pita I isolat noda ke 2 dengan Rf 0,88 cm bukan senyawa
pada spektrum khalkon, auron dan antosianin yang flavonoid yang menjadi senyawa target.
terdapat pada panjang gelombang yang tinggi.
Proses metilasi atau glikosilasi (terutama pada Spektroskopis Infrared (FT-IR)
3,5,7 dan 4’-hidroksil) mengakibatkan pergeseran pita Analisis spektrofotometri inframerah (Fourier
ke panjang gelombang yang lebih rendah. Sifat gula Transform Infrared, FT-IR) bertujuan untuk
pada glikosida biasanya tidak berpengaruh. Proses menentukan gugus fungsional suatu senyawa
metilasi terdeteksi dari pereaksi geser NaOAc yang berdasarkan serapan spektrum elektromagnetik pada
tidak mengakibatkan pergeseran pita serapan daerah IR. Hasil analisis spektrum IR menunjukkan
panjang gelombang pada cincin B diduga disebabkan bahwa isolat yang diisolasi mengandung gugus-
oleh keberadaan CH3 bukan oleh gula. Ini diperkuat gugus fungsional dengan perkiraan gugus fungsional
dengan data Infrared (IR) dimana muncul peak seperti yang ditunjukkan pada Gambar 15 dan Tabel
-1
serapan pada panjang gelombang 1347,19 cm 9.
-1
dimana pada daerah ini merupakan daerah serapan Pita lebar kuat pada puncak 3445,59 cm
khas gugus-gugus metil pada alkohol dan fenol. menunjukkan adanya gugus –OH, puncak 2973,07
-1
Pergeseran ke panjang gelombang yang lebih cm menunjukkan vibrasi ukur C-H asimetris dan
kecil pada pita II dengan NaOAc menunjukkan bahwa vibrasi ulur simetris terdapat pada puncak 2866,02
-1
pada posisi 7 terjadi metilasi atau glikolisasi. cm , yang diperkuat dengan adanya vibrasi tekuk
-1 -1
Pergeseran panjang gelombang 10 nm pada pita I =C-H pada 1457,12 cm dan 1347,19 cm . Hal ini
dengan AICl3 disebabkan karena mengandung gugus sesuai dengan Silverstein et al, (1986), bahwa gugus-
hidroksil pada posisi 5. Pergeseran ke arah gugus metil pada alkohol dan fenol biasanya memiliki
-1
batokromik mengakibatkan perpanjangan delokalisasi getaran tekuk simetrik (δsCH3) didekat 1375 cm
elektron oleh senyawa kompleks. Adanya gugus 5- (7,28 µm), sedangkan getaran tekuk tak-simetrik
-1
OH didukung oleh adanya serapan yang muncul (δαsCH3) di dekat 1450 cm (6,90 µm). Pita-pita khas
pada daerah 1639,38 cm-1 pada spektrum IR yang yang teramati dalam spektrum alkohol dan fenol
merupakan serapan khas flavonol dengan adanya dihasilkan oleh uluran (vibrasi) O-H dan uluran C-O.
gugus 5-OH (Geissman, 1969). (Silverstein, et. al., 1986).
Berdasarkan data analisa spektrum UV-vis dan Vibrasi ulur C=O karbonil ditunjukkan pada
-1
spektrum inframerah maka noda ke 4 (empat) diduga puncak 1639,38 cm menunjukkan adanya pita
merupakan senyawa flavonoid golongan kerangka C=C yang diperkuat adanya vibrasi ulur C-
-1
dihidroflavonol, dengan struktur sebagai berikut : O eter (jembatan O) pada puncak 1054,99 cm .
-1
Sedangkan daerah serapan pada puncak 800 cm
kebawah menunjukkan tekuk C-H keluar bidang yang
berarti adanya benzena tersubstitusi (substitusi cincin
aromatik).

Fahri, M. (2010) 9
 KESIMPULAN DAN SARAN

Kesimpulan
1.
Hasil skrining fitokimia (uji golongan) senyawa
ekstrak metanol S. cristaefolium mengandung
beberapa senyawa diantaranya flavonoid, flavon,
alkaloid, terpenoid dan steroid. Hasil analisis
dengan spektroskopi UV-visual dan spektroskopi
infrared (IR) diduga golongan flavonoid yang
terkandung dalam ekstrak metanol S. cristaefolium
adalah senyawa 5,6,7,-dihidroflavonol yang
diperoleh dari isolat noda ke 4 pada KLT kualitatif
dengan nilai Rf 0,77 cm.
Gambar 8. Spektrum Infrared dari isolat noda ke- 4 2. Hasil uji toksisitas dengan metode Brine Shrimp
Rf 0.77 cm. Lethality Test (BSLT) ekstrak kasar senyawa dari
S. cristaefolium diperoleh nilai LC50 dari masing-
Tabel 7. Hasil analisa spektrum infrared dari isolat masing ekstrak yaitu ekstrak kloroform sebesar 1,
noda 4. 88 ppm yang merupakan ekstrak paling toksik,
Bilangan Rentang diikuti oleh ekstrak metanol dengan nilai sebesar
Gelombang Bilangan Perkiraan Gugus Fungsional 3,20 ppm dan ekstrak aseton sebesar 3,97 ppm.
