THE SCIENCE OF CRYONICS

HOW Cryoprotectants Work
Hidup adalah proses kimia kompleks yang terjadi dalam air. Tanpa air cair, ada kehidupan, atau paling tidak ada proses kehidupan. Krioprotektan adalah bahan kimia yang melindungi makhluk hidup dari yang terluka oleh pembekuan air selama paparan dingin. Bagaimana krioprotektan bekerja adalah misteri bagi kebanyakan orang. Bahkan, bagaimana mereka pekerjaan bahkan menjadi misteri bagi ilmu sampai hanya beberapa dekade lalu. Artikel ini akan menjelaskan secara dasar hal bagaimana krioprotektan melindungi sel-sel dari kerusakan yang disebabkan oleh kristal es, dan beberapa kemajuan yang telah dibuat dalam desain solusi krioprotektan.
Bagaimana Pembekuan melukai Sel Air mengembang ketika membeku, tetapi sebaliknya dengan kepercayaan populer itu bukan perluasan air yang menyebabkan cedera. Ini adalah pemurnian air selama pembekuan yang menyebabkan cedera. Air membeku sebagai zat murni yang mengecualikan segalanya. Proses inilah pengecualian yang menyebabkan cedera. Alih-alih sisa pelarut yang memungkinkan molekul hidup untuk secara bebas campuran di dalamnya, air yang membeku mengumpulkan sendiri menjadi kristal mendorong segala sesuatu yang lain keluar. Ini diilustrasikan dalam Gambar 1. Pembekuan penyebab kerusakan oleh dua berbeda mekanisme. Yang pertama adalah kerusakan mekanis sebagai bentuk sel terdistorsi oleh kristal es. Yang kedua adalah kerusakan yang disebabkan oleh bahan kimia dan efek osmotik terkonsentrasi zat terlarut dalam air beku sisa

antara kristal es. Hal ini disebut "solusi efek "cedera. Bagaimana Melindungi krioprotektan sel Krioprotektan adalah bahan kimia yang larut dalam air dan menurunkan titik leleh air. Untuk aplikasi luar Cryobiology, bahan kimia seperti kadang-kadang disebut "Antibeku." Contoh umum adalah gliserol, etilen glikol, propilen glikol, dan dimetilsulfoksida (DMSO).... Sebuah konsentrasi krioprotektan dari sekitar 5% sampai 15% biasanya semua yang diperlukan untuk memungkinkan kelangsungan hidup sebagian besar dari terisolasi sel setelah pembekuan dan pencairan dari suhu nitrogen cair. Gambar 2 menunjukkan konsep penting dari cryoprotection selama sel beku. Compacts es pertumbuhan sel ke dalam kantong kecil dan lebih kecil dari dicairkan cair karena suhu diturunkan. Itu kehadiran krioprotektan yang membuat lebih besar kantong pada temperatur tertentu dari mereka akan jika krioprotektan tidak hadir. Kantong dicairkan lebih besar untuk mengurangi sel-sel kerusakan dari kedua bentuk cedera pembekuan, mekanis kerusakan dari es dan berlebihan konsentrasi garam. Sifat krioprotektan. Tidak semua bahan kimia yang larut dalam air krioprotektan. Selain menjadi air larut, krioprotektan yang baik adalah efektif menekan titik leleh air, jangan endapan atau bentuk eutectics atau hidrat, dan relatif tidak beracun untuk sel pada konsentrasi tinggi. Semua krioprotektan membentuk hidrogen obligasi dengan air. Sejak penemuan gliserol sebagai krioprotektan pertama lebih dari 50 tahun yang lalu (1), sekitar 100 senyawa telah secara eksplisit diidentifikasi dan dipelajari

