I. TOPIK PERCOBAAN Topik Percobaan : Reaksi Uji Asam Amino Dan Protein II.

TUJUAN Tujuan dari percobaan ini adalah : 1. Menganalisis unsur-unsur yang menyusun protein 2. Uji Biuret pada telur III. DASAR TEORI Protein adalah polimer biologi yang tersusun dari molekul-molekul kecil yang dinamakan asam amino. Rentang massa molekulnya dari 6000 sampai puluhan ribu, sehingga protein dapat merupakan molekul sangat besar. Selain tersusun dari asam amino, banyak protein juga mengandung komponen lain seperti ion logam (misalnya Fe2+, Zn2+, Cu2+dan Mg2+) atau mengandung molekul organik kompleks. Rumus struktrur dari asam amino secara umum adalah:
H NH2 C COOH R

Dimana Asam amino bisa dengan pengaruh pH akan menjadi gugus amino terprotonasi (NH3+) dan gugus karboksil terionisasi (COO-). Pembangun protein adalah asam -amino, sering disebut asam amino saja, yang mempunyai struktur sebagai berikut:
H O + NH3 C CO R

Efek pada gambar tersebut adalah efek zwitter (atau ionisasi ganda). Dengan adanya ion ganda ini menyebabkan bereaksi dengan asam ataupun basa. Terdapat 20 macam asam amino yang ditemukan dalam protein. Berdasarkan gugus R-nya asam amino terdiri dari: 1. Asam Amino dengan gugus R-nya berupa hidrogen atau rantai karbon yaitu glisin, alanin, valin, leusin, isoleusin dan fenilalanin 2. Asam Amino dengan gugus R-nya mengandung gugus hidroksil (-OH) yaitu Serin, treonin, dan tirosin

3. Asam Amino dengan gugus R-nya mengandung (-COOH) yaitu asam aspartat dan asam glutamat.

gugus

karboksil

4. Asam Amino dengan gugus R-nya mengandung N yaitu asparagin, glutamin, lisin, arginin, histidin dan triptofan 5. Asam Amino dengan gugus R-nya mengandung S yaitu sistein, metionin 6. Asam Amino dengan gugus R-nya membentuk ikatan siklik dengan gugus amin yaitu prolin Kedua puluh asam amino tersebut terbagi menjadi 2 bagian berdasarkan kepolarannya yaitu asam amino bersifat polar dan nonpolar. i.
ii.

Asam amino bersifat nonpolar yaitu Glisin, Alinin, Prolin, Valin, Isoleusin, Metionin, Triptofan, Leusin, dan Phenilalanin. Asam aminao bersifat polar yaitu Asparagin, Threonin, Serin, Asam aspartat, Tirosin, Histidin, Arginin, Lysin, Asam Glutamat, dan Sistein. No 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Nama Glisin Alanin Valin Leusin Isoleusin Serin Threonin Fenilalanin Metionin Sistein Asparagin Tirosin Triptofan Prolin Glutamin As. Aspartat As. Glutamat Lisin Arginin Histidin Sifat Netral Netral Netral Netral Netral Netral Netral Netral Netral Netral Netral Netral Netral Netral Netral Asam Asam Basa Basa Basa Jenis Non esensial Non esensial esensial esensial esensial Non esensial esensial esensial esensial Non esensial Non esensial Non esensial esensial Non esensial Non esensial Non esensial Non esensial esensial esensial esensial

Asam amino yang berpolimerisasi melalui ikatan peptida membentuk protein. Contoh nya adalah tripeptida yang terdiri atas 3 macam asam amino yaitu glisin, alanin dan serin. Maka rumus struturnya adalah:

O O H2C C NH CH C OH NH2 CH2OH

Beberapa penguji reaksi protein adalah: 1. Pereaksi Xantoprotein Larutan asam nitrat pekat ditambahkan ke dalam larutan protein secara hati-hati. Setelah dicampurkan akan terbentuk endapan putih yang dapat berubah menjadi kuning bila dipanaskan. Peristiwa yang terjadi adalah nitrasi pada inti benzena yang terdapat pada molekul protein. Jadi uji ini positif untuk protein yang mengandung asam amino tirosin, fenilaalanin, dan triptofan. 2. Pereaksi Hopkins-Cole Digunakan untuk menguji adanya asam amino triptofan. Khususnya yang mengandung gugus indol. 3. Pereaksi Millon Digunakan untuk menguji adanya gugus fenol pada protein misalnya tirosin. 4. Pereaksi Nitroprusida Digunakan untuk protein yang asam aminonya mempunyai gugus SH misalnya sistein. 5. Pereaksi Sakaguchi Untuk uji protein yang asam aminonya mengandung gugus guanidine seperti arginin yang memberikan warna merah.