(cm-1) Gelombang Hal ini menunjukkan bahwa ketiga ekstrak
-1
(cm ) senyawa dari S. cristaefolium mempunyai prospek
3445,59 3000-3750 Ikatan hidrogen antarmolekular,
uluran regang O-H dapat dikembangkan sebagai sumber senyawa
2973,07 2900-3300 Regangan C-H aromatik (asimetris) bioaktif dalam dunia farmasi, misalnya sebagai
2866,02 2700-3000 Regangan C-H metilena (simetris) antitumor atau antikanker.
2075,26 2100-2400 Nada lipat atau pita kombinasi
1639,38 1650-1900 Regangan cincin C=C alifatik / Saran
aromatis
14457,12 1300-1475 Tekukan O-H dalam bidang Disarankan untuk penelitian lebih lanjut
1347,19 Uluran C-H dengan melakukan analisa yang lebih lengkap
1
1109,96 Rentangan C-H terhadap ekstrak S. cristaefolium meliputi H-NMR,
1054,99 1000-13000 Rentangan C-O 13
LCMS, C-NMR untuk dapat menduga struktur
1013,52
senyawa secara lebih tepat terhadap senyawa yang
Tekukan C-H keluar bidang (800
800-kebawah 650-1000 cm-1), tekukan cincin C=H keluar telah diisolasi. Perlu adanya penelitian lebih lanjut
bidang (600 cm-1), ikatan hidrogen terhadap masing-masing ekstrak (kloroform, aseton
lebar, tekukan O-H keluar bidang dan metanol) dengan menggunakan konsentrasi
(650 cm-1) (dosis) dibawah 6,25 ppm terkait dengan potensi dan
prospeknya sebagai sumber senyawa bioaktif bahan
Dari analisis hasil spektroskopis infrared tersebut alam yang memiliki peran dalam dunia farmasi
menunjukkan bahwa senyawa yang diisolasi mengingat sifatnya yang sangat toksik. Selain itu,
kemungkinan mempunyai gugus fungsi –OH, C-H, disarankan untuk melakukan kajian-kajian terhadap
C=O, C-O, =C-H dan C-C (cincin benzena). manfaat alga coklat S. cristaefolium sehingga dapat
Berdasarkan interpretasi data yang diperoleh dari dimanfaatkan secara optimal. S. cristaefolium pada
analisa spektrum UV-vis dan spektrum inframerah saat ini belum dimanfaatkan dengan optimal
(IR) maka dapat disimpulkan bahwa isolat noda ke 4 meskipun jumlahnya sangat melimpah diperairan laut
(empat) dari ekstrak metanol S. cristaefolium yang Indonesia. Pemanfaatan S. cristaefolium dalam
diisolasi diduga merupakan senyawa flavonoid rangka meningkatkan kesejahteraan masyarakat
golongan dihidroflavonol, dengan struktur sebagai secara luas.
berikut :
‘3 CH3
UCAPAN TERIMAKASIH
‘2 ‘4
1
B Penelitian ini merupakan bagian dari payung
HO 8 O ‘5 proyek dari penelitian Prof. Ir. Yenny Risjani, DEA.
7 9 2 ‘1
Ph.D. sekaligus sebagai pembimbing I. Kepada
‘6
A C beliau kami sampaikan ucapan terimakasih yang
6 sebesar-besarnya atas kesempatan yang telah
3
10
HO 5 4
diberikan ikut serta dalam penelitian ini. Ucapan
terimakasih juga kepada Dr. Drs. Sasangka
OH O Prasetyawan, MS selaku pembimbing II atas arahan
selama penelitian.
Gambar 9. Struktur Senyawa 5,6,7,-dihidroflavonol
yang diusulkan.
PUSTAKA

Fahri, M. (2010) 10

1. Anderson DP. 1974. Fish Immunologi. TFH
Publication Ltd Hongkong. 239 p.
2. Anonymous, 2004. Buku Petunjuk Rumput Laut
Ditjen P. Budidaya. Dinas Kelautan dan
Perikanan Republik Indonesia.
3. Bengen, D.G. 2001. Sinopsis Ekosistem dan
Sumberdaya Alam Pesisir dan Laut. Pusat Kajian
Sumberdaya Pesisir dan Lautan Institut Pertanian
Bogor. Bogor . (Khurniasari, 2004).
4. Boney, A. D. 1965. Aspect of the biology of the
seaweeds of economic importance. In : Basic in
Mar. Bot. 3 : 205 – 253.
5. BOYD, J. & TURVEY, J.R. (1978). Structural
studies of alginic acid using a bacterial poly-a-L-
guluronate lyase. Carbohydr. Res., 66: 187 –
194.
6. Cabbalo, J.L., Hernandez-Inda, Z.L., Perez, P.,
Gravalos, M.D. 2002. A Comparison between two
brine shrimp assy to detect in vitro cytotoxicity in
marine natural product (methodology article).