Vitrifikasi. semua beragam sel jenis organ. diusulkan bahwa jaringan atau organ dimuat dengan begitu banyak krioprotektan sebelum pendinginan yang bisa menghindari pembentukan es selama seluruh pendinginan proses. krioprotektan Toksisitas Dalam kriopreservasi dengan pembekuan atau vitrifikasi. Harga yang dibayarkan adalahkerusakan dari toksisitas krioprotektan.sebagai digunakan secara rutin dalam Cryobiology (2). Namun pada konsentrasi tinggi dekat 0 º C. dan tidak dapat dengan mudah menyita dirinya menjadi kantong dicairkan antara kristal es. itu adalah menakjubkan bahwa hal ini dapat selamat. Dengan menghindari distorsi mekanis yang disebabkan oleh es batu dan garam memungkinkan dan molekul lainnyauntuk tetap tak terganggu di lokasi alami mereka. etilena glikol kurang beracun ke sel-sel dari . tembus krioprotektan adalah molekul kecil yang mudah menembus membran sel. Itu Konsep ini diilustrasikan pada Gambar 3. harus bertahan hidup dalam jumlah besar. Vitrifikasi sebagai Alternatif untuk Pembekuan Jaringan terorganisir lebih rusak oleh pembekuan dari sel terisolasi. Hal itu juga diyakini proses dengan mana sel-sel selamat di saku dicairkan dari terkonsentrasi krioprotektan antara kristal es pada suhu yang sangat rendah. pendekatan yang berbeda diperlukan. jaringan tidak memiliki ruang untuk es untuk tumbuh. 25% tingkat ketahanan hidup sering terlihat pada pembekuan sel adalah tidak cukup baik." sebelumnya dikenal di Cryobiology sebagai sebuah proses yang terjadi ketika air didinginkan terlalu cepat untuk membentuk kristal es. Untuk mencapai vitrifikasi. ketika salah satumempertimbangkan peran penting yang bermain di airmempertahankan bentuk yang tepat dan bentuk proteindan molekul lain dari kehidupan. Toksisitas krioprotektan diberikan di dekat-pembekuan suhu adalah berbeda jenis toksisitas dari toksisitas mengalami oleh makhluk hidup pada suhu hangat. Organ sangat rentan terhadap cedera pembekuan. dari parenkim sel ke sel-sel pembuluh darah terkecil. Untuk organ untuk melanjutkan fungsi setelah pembekuan. propilen glikol tidak beracun. Pada tahun 1984 cryobiologist Gregory Fahy diusulkan vitrifikasi sebagai pendekatan untuk kriopreservasi (3). untuk seseorang di bawah kondisi biasa. vitrifikasi menghindari kerusakan besarmekanisme pembekuan. molekul massa krioprotektan adalah penetrasi biasanya kurang dari 100 dalton. Jika pendinginan cepat. ini bisa dilakukan dengan konsentrasi sebenarnya kurang krioprotektan dari sel-sel yang terkena selama akhir tahap pembekuan konvensional. penetrasi krioprotektan mencegah dehidrasi yang berlebihan sel selama proses pembekuan. sedangkan etilena glikol dimetabolisme menjadi racun. yang berarti "Mengubah ke dalam gelas. Untuk kriopreservasi organ. Fahy diusulkan cara untuk mengubah seluruh volume jaringan atau organ menjadi setara dengan dicairkan kaca saku krioprotektan terkonsentrasi. Misalnya. lebih dari setengah air di dalam sel pada akhirnya digantikan oleh molekul krioprotektan.Cryoprotection dapat dianggap sebagai proses penggantian molekul air denganlain molekul yang tidak dapat membekukan. dengan memasukkan dan tertinggal di dalam sel. Tidak seperti suspensi sel terputus.Yang terbaik dan paling umum digunakan krioprotektanadalah kelas krioprotektan disebut krioprotektan penetrasi.

