Macam Spektrofotometri dan Perbedaannya (Vis, UV, dan IR

)
Pada artikel tempo hari telah dibahas tentang perbedaan antara spektrometri dan spektrofotometri, serta beberapa istilah yang sering digunakan dalam dunia spektrometri. Kali ini akan dibahas mengenai jenis spektrofotometri dan perbedaannya. Spektrofotometri terdiri dari beberapa jenis berdasar sumber cahaya yang digunakan. Diantaranya adalah sebagai berikut: 1. Spektrofotometri Vis (Visible) 2. Spektrofotometri UV (Ultra Violet) 3. Spektrofotometri UV-Vis 4. Spektrofotometri IR (Infra Red)

1. Spektrofotometri Visible (Spektro Vis)

Pada spektrofotometri ini yang digunakan sebagai sumber sinar/energi adalah cahaya tampak (visible). Cahaya visible termasuk spektrum elektromagnetik yang dapat ditangkap oleh mata manusia. Panjang gelombang sinar tampak adalah 380 sampai 750 nm. Sehingga semua sinar yang dapat dilihat oleh kita, entah itu putih, merah, biru, hijau, apapun.. selama ia dapat dilihat oleh mata, maka sinar tersebut termasuk ke dalam sinar tampak (visible). Sumber sinar tampak yang umumnya dipakai pada spektro visible adalah lampu Tungsten. Tungsten yang dikenal juga dengan nama Wolfram merupakan unsur kimia dengan simbol W dan no atom 74. Tungsten mempunyai titik didih yang tertinggi (3422 ºC) dibanding logam lainnya. karena sifat inilah maka ia digunakan sebagai sumber lampu. Sample yang dapat dianalisa dengan metode ini hanya sample yang memilii warna. Hal ini menjadi kelemahan tersendiri dari metode spektrofotometri visible. Oleh karena itu, untuk sample yang tidak memiliki warna harus terlebih dulu dibuat berwarna dengan menggunakan reagent spesifik yang akan menghasilkan senyawa berwarna. Reagent yang digunakan harus betul-betul spesifik hanya bereaksi dengan analat yang akan dianalisa. Selain itu juga produk senyawa berwarna yang dihasilkan harus benar-benar stabil. Salah satu contohnya adalah pada analisa kadar protein terlarut (soluble protein). Protein terlarut dalam larutan tidak memiliki warna. Oleh karena itu, larutan ini harus dibuat berwarna agar dapat dianalisa. Reagent yang biasa digunakan adalah reagent Folin. Saat protein terlarut direaksikan dengan Folin dalam suasana sedikit basa, ikatan peptide pada protein akan membentuk senyawa kompleks yang berwarna biru yang dapat dideteksi pada panjang gelombang sekitar 578 nm. Semakin tinggi intensitas warna biru menandakan banyaknya senyawa kompleks yang terbentuk yang berarti semakin besar konsentrasi protein terlarut dalam sample.