III. ALAT DAN BAHAN

Uji asam amino dan protein

a. Alat No 1 2 3 4 5 6 7 8 9

Nama Alat Tabung reaksi Batang pengaduk Sikat tabung reaksi Botol semprot berisi aquadest Penjepit tabung reaksi Lampu spritus Gelas ukur Gelas Kimia Pipet Tetes

Jumlah 4 buah 1 buah 1 buah 1 buah 1 buah 1 buah 10 dan 25 mL/ 2 buah 600 mL/1 buah 1

b. Bahan No 1 2 3 4 5 Nama Bahan Larutan protein (tahu, tempe,putih telur, susu) NaOH padat NaOH 10% HgCl2 1 % Kertas lakmus merah Jumlah 1:5 Secukupnya Secukupnya Secukupnya -

Uji Buret
Reagen dan Bahan No 1 2 3 Nama Bahan Larutan protein (tahu, tempe,putih telur, susu) NaOH 10% CuSO4 0,1% Ukuran/Jumlah 1:5 Secukupnya Secukupnya

Pengendapan dengan Pelarut Organik

Reagen dan Bahan No 1 2 Nama Bahan Larutan protein (putih telur) Alkohol Tehnis 7 % Ukuran/Jumlah 1:5 Secukupnya

IV. PROSEDUR KERJA Uji Asam Amino dan Protein 1. Memasukkan 3 tetes protein ke dalam tabung reaksi pertama dan memanaskannya dan mengamati perubahan yang terjadi. Terjadi kogosongan menunjukkan karbon, dan bintik-bintik air diatas tabung menunjukkan adanya oksigen dan hidrogen.

2. Memasukkan 4 tetes protein ke dalam tabung reaksi dan menambahkan 1 keping NaOH padat dan memanaskannya kemudian mengamati perubahan yang terjadi dari ada tidaknya bau amoniak dan berubah tidaknya kertas lakmus merah menjadi biru bila kertas tersebut didekatkan pada mulut tabung reaksi. 3. Memasukkan 4 tetes putih telur ke dalam tabung reaksi dan menambahkan larutan NaOH 10% sebanyak 2 mL dan kemudian dipanaskan lalu menambahkan 4 tetes HgCl2 1 % dan mengamati perubahan yang terjadi.

Uji Biuret
1. Memasukkan 3 mL larutan protein dan menambahkan 1 mL NaOH 10% dan mengaduknya.

2. Menambahkan 1 tetes CuSO4 0,1 % dan mengocoknya. 3. Mencatat perubahan yang terjadi

Pengendapan dengan pelarut Organik

1. Memasukkan 2 mL larutan protein dalam tabung reaksi 2. Menambahkan 10 mL larutan alkohol 70% dan mengaduknya 3. Mengambil endapannya dan memeriksa kelarutannya dalam air

V. HASIL PENGAMATAN

1. Uji asam amino dan Protein

Larutan
1. Tahu -

Perlakuan
3 tetes protein lalu dipanaskan -

Hasil Pengamatan
Gosong/karbon Ada bintik-bintik air (oksigen dan hydrogen) Tercium Amoniak lakmus merah menjadi biru Terbentuk Warna Kuning

larutan protein 4 tetes + 1 keping NaOH padat dipanaskan 4 tetes larutan Protein + NaOH 10% sebanyak 2 mL dipanaskan/dididihkan + 4 tetes HgCl2 1% 3 tetes protein lalu dipanaskan

2. Telur

Terdapat bintik-bintik dan gosong Tercium bau yang menyengat (amonium) Lakmus merah menjadi biru Larutan jadi hitam

larutan protein 4 tetes + 1 keping NaOH padat dipanaskan

3. Susu

4 tetes larutan Protein + NaOH 10% sebanyak 2 mL dipanaskan/dididihkan + 4 tetes HgCl2 1% 1 gram susu + 5 mL air - 3 tetes larutan susu dipanaskan -