Mekanisme toksisitas krioprotektan masih kurang dipahami (4.propilen glikol. Molekul dengan afinitas untuk lemak dapat melakukan partisi ke dalam membran sel. seperti gliserol dan mungkin DMSO. peran krioprotektan penetrasi adalah untuk benar-benar mencegah pembentukan es. Lipofilisitas (afinitas untuk lemak dan minyak) sangat berkorelasi dengan toksisitas. meskipun mekanisme pengurangan toksisitas masih tidak diketahui (5). yang dapat berupa pembekuan larutan atau vitrifikasi solusi. Sebagai praktis materi. tetapi konsentrasi bahan pembawa solusi selalu tetap konstan. osmotik agen. Aturan biasa tidak berlaku.5). Baru aturan yang berkaitan dengan bagaimana kehidupan merespon ketika sejumlah besar air yang diganti pada rendah suhu masih harus ditemukan. menembus krioprotektan Krioprotektan Penetrating kecil mampu melintasi membran sel molekul. Ini juga telah baru ini menemukan bahwa hidrogen yang kuat ikatan berkorelasi dengan toksisitas. terutama seperti yang terlihat dalam DMSO / formamida kombinasi. . para listrik properti dari solusi krioprotektan juga telah berhubungan dengan toksisitas membran (7)." The solusi pembawa biasanya digunakan dengan M22 krioprotektan solusi disebut LM5. Itu peran krioprotektan penetrasi adalah untuk mengurangi pertumbuhan es dan mengurangi dehidrasi sel selama pembekuan. pengurangan saling toksisitas. ini berarti bahwa kriopreservasi solusi harus dilakukan dengan cara lain dari menambahkan krioprotektan ke kurir pra-dibuat solusi karena selain naif akan mencairkan bahan pembawa. possibily oleh mengganggu shell hidrasi sekitar makromolekul. dan kadangkadang nutrisi bahan atau apoptosis inhibitor. mendestabilisasi mereka. bahkan jika konsentrasi yang lebih tinggi adalah diperlukan untuk mencapai vitrifikasi (6). telah sangat berguna dalam vitrifikasi solusi pembangunan. Akhirnya. pembawa solusi kadangkadang disebut "dasar perfusi. Peran operator solusinya adalah dengan memberikan dasar dukungan untuk sel pada suhu mendekati titik beku. Seperti terlihat pada Gambar 4. tetapi beberapa generalisasi empiris dapat dibuat.persyaratan dapat dianggap sebagai definisi solusi pembawa. Sebuah kriopreservasi solusi. Dalam vitrifikasi. krioprotektan penetrasi adalah mayoritas bahan solusi vitrifikasi. Hal ini menyebabkan hasil yang tak terduga bahwa krioprotektan dengan kelompok kutub yang berinteraksi lemah dengan air terbaik untuk vitrifikasi. Bahan biasanya hadir pada konsentrasi isotonik dekat (300 miliosmol) sehingga sel tidak menyusut atau membengkak saat dipegang dalam larutan pembawa. Ini berisi garam. terdiri dari: pembawa Solusi pembawa solusi terdiri dari solusi bahan yang tidak eksplisit krioprotektan. Komponen kriopreservasi solusi Lebih dari sekedar krioprotektan harus ditambahkan ke sel dan jaringan untuk melindungi terhadap pembekuan cedera. Beberapa krioprotektan. pH buffer. juga dikenal memiliki merugikan reaksi dengan biokimia spesifik target. Berbagai konsentrasi krioprotektan mungkin diperlukan pada berbagai tahap krioprotektan pengenalan dan penghapusan. Ini komposisi konstan.

Molekul rendah berat polivinil alkohol dan poligliserol. Untuk kriopreservasi dengan pembekuan.9). Biasa krioprotektan bertindak dengan berinteraksi dengan air. Non-penetrasi krioprotektan biasanya kurang beracun dari krioprotektan penetrasi di konsentrasi yang sama. atau puluhan menit untuk potongan jaringan tipis. dan sel kembali ke volume yang didefinisikan oleh yang tonisitas larutan pembawa. Pembekuan juga dapat kadang-kadang berhasil meskipun konsentrasi krioprotektan masih rendah jika pembekuan dan pencairan dilakukan sangat cepat sehingga tidak ada cukup waktu untuk es tumbuh di dalam sel. dan biologis protein antibeku adalah contoh dari es blocker (8. Ini mencegah interior sel dari titik beku. Hal ini memungkinkan waktu untuk air meninggalkan sel sebagai pembekuan berlangsung sehingga krioprotektan yang konsentrasi di dalam sel bersama-sama naik