Oleh karena itu. . Prinsip dasar pada spektrofotometri adalah sample harus jernih dan larut sempurna. Dia merupakan isotop hidrogen yang stabil yang terdapat berlimpah di laut dan daratan. Namun harus hati-hati juga. yaitu photodiode yang dilengkapi dengan monokromator. terutama pada bagian preparasi sample. Namun perlu diingat. Untuk sistem spektrofotometri. Deuterium disebut juga heavy hidrogen. karena banyak kemungkinan terjadi interferensi dari senyawa lain selain analat yang juga menyerap pada panjang gelombang UV. sumber cahaya UV dan sumber cahaya visible. sementara hidrogen hanya memiliki satu proton dan tidak memiliki neutron. sample terlebih dulu dibuat berwarna dengan reagent Folin. Sinar UV memiliki panjang gelombang 190380 nm. Jika menggunakan spektrofotometri visible.2. Karena sinar UV tidak dapat dideteksi oleh mata kita. UV-Vis paling banyak tersedia dan paling populer digunakan. mengacu pada intinya yang memiliki dua pertikel. Sebagai sumber sinar dapat digunakan lampu deuterium. Spektrofotometri UV (ultraviolet) Berbeda dengan spektrofotometri visible. Kemudahan metode ini adalah dapat digunakan baik untuk sample berwarna juga untuk sample tak berwarna. maka senyawa yang dapat menyerap sinar ini terkadang merupakan senyawa yang tidak memiliki warna. maka konsentrasi protein terlarut semakin besar. Sebagai contoh pada analisa protein terlarut (soluble protein). Bahkan sample dapat langsung dianalisa meskipun tanpa preparasi. Spektrofotometri UV memang lebih simple dan mudah dibanding spektrofotometri visible. Bening dan transparan. Meskipun untuk alat yang lebih canggih sudah menggunakan hanya satu sumber sinar sebagai sumber UV dan Vis. deuteros. Menggunakan dua buah sumber cahaya berbeda. sample tidak berwarna tidak perlu dibuat berwarna dengan penambahan reagent tertentu. Inti atom deuterium mempunyai satu proton dan satu neutron. Sehingga semakin banyak sinar yang diserap sample (Absorbansi tinggi). yang berarti ‘dua’. Spektrofotometri UV-Vis Spektrofotometri ini merupakan gabungan antara spektrofotometri UV dan Visible. 3. maka bila menggunakan spektrofotometri UV. Hal ini berpotensi menimbulkan bias pada hasil analisa. Ikatan peptide pada protein terlarut akan menyerap sinar UV pada panjang gelombang sekitar 280 nm. Nama deuterium diambil dari bahasa Yunani. pada spektrofotometri UV berdasarkan interaksi sample dengan sinar UV. sample keruh tetap harus dibuat jernih dengan filtrasi atau centrifugasi. Tidak ada partikel koloid apalagi suspensi. sample dapat langsung dianalisa.

Spektrofotometri ini di sebut Near Infrared Spectropgotometry (NIR).5-1000 μm. Cahaya infra merah terbagi menjadi infra merah dekat. Hasil analisa biasanya berupa signal kromatogram hubungan intensitas IR terhadap panjang gelombang. Terdapat juga satu jenis spektrofotometri IR lainnya yang berdasar pada penyerapan sinar IR pendek. gangguan dari gugus fungsi kontaminan akan mengganggu signal kurva yang diperoleh.4. Aplikasi NIR banyak digunakan pada industri pakan dan pangan guna analisa bahan baku yang bersifat rutin dan cepat. Infra merah pada spektrofotometri adalah infra merah jauh dan pertengahan yang mempunyai panjang gelombang 2. namun biasanya lebih kepada analisa kualitatif. terutama senyawa organik. signal sample akan dibandingkan dengan signal standard. Pada spektro IR meskipun bisa digunakan untuk analisa kuantitatif. Untuk identifikasi. Spektrofotometri IR (Infra Red) Dari namanya sudah bisa dimengerti bahwa spektrofotometri ini berdasar pada penyerapan panjang gelombang infra merah. Setiap serapan pada panjang gelombang tertentu menggambarkan adanya suatu gugus fungsi spesifik. Karena bila tidak. dan jauh. Perlu juga diketahui bahwa sample untuk metode ini harus dalam bentuk murni. pertengahan. . Umumnya spektro IR digunakan untuk mengidentifikasi gugus fungsi pada suatu senyawa.

Hal ini disebabkan UV memiliki panjang gelombang (λ) yang lebih pendek (100–400 nm) dibanding panjang gelombang yang dimiliki sinar tampak (400–800 nm). Sedangkan peralatan yang digunakan dalam spektrofometri disebut spektrofotometer. v = frekuensi sinar c = kecepatan cahaya (3 x 108 m. Misalnya energi yang dihasilkan cahaya UV lebih besar dari pada energi yang dihasilkan sinar tampak. Hubungan dari ketiga parameter di atas dirumuskan oleh Planck yang dikenal dengan persamaan Planck. Radiasi elektromagnetik ini memiliki sifat ganda yang disebut sebagai sifat dualistik cahaya yaitu sebagai gelombang dan sebagai partikel-partikel energi yang disebut foton.v E = h . Radiasi elektromagnetik yang dijumpai dalam kehidupan sehari-hari adalah cahaya matahari. UV dan inframerah.s-1). c/ λ dimana E = energi tiap foton h = tetapan Planck (6. Cahaya yang dimaksud dapat berupa cahaya visibel. Sinar atau cahaya yang berasal dari sumber tertentu disebut juga sebagai radiasi elektromagnetik. sedangkan materi dapat berupa atom dan molekul namun yang lebih berperan adalah elektron yang ada pada atom ataupun molekul yang bersangkutan. .626 x 10-34 J.Pengertian Dasar Spektrofotometer Spektrofotometri merupakan salah satu metode dalam kimia analisis yang digunakan untuk menentukan komposisi suatu sampel baik secara kuantitatif dan kualitatif yang didasarkan pada interaksi antara materi dengan cahaya. frekuensi dan energi tiap foton. Karena sifat tersebut maka beberapa parameter perlu diketahui misalnya panjang gelombang.s). Hubungan antara panjang gelombang frekuensi dapat dirumuskan sebagai c = λ . v atau λ = c/v atau v = c/λ Persamaan Planck: hubungan antara energi tiap foton dengan frekuensi E=h. Dari rumus di atas dapat diketahui bahwa energi dan frekuensi suatu foton akan berbanding terbalik dengan panjang gelombang tetapi energi yang dimiliki suatu foton akan berbanding lurus dengan frekuensinya.

baik cahaya Uv.Berbagai satuan energi beserta faktor konversinya dapat dilihat pada tabel: Erg 1 erg = 1 J joule = 107 1 kalori 4.atm 9. Spektroskopi Resonansi Spin elektron (ESR) dan Spektroskopi “Photoacoustic” tetapi tidak dibahas pada artikel ini. UV-Vis dan Ir) memiliki prinsip kerja yang sama yaitu “adanya interaksi antara materi dengan cahaya yang memiliki panjang gelombang tertentu”.3901×10-8 2.8291×10-20 l.1849×107 1 atm = 1. Instrumen dari keempat spektrofotometri inipun tidak berbeda. Spektrofotometri Vis (Visible) dengan panjang gelombang: 400-800 nm. Spektroskopi Resonansi Magnetik Inti (NMR).2418×1011 6.8687×1010 9. yakni terdiri dari: .volt = 1. Spektroskopi Gelombang Mikro.1291×10-2 1 1.0133×109 1 E. Dari 4 jenis spektrofotometri ini (UV.1840 1. Selain 4 spektrofotometri ini masih terdapat beberapa spektroskopi absorbsi lain yakni: spektroskopi absorbsi sinar x. Spektrofotometri IR (Infra Red) dengan panjang gelombang: 300-25.000 nm dan tidak dibahas disini.218 3.0133×102 1. Perbedaannya terletak pada panjang gelombang yang digunakan. 3. Vis.6116×1019 16.volt 6. 4.6021x-19 Kalori 2.6248×1020 1 Interaksi antara materi dengan cahaya disini adalah terjadi penyerapan cahaya.2418×1018 2.3901×10-1 1 24. Vis maupun Ir oleh materi sehingga spektrofotometri disebut juga sebagai spektroskopi absorbsi. 2. spektrofotometri dapat digolongkan menjadi: 1.6021×10-12 Joule 10-7 1 4.8687×10-3 4.5611×10-20 E. Spektrofotometri UV-Vis dengan panjang gelombang: 100-800 nm. Berdasarkan rentang panjang gelombang dimana suatu zat menyerap gelombang elektomagnetik. Spektrofotometri UV (Ultra Violet) dengan panjang gelombang: 100-400 nm.

Jenis monokromator yang saat ini banyak digunakan adalan gratting atau lensa prisma dan filter optik. berputar (rotasi) dan bergetar (vibrasi) jika dikenai suatu energi. 5. Sumber sinar polikromatis berfungsi sebagai sumber sinar polikromatis dengan macam rentang panjang gelombang. 4. Jika zat menyerap cahaya tampak dan UV maka akan terjadi perpindahan elektron dari keadaan dasar menuju ke keadaan tereksitasi. Perpindahan elektron ini disebut transisi elektronik. Dimana zat yang ada dalam sel sampel disinari dengan cahaya yang memiliki panjang gelombang tertentu. berbagai 2. Ketika cahaya dengan panjang berbagai panjang gelombang (cahaya polikromatis) mengenai suatu zat. Atas dasar inilah spektrofotometri dirancang untuk mengukur konsentrasi suatu suatu yang ada dalam suatu sampel. Elektron-elektron yang dimiliki oleh suatu molekul dapat berpindah (eksitasi). Read out merupakan suatu sistem baca yang menangkap besarnya isyarat listrik yang berasal dari detektor. Sedangkan filter optik berupa lensa berwarna sehingga cahaya yang diteruskan sesuai dengan warnya lensa yang dikenai cahaya. Sel sampel berfungsi sebagai tempat meletakan sampel yang telah di masukan ke dalam kuvet yang terbuat dari kuarsa atau palstik. ketika cahaya mengenai sampel sebagian akan diserap. yang dapat diukur adalah It/I0 atau I0/It. Monokromator berfungsi sebagai penyeleksi panjang gelombang yaitu mengubah cahaya yang berasal dari sumber sinar polikromatis menjadi cahaya monaokromatis. Proses penyerapan cahaya oleh suatu zat dapat digambarkan sebagai berikut: . sebagian akan dihamburkan dan sebagian lagi akan diteruskan. cahaya datang atau cahaya masuk atau cahaya yang mengenai permukaan zat dan cahaya setelah melewati zat tidak dapat diukur. Apabila cahaya yang diserap adalah cahaya inframerah maka elektron yang ada dalam atom atau elektron ikatan pada suatu molekul dapat hanya akan bergetar (vibrasi).Fungsi masing-masing bagian 1. Proses Absorbsi Cahaya pada Spektrofotometri Di dalam suatu molekul yang memegang peranan penting adalah elektron valensi dari setiap atom yang ada hingga terbentuk suatu materi. maka cahaya dengan panjang gelombang tertentu saja yang akan diserap. 3. Jika digunakan grating maka cahaya akan dirubah menjadi spektrum cahaya. Detektor berfungsi menangkap cahaya yang diteruskan dari sampel dan mengubahnya menjadi arus listrik. Pada spektrofotometri. Sedangkan gerakan berputar elektron terjadi pada energi yang lebih rendah lagi.

dinyatakan dengan hukum lambert-beer atau Hukum Beer. inframerah dan sebagainya) yang diserap atau ditransmisikan oleh suatu larutan merupakan suatu fungsi eksponen dari konsentrasi zat dan tebal larutan. rumus yang digunakan untuk menghitung banyaknya cahaya yang hanburkan: dan absorbansi dinyatakan dengan rumus: dimana I0 merupakan intensitas cahaya datang dan It atau I1 adalah intensitas cahaya setelah melewati sampel. Berdasarkan hukum Lambert-Beer. b . Hukum beer dapat ditulis sbegai: A= a . b . c atau A = ε .Cahaya yang diserap diukur sebagai absorbansi (A) sedangkan cahaya yang hamburkan diukur sebagai transmitansi (T). c dimana: A = absorbansi b atau l = tebal larutan (tebal kuvet diperhitungkan juga umumnya 1 cm) c = konsentrasi larutan yang diukur. . berbunyi: jumlah radiasi cahaya tampak (ultraviolet.

Energi yang dimiliki sinar tampak mampu membuat elektron tereksitasi dari keadaan dasar menuju kulit atom yang memiliki energi lebih tinggi atau menuju keadaan tereksitasi. sinar yang masuk atau sinar yang mengenai sel sampel berupa sinar dengan dengan panjang gelombang tunggal (monokromatis). 2. 5. Penyerapan tidak menghasilkan pemancaran sinar pendafluor. Penyerapan sianr oleh suatu molekul yang ada di dalam larutan tidak dipengaruhi oleh molekul yang lain yang ada bersama dalam satu larutan. Panjang gelombang (nm) 400 – 435 435 – 480 480 – 490 490 – 500 500 – 560 Warna warna yang diserap Ungu Biru Biru-kehijauan Hijau kebiruan Hijau Warna komplementer Hijau kekuningan Kuning Jingga Merah Ungu kemerahan . Dimana hukum lamber-beer tidak berlaku untuk larutan dengan konsentrasi tinggi.ε = tetapan absorptivitas molar (jika konsentrasi larutan yang diukur dalam molar) a = tetapan absorptivitas (jika konsentrasi larutan yang diukur dalam ppm). Indeks reflaksi larutan tidak tergantung pada konsentrasi. Elektron pada keadaan normal atau berada pada kulit atom dengan energi terendah disebut keadaan dasar (ground-state). 4. Yang dimaksud sinar tampak adalah sinar yang dapat dilihat oleh mata manusia. Cahaya yang diserap oleh suatu zat berbeda dengan cahaya yang ditangkap oleh mata manusia. Penyerapan terjadi di dalam volume larutan yang luas penampang (tebal kuvet) yang sama. Secara eksperimen hukum Lambert-beer akan terpenuhi apabila peralatan yang digunakan memenuhi kriteria-kriteria berikut: 1. Cahaya yang tampak atau cahaya yang dilihat dalam kehidupan sehari-hari disebut warna komplementer. Cahaya yang dapat dilihat oleh mata manusia adalah cahaya dengan panjang gelombang 400-800 nm dan memiliki energi sebesar 299–149 kJ/mol. 3. Untuk lebih jelasnya perhatikan tabel berikut. Spektrofotometri sinar tampak (Visible) Spektrofotometri visible disebut juga spektrofotometri sinar tampak. Misalnya suatu zat akan berwarna orange bila menyerap warna biru dari spektrum sinar tampak dan suatu zat akan berwarna hitam bila menyerap semua warna yang terdapat pada spektrum sinar tampak.

Jika tidak berwarna maka larutan tersebut harus dijadikan berwarna dengan cara memberi reagen tertentu yang spesifik. Reagen ini disebut reagen pembentuk warna. sumber cahaya biasanya menggunakan lampu tungsten yang sering disebut lampu wolfram. karena b atau l harganya 1 cm dapat diabaikan dan ε merupakan suatu tetapan . Kurva kalibarasi hubungan antara absorbansi versus konsentrasi dapat dilihat pada Gambar. Gambar Kurva hubungan absorbansi vs konsentrasi Zat yang dapat dianalisis menggunakan spektrofotometri sinar tampak adalah zat dalam bentuk larutan dan zat tersebut harus tampak berwarna.8 (0.8) atau sering disebut sebagai daerah berlaku hukum Lambert-Beer.2-0.2 ≤ A ≥ 0. Berdasarkan hukum Beer absorbansi akan berbanding lurus dengan konsentrasi. Berikut adalah sifat-sifat yang harus dimiliki oleh reagen pembentuk warna: . Panjang gelombang yang digunakan untuk melakukan analisis adalah panjang gelombang dimana suatu zat memberikan penyerapan paling tinggi yang disebut λmaks. begitupun sebaliknya konsentrasi makin rendah absorbansi yang dihasilkan makin rendah. Hal ini disebabkan jika pengukuran dilakukan pada panjang gelombang yang sama maka data yang diperoleh makin akurat atau kesalahan yang muncul makin kecil. dalam tabel periodik unsur wolfram termasuk golongan unsur transisi tepatnya golongan VIB atau golongan 6 dengan simbol W dan nomor atom 74. Wolfram digunakan sebagai lampu pada spektrofotometri tidak terlepas dari sifatnya yang memiliki titik didih yang sangat tinggi yakni 5930 °C.560 – 580 580 – 595 595 – 610 610 – 800 Hijau kekuningan Kuning Jingga Merah Ungu Biru Biru kehijauan Hijau kebiruan Pada spektrofotometer sinar tampak. Wolfram merupakan salah satu unsur kimia. Artinya konsentrasi makin tinggi maka absorbansi yang dihasilkan makin tinggi. Hubungan antara absorbansi terhadap konsentrasi akan linear (A≈C) apabila nilai absorbansi larutan antara 0.

suhu dan jenis pelarut. Oleh sebab itu harus dibuat baru dan kurva kalibarasi yang baru harus dibuat saat setiap kali analisis. 6) Tidak boleh ada gangguan-gangguan dari komponen-komponen lain dalam larutan yang dapat mengubah zat pereaksi atau komponen komponen yang dianalisa menjadi suatu bentuk atau kompleks yang tidak berwarna.1) Kestabilan dalam larutan. 7) Pereaksi yang dipakai harus dapat menimbulkan hasil reaksi berwarna yang dikehendaki dengan komponen yang dianalisa. Sinar ultra violet terbagi menjadi dua jenis yaitu ultraviolet jauh dan ulta violet dekat. 4) Hasil reaksi yang berwarna ini harus larut dalam pelarut yang dipakai. namun . Pereaksi-pereaksi yang berubah sifatnya dalam waktu beberapa jam. suhu maupun kondisis-kondisi yang lain. 2) Pembentukan warna yang dianalisis harus cepat. dalam pelarut yang dipakai. Namun kadang-kadang dengan mengubah kondisi larutan dapat diperoleh kestabilan yang lebih baik. yang mengakibatkan menyusutnya warna larutan (fading). Cahaya UV tidak bisa dilihat oleh manusia. sedangkan ultra violet dekat memiliki rentang panjang gelombang ± 200-380 nm. Dalam hal ini dengan memilih pereaksi yang memiliki kepekaan yang cukup tinggi. Ketidakstabilan. 2) Warna larutan yang akan diukur harus mempunyai intensitas yang cukup tinggi (warna harus cukup tua) yang berarti bahwa absortivitas molarnya (ε) besar. pengaruh keasaman. disebabkan oleh oksidasi oleh udara. Setelah larutan ditambahkan reagen atau zat pembentuk warna maka larutan tersebut harus memiliki lima sifat di bawah ini: 1) Kestabilan warna yang cukup lama guna memungkinkan pengukuran absorbansi dengan teliti. 3) Warna larutan yang diukur sebaiknya bebas daripada pengaruh variasi-variasi kecil kecil dalam nilai pH. sehingga pembentukan warna yang dikehandaki tidak sempurna. 3) Reaksi dengan komponen yang dianalisa harus berlangsung secara stoikiometrik. 5) Pereaksi harus selektif dan spesifik (khas) untuk komponen yang dianalisa. 5) Sitem yang berwarna ini harus memenuhi Hukum Lambert-Beer. dapat menyebabkan timbulnya semacam cendawan bila disimpan. penguraian secara fotokimia. 4) Pereaksi tidak boleh menyerap cahaya dalam spektrum dimana dilakukan pengukuran. Ultraviolet jauh memiliki rentang panjang gelombang ± 10 nm-200 nm. Hal ini dapat dikontrol dengan mengubah pelarutnya. sehingga warna yang terjadi benar-benar merupakan ukuran bagi komponen tersebut saja. Spektrofotometri UV (ultraviolet) Spektrofotometri UV dengan pangjang gelombang 100-400 nm.

Misalnya mengubah menjadi berwarna atau tidak berwarna. karena jika udara ikut menyerap maka absorbansi yang dihasilkan akan makin besar. nitrit dan kromat sedangkan secara tak langsung misalnya ion logam transisi. Deuterium merupakan salah satu isotop hidrogen yang memeiliki 1 proton dan 1 neutron namun tidak memiliki. c. dan serangga seperti lebah dapat melihat sinar pada panjang gelombang UV. Kini spektrofotometer yang digunakan hanya menggunakan satu lampu sebagai sumber cahaya. Pada spektrofotometer UV-Vis menggunakan dua buah sumber cahaya berbeda yakni sumber cahaya UV dan sumber cahaya visible. Zat yang dapat dianalisis dengan spektrofotometri UV-Vis yaitu zat dalam bentuk larutan dan zat yang tampak berwarna maupun berwarna. termasuk burung. Analisis menggunakan sir ultraviolet biasanya dilakukan menggunakan ultraviolet dekat. Namun biasanya zat yang berwarna lebih banyak dianalisis menggunakan spektrofotometri sinar tampak. Senyawa harus diubah menjadi bentuk lain yang dapat melakukan penyerapan pada daerah yang dimaksud. Jenis spektroskopi UV-Vis terutama berguna untuk analisis kuantitatif langsung misalnya kromofor. Langkah-langkah utama dalam analisa dengan sinar UV/Vis a. Pada spektrofotometer UV biasanya menggunakan lampu deuterium atau disebut juga heavi hidrogen sebagai sumber cahaya. Zat yang dapat dianalisis menggunakan spektrofotometri UV adalah zat dalam bentuk larutan dan zat tersebut tidak tampak berwarna.beberapa hewan. c. Akbatnya kesalahan yang dilakukan makin fatal. Jika zat tersebut berwarna maka perlu direaksikan dengan reagen tertentu sehingga dihasilkan suatu larutan tidak berwarna. Spektrofotometri UV-Vis Sesuai dengan namanya spektrofotometer UV-Vis merupakan gabungan antara spektrofotometri UV dan Visible. nitrat. Monokromator disini berfungsi untuk mengubah cahaya yang berasal dari sumber cahaya sehingga diperoleh cahaya hanya dengan satu jenis panjang gelombang. Lampu yang digunakan sebagai sumber cahaya yaitu photodiode yang telah dilengkapi monokromator. Harus dilakukan jika senyawa yang dianalisa tidak melakukan penyerapan didaerah UV/Vis. Pemilihan panjang gelombang agar diperoleh panjang gelombang maksimum . Deuterium berbeda dengan hidrogen yang hanya memiliki 1 neutron tanpa proton. Pembentukan molekul yang dapat menyerap sinar UV/Vis b. Hal ini disebabkan jika digunakan ultraviolet jauh maka udara akan ikut menyerap panjang gelombang yang digunakan. reptil. jika hal ini dihubungkan dengan hukum Lamber-Beer maka konsentrasi zat yang dianalisis lebih tinggi dari yang seharusnya. sedangkan analisis menggunakan ultraviolet jauh maka instrumen yang digunakan harus dalam keadaan vakum.

Pembuatan kurva kalibrasi. . d. Untuk keperluan ini dibuat sejumlah larutan standart dengan berbagai konsentrasi. Hukum Lambert-Beer terpenuhi. d. Absorbans larutan standart ini diukur kemudian dibuat grafik A versus C. jika grafik berbentuk garis lurus yang melalui titik nol e. Pengukuran dilakukan pada kondisi yang sama seperti pada larutan standart.d.