Warna Gosong Terdapat uap dinding tabung

air

pada

larutan protein 4 tetes + 1 keping NaOH padat + lakmus merah 4 tetes larutan susu 10% sebanyak 2 mL 4 tetes larutan susu 10% sebanyak dipanaskan/dididihkan 4 tetes larutan susu 10% sebanyak dipanaskan/dididihkan HgCl2 1% 3 tetes larutan (dipanaskan) + NaOH + NaOH 2 mL + NaOH 2 mL + 4 tetes protein

Lakmus berwarna biru warna gosong endapan orange tidak ada perubahan warna berwarna larutan kuning pada

berwarna hitam (endapan)

4. Tempe

Bau Gosong (Carbon) Ada bintik-bintik air

4 tetes larutan protein + 1 keping NaOH padat + lakmus 4 tetes larutan Protein + NaOH

Lakmus berwarna biru Ada bau gosong terbentuk larutan berwarna

10% 2 mL (dipanaskan) 4 tetes larutan Protein + NaOH 10% 2 mL (dipanaskan) + 4 tetes HgCl2 1%

hitam menunjukkan adanya karbon

Uji Biuret
Larutan Tahu Perlakuan 3 mLlarutan protein + 1 mL NaOH 10 % + 3 tetes CuSO4 0,1 % 3 mLlarutan protein + 1 mL NaOH 10 % + 3 tetes CuSO4 0,1 % Hasil Pengamatan warna keruh terbentuk warna ungu Larutan berwarna ungu pada 1 tetes CuSO4, setelah 10 tetes warna larutan menjadi nyata (ungu tua) Larutan Berwarna (CuSO4 = 3 tetes) ungu

Telor

Susu

1 mL NaOH 10 % +3 mLlarutan susu + 3 tetes CuSO4 0,1 % 3 mL larutan Tempe + 1 mL NaOH 10 % + 3 tetes CuSO4 0,1 %

Tempe

Awalnya larutan kuning muda ( NaOH + Larutan protein) setelah ditambah 1 tetes CuSO4 larutan berwarna ungu, kemudian ditambah 1 tetes CuSO4 lagi Menjadi nyata

Pengendapan dengan pelarut organik

No. Tahu Perlakuan 2 ml larutan protein + 10 ml alkohol 70% kemudian diaduk 2 ml larutan protein + 10 ml alkohol 70% kemudian diaduk Hasil Pengamatan Terbentuk endapan

Telor

Larutan Protein larut dalam pelarut alkohol, tidak terdapat endapan Larut dan berwarna putih keruh Larutan Protein akan larut, tidak terdapat endapan

Susu

2 ml larutan protein + 10 ml alkohol 70% kemudian diaduk 2 ml larutan protein + 10 ml alkohol 70% kemudian diaduk