dengan konsentrasi di luar sel. Mereka menghambat es pertumbuhan dengan mekanisme yang sama dengan penetrasi krioprotektan. Ini menyebabkan respon shrink. Es Blockers (bahan opsional) Blocker es adalah senyawa yang secara langsung memblokir pertumbuhan es dengan mengikat selektif dengan es atau mengikat kontaminan yang memicu pembentukan es (nucleators es). pendinginan dilakukan perlahanlahan. Blocker es seperti obat dalam jumlah itu hanya kecil diperlukan untuk menemukan dan mengikat target mereka. Polietilen glikol (PEG) dan polivinilpirolidon (PVP) adalah contoh. Itu bahan ini kemudian siap . bukan pembekuan solusi (Lihat Gambar 5). krioprotektan konsentrasi di dalam dan di luar sel menyetarakan. Vitrifikasi solusi yang mengandung krioprotektan konsentrasi dekat atau melebihi 50% tidak dapat ditambahkan dalam satu langkah karena respon menyusut awal osmotik akan terlalu ekstrim. yang disebut X-1000 dan Z-1000. Dalam beberapa menit. Sebaliknya. biasanya kurang dari 1 º C per menit. 1 x konsentrasi penuh vitrifikasi solusi. Itu juga telah baru-baru ini menemukan bahwa menggunakan non-penetrasi krioprotektan untuk meningkatkan yang tonisitas (konsentrasi osmotik aktif) solusi vitrifikasi dapat mencegah jenis cedera disebut cedera mengerikan. Blocker Es hanya digunakan dalam solusi vitrifikasi. dan kemudian membengkak sebagai krioprotektan menembus masuk ke dalam sel.membengkak klasik Cryobiology di mana sel pertama menyusut osmosis dalam menanggapi konsentrasi zat terlarut tinggi luar sel. Selain ini dilakukan pada suhu dekat 0 º C untuk meminimalkan toksisitas. 1/2 x. Mereka mengurangi jumlah krioprotektan penetrasi diperlukan dengan meniru luar sel yang cryoprotective efek protein dalam sel. seperti 1/8 x. Bagaimana krioprotektan yang Digunakan Pembekuan larutan yang mengandung relatif rendah konsentrasi krioprotektan mendekati 10% biasanya ditambahkan dalam satu langkah. Sel-sel atau jaringan sekarang siap untuk pembekuan. tetapi tidak masuk sel. ditambahkan ke krioprotektan solusi. biasanya selama 20 menit setiap langkah.Non-penetrasi krioprotektan(bahan opsional) Non-penetrasi krioprotektan adalah molekul besar. bahan untuk akan vitrifikasi adalah berturut-turut terkena beberapa solusi yang mengandung meningkat secara eksponensial konsentrasi krioprotektan. Blocker Es pujian krioprotektan konvensional dengan berinteraksi dengan es atau permukaan yang menyerupai es. biasanya polimer. 1/4 x.

" di kedua sisi BBB. Ini adalah apa yang disebut darah otak penghalang. Namun ini tidak berarti bahwa nonpenetrating agen tidak berpengaruh pada otak jaringan. seperti manitol. Untuk krioprotektan organ kriopreservasi. Tidak seperti suspensi sel atau jaringan kecil potong.untuk vitrifikasi. Peran penyangga osmotik adalah untuk mengurangi luasnya awal membengkak respon sel sebagai mereka terkena menurun eksternal krioprotektan konsentrasi. Hal ini karena krioprotektan harus bergerak melalui ruang-ruang kecil antara sel-sel yang melapisi bagian dalam pembuluh darah. organ terlalu besar untuk menyerap krioprotektan dengan hanya berendam di eksternal solusi. Ini berarti bahwa setiap bahan yang menurunkan titik leleh solusi krioprotektan juga meningkatkan ketahanan jaringan luar formasi untuk es BBB dengan menggambar keluar air dan meningkatkan konsentrasi zat terlarut secara alami hadir dalam otak. pendinginan dan rewarming dilakukan secepat mungkin. dan tidak mengizinkan larut dalam air molekul lebih besar dari 500 dalton untuk meninggalkan sama sekali. Enam Generasi Vitrifikasi Solusi Solusi Vitrifikasi telah berkembang sangat sejak usulan awal vitrifikasi yang modern oleh Fahy pada awal tahun 1980. Generasi 2 : Ditemukan bahwa total yang lebih tinggi krioprotektan konsentrasi dengan toksisitas yang dapat diterima dapat dicapai dengan menggabungkan . Hal ini membuat sel dari endotelium kapiler di antara mereka yang paling rentan terhadap toksisitas krioprotektan karena mereka