BMC Biotechnology. 2:1-5.
7. Calleja M.C, Persoone G, 1992. Cyst based
toxicity test IV, The potential of ecotoxicological
test for the prediction of acute toxicity in man as
evaluated on the first ten chemicals of the MEIC
programme, ATLA-Altern Lab Animals, 20:396-
405.
8. Cutler, SJ., H. Cutler. Biologically Active Natural
Products: Pharmaceuticals. CRC Press LLC.
Boca Raton. USA 2000;1-13, 17-22, 73-92.
9. Gritten, R.J., J.M. Bobbit, and A.E. Schwarling,
"Pengantar Kromatografi", terjemahan K.
Radmawinata dan I. Soediso, penerbit ITB,
Bandung, 1991, 5-9.
10. Harborne, JB., 1973, Phytochemical Methods:
Chapman and Hall, Ltd., London, pp. 49-188
11. Harborne, JB., et.al., Phytochemical Dictionary: A
Handbook of Bioactive Compounds from Plants,
2nd ed., Taylor & Francis Ltd., London.,
1999;396, 487, 494.
12. Ibnu Gholib Gandjar. Abdul Rohman. 2007. Kimia
Farmasi Analisis. Pustaka Pelajar. Yogyakarta.
13. J.B. Harborne, Metode Fitokimia, Penuntun cara
modern menganalisis tumbuhan, (Terjemahan
Kosasih Padmawinata dan Iwang Soediro),
Penerbit ITB, Bandung, 1987
14. Jadulco, R.C. 2002, Isolation and Structure
Elucidation of Bioactive Secondary Metabolites
from Marine sponges and Sponges-derived
Fungi. Dissertation of Doktorgrades, University of
Wuerzburg. 176p.
15. Ledenberg, J., 1992. Encylopedi of Microbiology,
Volume Academic Press Inc, Rockefller
University, New York
16. Markham. K.R., "Cara Mengindentifikasi
Flavonoid", terjemahan K. Radmawinata,
Penerbit ITB, Bandung, 1988, 1-117. 10.
17. Meyer, B. N., Ferrigni, N. R., Putnam, J. E.,
Jacobson, L. B., Nichols, D. E., and McLaughlin,
J. L. 1982. Brine shrimp: a convenient general
bioassay for active plant constituents. Planta
Medica, 45: 31-34.
18. Parveen Akhtar And Viqar Sultana, 2004,
Biochemical Studies Of Some Seaweed Species
From Karachi Coast, Zoological Survey
Department, Government of Pakistan, Karachi
(PA); Department of Biochemistry, University of
Karachi (VS). Rec. Zool. Surv. Pakistan, 14: 1-4
(2002)
19. Parveen Akhtar And Viqar Sultana, 2004,
Biochemical Studies Of Some Seaweed Species
From Karachi Coast, Zoological Survey
Department, Government of Pakistan, Karachi
(PA); Department of Biochemistry, University of
Karachi (VS). Rec. Zool. Surv. Pakistan, 14: 1-4
(2002)
20. Perez, H., Diaz, F., and Medina, J. D. 1997.
Chemical investigation and in vitro antimalarial
activity of Tabebuia ochracea ssp.
neochrysantha. International Journal of
Pharmacog, 35: 227-231.
21. Rao,-A.S.; Rao,-M.U. 2002. Seasonal growth
pattern in Sargassum polycystum C. Agardh
(Phaeophyta, Fucales) occurring at
Visakhapatnam, east coast of India. Indian
Journal of Marine Sciences [Indian-J-Mar-Sci].
vol. 31, no. 1, pp. 26-32.
22. Robert, M. Silverstein, G. Clayton Bassler,
Terence C. Morril. 1986. Penyidikan
Spektrometrik Senyawa Organik, Penerbit
Erlangga. Jakartan (Terjemahan A. J. Hartomo
dkk).
23. Sovia Lenny. 2006. Senyawa Flavonoida, Fenil
Propanoida, Alkaloida. USU Repository
24. Stahl, E., "Analisis Obat Secara Kromatografi dan
Mikroskopik", terjemahan K. Radmawinata dan I.
Soediso, penerbit ITB, Bandung, 1985, 3-18. 15.
25. Tetsuro Ajisaka, 2006, Problems in the
identification of “Sargassum duplcatum” Group,
Coastal Marine Science 30(1): 174-178. Kyoto
University, Japan.
26. Wiryowidagdo, Sumali. Kimia dan Farmakologi
Bahan Alam. Dirjen Dikti–Universitas Indonesia.
Jakarta 2000; viii + 339 hlm.
Apakah kandungan senyawa bioaktif flavonoid yang
terkandung dalam ekstrak alga coklat S.
cristaefolium.
Apakah ekstrak senyawa yang terdapat pada S.
cristaefolium mempunyai daya toksisitas sehingga
memiliki potensi untuk dikembangkan dalam dunia
pengobatan seperti antikaknker atau antitumor.
Fahri, M. (2010) 11
Fahri, M. (2010) 12