Tempe

VI. PEMBAHASAN Uji Asam Amino 1. Tahu Pada perlakuan yang pertama 3 tetes tahu lalu dipanaskan hasilnya semakin lama dipanaskan bau gosongnya semakin menyegat. Hal itu menunjukan adanya karbon dalam protein, dan terlihat bintik-bintik air dibagian dinding tabung. Hal ini terjadi karena unsur oksigen dan hidrogen adalah unsur yang dimiliki oleh protein dan menunjukkan adanya asam amino, karena protein tersusun oleh asam-asam amino Pada perlakuan yang kedua 4 tetes tahu + 1 keping NaOH padat lalu dipanaskan, maka lama-kelamaan akan timbul bau yang menyengat yang menandakan adanya amonia dan bila kertas lakmus merah diletakkan pada mulut tabung maka akan terjadi perubahan warna lakmus merah menjadi biru. Bau amonia atau perubahan warna menunjukkan adanya unsur nitrogen dan hidrogen dalam larutan protein. Pada percobaan ketiga saat 4 tetes larutan tahu ditambah 2 mL larutan NaOH 10%, larutan berwarna (keruh) kemudian dipanaskan, setelah dipanaskan tidak ada perubahan warna hanya terdapat bintik-bintik air pada dinding tabung yang menunjukkan adanya unsur oksigen dan hidrogen pada protein tersebut. Saat itu larutan protein (Tahu) telah dihidrolisa oleh larutan NaOH. Kemudian setelah ditambah 4 tetes HgCl2 1% terjadi perubahan warna menjadi warna kuning dan tidak terbentuk endapan, hal ini membuktikan bahwa tahu tidak memiliki unsur belerang yang merupakan unsur-unsur yang seharusnya terdapat pada protein. Sebenarnya apabila larutan protein yang mempunyai unsur belerang apabila ditambah dengan HgCl2 maka akan terbentuk endapan HgS yang berwarna hitam, dimana endapan tersebut menandakan adanya unsur belerang. 2. Telor Pada perlakuan yang pertama 3 tetes telur lalu dipanaskan hasilnya semakin lama dipanaskan bau gosongnya semakin menyegat. Hal itu menunjukan adanya karbon dalam protein, dan terlihat bintik-bintik air dibagian dinding tabung. Hal ini terjadi karena unsur oksigen dan hidrogen adalah unsur yang dimiliki oleh telur dan menunjukkan adanya asam amino, karena telur tersusun oleh asam-asam amino. Pada perlakuan yang kedua 4 tetes larutan protein + 1 keping NaOH padat lalu dipanaskan, maka lama-kelamaan akan timbul bau yang menyengat yang menandakan adanya amonia dan bila kertas lakmus merah diletakkan pada mulut tabung maka akan terjadi perubahan warna lakmus merah menjadi biru. Bau amonia atau perubahan warna menunjukkan adanya unsur nitrogen dan hidrogen dalam larutan protein.

Pada percobaan ketiga saat 4 tetes larutan protein ditambah 2 mL larutan NaOH 10%, larutan berwarna (keruh) kemudian dipanaskan, setelah dipanaskan tidak ada perubahan warna hanya terdapat bintik-bintik air pada dinding tabung yang menunjukkan adanya unsur oksigen dan hidrogen pada protein tersebut. Saat itu larutan protein (Telur) telah dihidrolisa oleh larutan NaOH. Kemudian setelah ditambah 4 tetes HgCl2 1% terjadi perubahan warna menjadi warna hitam dan tidak terbentuk endapan, hal ini membuktikan bahwa telur memiliki unsur belerang yang merupakan unsurunsur yang terdapat pada protein. Larutan protein yang mempunyai unsur belerang apabila ditambah dengan HgCl2 maka akan terbentuk endapan HgS yang berwarna hitam, dimana endapan tersebut menandakan adanya unsur belerang. 3.Susu Pada perlakuan yang pertama 3 tetes susu lalu dipanaskan hasilnya semakin lama dipanaskan bau gosongnya semakin menyegat. Hal itu menunjukan adanya karbon dalam protein, dan terlihat bintik-bintik air dibagian dinding tabung. Hal ini terjadi karena unsur oksigen dan hidrogen adalah unsur yang dimiliki oleh susu dan menunjukkan adanya asam amino, karena susu tersusun oleh asam-asam amino. Pada perlakuan yang kedua 4 tetes larutan susu + 1 keping NaOH padat lalu dipanaskan, maka lama-kelamaan akan timbul bau yang menyengat yang menandakan adanya amonia dan bila kertas lakmus merah diletakkan pada mulut tabung maka akan terjadi perubahan warna lakmus merah menjadi biru. Bau amonia atau perubahan warna menunjukkan adanya unsur nitrogen dan hidrogen dalam larutan protein. Dan terdapat endapan berwarna orange. Pada percobaan ketiga saat 4 tetes larutan susu ditambah 2 mL larutan NaOH 10%, larutan berwarna kuning (keruh) kemudian dipanaskan, setelah dipanaskan tidak ada perubahan warna hanya terdapat bintik-bintik air pada dinding tabung yang menunjukkan adanya unsur oksigen dan hidrogen pada protein tersebut. Saat itu larutan susu telah dihidrolisa oleh larutan NaOH. Kemudian setelah ditambah 4 tetes HgCl2 1% terjadi perubahan warna menjadi warna hitam dan tidak terbentuk endapan, hal ini membuktikan bahwa susu memiliki unsur belerang yang merupakan unsurunsur yang terdapat pada protein. Larutan protein yang mempunyai unsur belerang apabila ditambah dengan HgCl2 maka akan terbentuk endapan HgS yang berwarna hitam, dimana endapan tersebut menandakan adanya unsur belerang.

4. Tempe Pada perlakuan yang pertama 3 tetes tempe lalu dipanaskan hasilnya semakin lama dipanaskan bau gosongnya semakin menyegat. Hal itu menunjukan adanya karbon dalam protein, dan terlihat bintik-bintik air dibagian dinding tabung. Hal ini terjadi karena unsur oksigen dan hidrogen adalah unsur yang dimiliki oleh tempe dan menunjukkan adanya asam amino, karena tempe tersusun oleh asam-asam amino. Pada perlakuan yang kedua 4 tetes larutan tempe + 1 keping NaOH padat lalu dipanaskan, maka lama-kelamaan akan timbul bau yang menyengat yang menandakan adanya amonia dan bila kertas lakmus merah diletakkan pada mulut tabung maka akan terjadi perubahan warna lakmus merah menjadi biru. Bau amonia atau perubahan warna menunjukkan adanya unsur nitrogen dan hidrogen dalam larutan tempe. Pada percobaan ketiga saat 4 tetes larutan tempe ditambah 2 mL larutan NaOH 10%, larutan berwarna kuning (keruh) kemudian dipanaskan, setelah dipanaskan tidak ada perubahan warna hanya terdapat bintik-bintik air pada dinding tabung yang menunjukkan adanya unsur oksigen dan hidrogen pada protein tersebut. Saat itu larutan tempe telah dihidrolisa oleh larutan NaOH. Kemudian setelah ditambah 4 tetes HgCl2 1% terjadi perubahan warna menjadi warna hitam dan tidak terbentuk endapan, hal ini membuktikan bahwa tempe memiliki unsur belerang yang merupakan unsurunsur yang terdapat pada protein. Larutan protein yang mempunyai unsur belerang apabila ditambah dengan HgCl2 maka akan terbentuk endapan HgS yang berwarna hitam, dimana endapan tersebut menandakan adanya unsur belerang.

Jawaban pertanyaan 1. Unsur-unsur yang terdapat dalam protein : Karbon, hidrogen, oksigen, nitrogen, belerang dan fosfor 2. Endapan HgS. Dimana HgCl2 digunakan hanya untuk menguji adanya asam amino dan protein. Uji Biuret 1. Tahu Pada uji biuret pada saat 3 mL larutan Protein (tahu) ditambahkan 1 mL NaOH, kemudian setelah ditambahkan 1 tetes CuSO4, yang kemudian dikocok larutan berubah warna menjadi ungu tetapi warna ungunya belum jelas tetapi pada penambahan 3 tetes larutan CuSO4 warna ungunya

semakin jelas. Warna ungu tersebut menunjukkan adanya biuret dimana dalam larutan basa akan menghasilkan warna bila direaksikan dengan CuSO4. Reaksi ini disebut reaksi biuret dimana terbentuk kompleks Cu2+ dengan gugus CO dan NH dari rantai NH2-CO-NH-CO-NH2. 2. Telur Pada uji biuret pada saat 3 mL larutan telur ditambahkan 1 mL NaOH, kemudian setelah ditambahkan 1 tetes CuSO4, yang kemudian dikocok larutan berubah warna menjadi ungu tetapi warna ungunya belum jelas tetapi pada penambahan 3 tetes larutan CuSO4 warna ungunya semakin jelas. Warna ungu tersebut menunjukkan adanya biuret dimana dalam larutan basa akan menghasilkan warna bila direaksikan dengan CuSO4. Reaksi ini disebut reaksi biuret dimana terbentuk kompleks Cu2+ dengan gugus CO dan NH dari rantai NH2-CO-NH-CO-NH2. 3. Susu Pada uji biuret pada saat 3 mL larutan susu ditambahkan 1 mL NaOH, kemudian setelah ditambahkan 1 tetes CuSO4, yang kemudian dikocok larutan berubah warna menjadi ungu tetapi warna ungunya belum jelas tetapi pada penambahan 3 tetes larutan CuSO4 warna ungunya semakin jelas. Warna ungu tersebut menunjukkan adanya biuret dimana dalam larutan basa akan menghasilkan warna bila direaksikan dengan CuSO4. Reaksi ini disebut reaksi biuret dimana terbentuk kompleks Cu2+ dengan gugus CO dan NH dari rantai NH2-CO-NH-CO-NH2. 4. Tempe Pada uji biuret pada saat 3 mL larutan tempe ditambahkan 1 mL NaOH, pada awalnya berwarna kuning kemudian setelah ditambahkan 1 tetes CuSO4, yang kemudian dikocok larutan berubah warna menjadi ungu tetapi warna ungunya belum jelas tetapi pada penambahan 3 tetes larutan CuSO4 warna ungunya semakin jelas. Warna ungu tersebut menunjukkan adanya biuret dimana dalam larutan basa akan menghasilkan warna bila direaksikan dengan CuSO4. Reaksi ini disebut reaksi biuret dimana terbentuk kompleks Cu2+ dengan gugus CO dan NH dari rantai NH2-CO-NH-CO-NH2. Jawaban pertanyaan 1. Warna yang terjadi adalah warna ungu violet 2. Karena apabila kelebihan pemakaian CuSO4 akan menyebabkan terbentuk endapan yaitu endapan Cu (OH)2 yang tentunya akan mengganggu test biuret ini 3. Garam ammonium dapat mengganggu test biuret ini karena ammonium bila direaksikan dengan CuSO4 akan terbentuk kompleks-kompleks NH3

4. 2 Macam zat lain yang dapat memberikan uji biuret positif adalah histisida, serina dan tronina atau yang mengandung gugus CO dan NH2 Pengendapan Dengan Pelarut Organik Tahu Pada pengendapan pelarut organik, pada saat penambahan 2 mL larutan Protein (tahu) yang kemudian ditambahkan 10 mL larutan alkohol 70% lalu diaduk, maka akan terbentuk endapan. Endapan tersebut diperiksa kembali kelarutannya dalam air terlihat bahwa endapan tersebut larut dalam air dan hanya sedikit yang terbentuk endapan. Hal ini membuktikan adanya protein, karena berdasarkan sifat protein ada sebagian dari protein yang larut dalam air. Telor Pada pengendapan pelarut organik, pada saat penambahan 2 mL larutan Protein (Putih telor) yang kemudian ditambahkan 10 mL larutan alkohol 70% lalu diaduk, yang dihasilkan adalah larutan putih telor tersebut larut dalam pelarut alkohol. Hal ini membuktikan adanya protein, karena berdasarkan sifat protein ada sebagian dari protein yang larut dalam air. Susu Pada pengendapan pelarut organik, pada saat penambahan 2 mL larutan Protein (Susu) yang kemudian ditambahkan 10 mL larutan alkohol 70% lalu diaduk, yang dihasilkan adalah larutan susu tersebut larut dalam pelarut alkohol dan warna larutan tersebut menjadi putih keruh. Hal ini membuktikan adanya protein, karena berdasarkan sifat protein ada sebagian dari protein yang larut dalam air. Tempe Pada pengendapan pelarut organik, pada saat penambahan 2 mL larutan Protein (tempe) yang kemudian ditambahkan 10 mL larutan alkohol 70% lalu diaduk, yang dihasilkan adalah larutan tempe tersebut larut dalam pelarut alkohol. Hal ini membuktikan adanya protein, karena berdasarkan sifat protein ada sebagian dari protein yang larut dalam air.

VII. KESIMPULAN 1. Protein adalah senyawa organik yang molekulnya besar, susunannya kompleks, tersusun atas asam-asam amino terdiri unsur-unsur C, H, O, N kadang-kadang S, P, dsb. 2. Didalam protein terdapat asam-asam amino, namun dalam asam amino belum tentu ada protein 3. Sebagian protein ada yang larut dalam air dan ada yang tidak larut dalam air

VIII. DAFTAR PUSTAKA Citadi, MS, Prof. DR. 2003. Penuntun Praktikum Biokimia. Palangkaraya: UNPAR Samsul R. 2002. Laporan Lengkap Praktikum Biokimiar. Palangkaraya: UNPAR Setiadi, Rahmat, dkk. 2001. Biokimia. Jakarta : Universitas Terbuka Indonesia Yetti Diana. 2002. Laporan Lengkap Praktikum Biokimiar. Palangkaraya: UNPAR IX. LAMPIRAN Fotocopy Laporan Sementara