terkena konsentrasi tertinggi dari krioprotektan untuk waktu yang lama sementara menunggu sel lain dalam organ untuk mengejar ketinggalan. Cryprotectants adalah dihapus dengan membalik langkah-langkah yang dijelaskan di atas. Itu otak adalah organ yang menembus cryprotectants dan dehidrasi tampaknya bertindak bersamaan untuk menyediakan cryoprotection. endotelium kapiler. Otak memiliki kesulitan tambahan dalam bahwa ruang antara endotel kapiler sel sangat kecil. Gerakan osmotik air di BBB ditentukan oleh seluruh krioprotektan solusi komposisi. BBB menyebabkan penetrasi krioprotektan meninggalkan darah pembuluh bahkan lebih lambat dari organ lain. konsentrasi terus menerus. atau "aktivitas air. Pertimbangan Khusus untuk Organ Waktu yang dibutuhkan untuk memperkenalkan dan menghilangkan krioprotektan dari organ yang lebih lama dibandingkan sel. atau BBB. kecuali bahwa penghapusan semua solusi kecuali untuk yang terakhir mengandung beberapa ratus milimol dari osmotik penyangga. Oleh karena itu non-penetrasi krioprotektan tidak melewati sebuah BBB utuh. Generasi tiga sampai enam adalah dikembangkan di Century Kedokteran ke-21. Untuk kriopreservasi oleh vitrifikasi. Inc Generasi 1 : Solusi paling sederhana adalah vitrifikasi krioprotektan tunggal dalam larutan pembawa. jam yang khas. Air bergerak untuk menyamakan titik leleh solusi. Untuk solusi vitrifikasi kali perfusi. Kemajuan ini dapat dipandang sebagai terjadi dalam enam generasi lompatan (10).

Hal ini menyebabkan penggantian propylene glikol di VS41A dengan etilen glikol. apa yang disebut qv * (6). dan kemudian menambahkan propilen glikol. termasuk otak irisan (19). Vitrifikasi sukses kini telah menunjukkan untuk katup jantung (12). generasi 4 : Penggunaan polimer dalam larutan vitrifikasi diizinkan lebih lanjut penurunan toksisitas oleh mengurangi konsentrasi krioprotektan penetrasi diperlukan untuk mencapai vitrifikasi. dapat diatasi dengan meningkatkan tonisitas dari non-penetrasi komponen vitrifikasi solusi (11). adalah generasi keenam solusi.40 º C sementara cryoprotected dengan vitrifikasi sebuah solusi (11). krioprotektan yang saat ini digunakan oleh Alcor. generasi 6 : Ditemukan bahwa cedera mengerikan. generasi 3 : Sebuah terobosan terjadi dengan Fahy penemuan yang bahwa toksisitas krioprotektan berkorelasi dengan jumlah molekul air per krioprotektan kutub kelompok di konsentrasi kritis diperlukan untuk vitrifikasi. dan satu melaporkan instance dari jangka panjang kelangsungan hidup setelah vitrifikasi (18). dan propilena glikol adalah dasar dari VS41A (juga disebut VS55) vitrifikasi solusi. Masa Depan generasi krioprotektan solusi harus mengatasi banyak masalah yang masih beredar. dan khususnya toksisitas krioprotektan. M22. Krioprotektan toksisitas yang muncul sebagai akhir perbatasan Cryobiology. tulang rawan (14). menghasilkan larutan vitrifikasi Veg. dengan pemulihan dari organ menunjukkan setelah pendinginan hingga di bawah . sebuah kurang dipahami dengan kecelakaan yang disebabkan oleh hanya lewat melalui beberapa sub-nol suhu rentang. yang paling canggih vitrifikasi solusi dari pertengahan tahun 1990. generasi 5 : Penggunaan polimer es memblokir diizinkan lebih jauh penurunan toksisitas oleh mengurangi konsentrasi krioprotektan semua diperlukan untuk mencapai vitrifikasi. 17). Vitrifikasi juga menunjukkan utilitas untuk layak pelestarian irisan jaringan yang beragam. kornea (15). VM3 adalah vitrifikasi solusi generasi kelima (6). kemajuan terus untuk ginjal kelinci. termasuk molekul mekanisme kegagalan kriopreservasi (21). kombinasi tersebut DMSO. . dan tikus ovarium (16. dan pelestarian histologis dari sistem yang lebih besar (20). Masa depan terbesar terobosan dalam Cryobiology dapat berasal dari lebih baik pemahaman dan mitigasi krioprotektan toksisitas. pembuluh darah jaringan (13).dengan DMSO amida seperti asetamida atau formamida. formamida.

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful