THE SCIENCE OF CRYONICS

HOW Cryoprotectants Work
Hidup adalah proses kimia kompleks yang terjadi dalam air. Tanpa air cair, ada kehidupan, atau paling tidak ada proses kehidupan. Krioprotektan adalah bahan kimia yang melindungi makhluk hidup dari yang terluka oleh pembekuan air selama paparan dingin. Bagaimana krioprotektan bekerja adalah misteri bagi kebanyakan orang. Bahkan, bagaimana mereka pekerjaan bahkan menjadi misteri bagi ilmu sampai hanya beberapa dekade lalu. Artikel ini akan menjelaskan secara dasar hal bagaimana krioprotektan melindungi sel-sel dari kerusakan yang disebabkan oleh kristal es, dan beberapa kemajuan yang telah dibuat dalam desain solusi krioprotektan.
Bagaimana Pembekuan melukai Sel Air mengembang ketika membeku, tetapi sebaliknya dengan kepercayaan populer itu bukan perluasan air yang menyebabkan cedera. Ini adalah pemurnian air selama pembekuan yang menyebabkan cedera. Air membeku sebagai zat murni yang mengecualikan segalanya. Proses inilah pengecualian yang menyebabkan cedera. Alih-alih sisa pelarut yang memungkinkan molekul hidup untuk secara bebas campuran di dalamnya, air yang membeku mengumpulkan sendiri menjadi kristal mendorong segala sesuatu yang lain keluar. Ini diilustrasikan dalam Gambar 1. Pembekuan penyebab kerusakan oleh dua berbeda mekanisme. Yang pertama adalah kerusakan mekanis sebagai bentuk sel terdistorsi oleh kristal es. Yang kedua adalah kerusakan yang disebabkan oleh bahan kimia dan efek osmotik terkonsentrasi zat terlarut dalam air beku sisa

antara kristal es. Hal ini disebut "solusi efek "cedera. Bagaimana Melindungi krioprotektan sel Krioprotektan adalah bahan kimia yang larut dalam air dan menurunkan titik leleh air. Untuk aplikasi luar Cryobiology, bahan kimia seperti kadang-kadang disebut "Antibeku." Contoh umum adalah gliserol, etilen glikol, propilen glikol, dan dimetilsulfoksida (DMSO).... Sebuah konsentrasi krioprotektan dari sekitar 5% sampai 15% biasanya semua yang diperlukan untuk memungkinkan kelangsungan hidup sebagian besar dari terisolasi sel setelah pembekuan dan pencairan dari suhu nitrogen cair. Gambar 2 menunjukkan konsep penting dari cryoprotection selama sel beku. Compacts es pertumbuhan sel ke dalam kantong kecil dan lebih kecil dari dicairkan cair karena suhu diturunkan. Itu kehadiran krioprotektan yang membuat lebih besar kantong pada temperatur tertentu dari mereka akan jika krioprotektan tidak hadir. Kantong dicairkan lebih besar untuk mengurangi sel-sel kerusakan dari kedua bentuk cedera pembekuan, mekanis kerusakan dari es dan berlebihan konsentrasi garam. Sifat krioprotektan. Tidak semua bahan kimia yang larut dalam air krioprotektan. Selain menjadi air larut, krioprotektan yang baik adalah efektif menekan titik leleh air, jangan endapan atau bentuk eutectics atau hidrat, dan relatif tidak beracun untuk sel pada konsentrasi tinggi. Semua krioprotektan membentuk hidrogen obligasi dengan air. Sejak penemuan gliserol sebagai krioprotektan pertama lebih dari 50 tahun yang lalu (1), sekitar 100 senyawa telah secara eksplisit diidentifikasi dan dipelajari

vitrifikasi menghindari kerusakan besarmekanisme pembekuan. pendekatan yang berbeda diperlukan. untuk seseorang di bawah kondisi biasa. Tidak seperti suspensi sel terputus. Pada tahun 1984 cryobiologist Gregory Fahy diusulkan vitrifikasi sebagai pendekatan untuk kriopreservasi (3). propilen glikol tidak beracun. Untuk kriopreservasi organ. dan tidak dapat dengan mudah menyita dirinya menjadi kantong dicairkan antara kristal es. etilena glikol kurang beracun ke sel-sel dari . yang berarti "Mengubah ke dalam gelas. Hal itu juga diyakini proses dengan mana sel-sel selamat di saku dicairkan dari terkonsentrasi krioprotektan antara kristal es pada suhu yang sangat rendah. Vitrifikasi sebagai Alternatif untuk Pembekuan Jaringan terorganisir lebih rusak oleh pembekuan dari sel terisolasi. Misalnya. Jika pendinginan cepat. penetrasi krioprotektan mencegah dehidrasi yang berlebihan sel selama proses pembekuan. Toksisitas krioprotektan diberikan di dekat-pembekuan suhu adalah berbeda jenis toksisitas dari toksisitas mengalami oleh makhluk hidup pada suhu hangat." sebelumnya dikenal di Cryobiology sebagai sebuah proses yang terjadi ketika air didinginkan terlalu cepat untuk membentuk kristal es. Namun pada konsentrasi tinggi dekat 0 º C. tembus krioprotektan adalah molekul kecil yang mudah menembus membran sel.Cryoprotection dapat dianggap sebagai proses penggantian molekul air denganlain molekul yang tidak dapat membekukan. diusulkan bahwa jaringan atau organ dimuat dengan begitu banyak krioprotektan sebelum pendinginan yang bisa menghindari pembentukan es selama seluruh pendinginan proses. ketika salah satumempertimbangkan peran penting yang bermain di airmempertahankan bentuk yang tepat dan bentuk proteindan molekul lain dari kehidupan. molekul massa krioprotektan adalah penetrasi biasanya kurang dari 100 dalton. Untuk organ untuk melanjutkan fungsi setelah pembekuan. Dengan menghindari distorsi mekanis yang disebabkan oleh es batu dan garam memungkinkan dan molekul lainnyauntuk tetap tak terganggu di lokasi alami mereka. Vitrifikasi. ini bisa dilakukan dengan konsentrasi sebenarnya kurang krioprotektan dari sel-sel yang terkena selama akhir tahap pembekuan konvensional. krioprotektan Toksisitas Dalam kriopreservasi dengan pembekuan atau vitrifikasi. dengan memasukkan dan tertinggal di dalam sel. itu adalah menakjubkan bahwa hal ini dapat selamat.Yang terbaik dan paling umum digunakan krioprotektanadalah kelas krioprotektan disebut krioprotektan penetrasi. Untuk mencapai vitrifikasi. dari parenkim sel ke sel-sel pembuluh darah terkecil. Fahy diusulkan cara untuk mengubah seluruh volume jaringan atau organ menjadi setara dengan dicairkan kaca saku krioprotektan terkonsentrasi. 25% tingkat ketahanan hidup sering terlihat pada pembekuan sel adalah tidak cukup baik. lebih dari setengah air di dalam sel pada akhirnya digantikan oleh molekul krioprotektan. sedangkan etilena glikol dimetabolisme menjadi racun. harus bertahan hidup dalam jumlah besar. Harga yang dibayarkan adalahkerusakan dari toksisitas krioprotektan.sebagai digunakan secara rutin dalam Cryobiology (2). jaringan tidak memiliki ruang untuk es untuk tumbuh. Itu Konsep ini diilustrasikan pada Gambar 3. semua beragam sel jenis organ. Organ sangat rentan terhadap cedera pembekuan.

dan kadangkadang nutrisi bahan atau apoptosis inhibitor. para listrik properti dari solusi krioprotektan juga telah berhubungan dengan toksisitas membran (7). meskipun mekanisme pengurangan toksisitas masih tidak diketahui (5). . pH buffer. mendestabilisasi mereka. Ini berisi garam.propilen glikol. pengurangan saling toksisitas. Seperti terlihat pada Gambar 4. Molekul dengan afinitas untuk lemak dapat melakukan partisi ke dalam membran sel. Berbagai konsentrasi krioprotektan mungkin diperlukan pada berbagai tahap krioprotektan pengenalan dan penghapusan. Lipofilisitas (afinitas untuk lemak dan minyak) sangat berkorelasi dengan toksisitas.5). ini berarti bahwa kriopreservasi solusi harus dilakukan dengan cara lain dari menambahkan krioprotektan ke kurir pra-dibuat solusi karena selain naif akan mencairkan bahan pembawa. juga dikenal memiliki merugikan reaksi dengan biokimia spesifik target." The solusi pembawa biasanya digunakan dengan M22 krioprotektan solusi disebut LM5. yang dapat berupa pembekuan larutan atau vitrifikasi solusi. Beberapa krioprotektan. Komponen kriopreservasi solusi Lebih dari sekedar krioprotektan harus ditambahkan ke sel dan jaringan untuk melindungi terhadap pembekuan cedera. Mekanisme toksisitas krioprotektan masih kurang dipahami (4. Bahan biasanya hadir pada konsentrasi isotonik dekat (300 miliosmol) sehingga sel tidak menyusut atau membengkak saat dipegang dalam larutan pembawa. terdiri dari: pembawa Solusi pembawa solusi terdiri dari solusi bahan yang tidak eksplisit krioprotektan. Ini juga telah baru ini menemukan bahwa hidrogen yang kuat ikatan berkorelasi dengan toksisitas. Ini komposisi konstan. Akhirnya. menembus krioprotektan Krioprotektan Penetrating kecil mampu melintasi membran sel molekul.persyaratan dapat dianggap sebagai definisi solusi pembawa. peran krioprotektan penetrasi adalah untuk benar-benar mencegah pembentukan es. Itu peran krioprotektan penetrasi adalah untuk mengurangi pertumbuhan es dan mengurangi dehidrasi sel selama pembekuan. krioprotektan penetrasi adalah mayoritas bahan solusi vitrifikasi. Sebagai praktis materi. Aturan biasa tidak berlaku. Dalam vitrifikasi. possibily oleh mengganggu shell hidrasi sekitar makromolekul. osmotik agen. Sebuah kriopreservasi solusi. Hal ini menyebabkan hasil yang tak terduga bahwa krioprotektan dengan kelompok kutub yang berinteraksi lemah dengan air terbaik untuk vitrifikasi. terutama seperti yang terlihat dalam DMSO / formamida kombinasi. bahkan jika konsentrasi yang lebih tinggi adalah diperlukan untuk mencapai vitrifikasi (6). pembawa solusi kadangkadang disebut "dasar perfusi. seperti gliserol dan mungkin DMSO. Peran operator solusinya adalah dengan memberikan dasar dukungan untuk sel pada suhu mendekati titik beku. Baru aturan yang berkaitan dengan bagaimana kehidupan merespon ketika sejumlah besar air yang diganti pada rendah suhu masih harus ditemukan. tetapi konsentrasi bahan pembawa solusi selalu tetap konstan. tetapi beberapa generalisasi empiris dapat dibuat. telah sangat berguna dalam vitrifikasi solusi pembangunan.

Blocker Es hanya digunakan dalam solusi vitrifikasi. 1/2 x. Mereka menghambat es pertumbuhan dengan mekanisme yang sama dengan penetrasi krioprotektan.Non-penetrasi krioprotektan(bahan opsional) Non-penetrasi krioprotektan adalah molekul besar. Hal ini memungkinkan waktu untuk air meninggalkan sel sebagai pembekuan berlangsung sehingga krioprotektan yang konsentrasi di dalam sel bersama-sama naik dengan konsentrasi di luar sel. Ini menyebabkan respon shrink. biasanya polimer. bahan untuk akan vitrifikasi adalah berturut-turut terkena beberapa solusi yang mengandung meningkat secara eksponensial konsentrasi krioprotektan. Polietilen glikol (PEG) dan polivinilpirolidon (PVP) adalah contoh.9). dan kemudian membengkak sebagai krioprotektan menembus masuk ke dalam sel. biasanya selama 20 menit setiap langkah. 1/4 x. Selain ini dilakukan pada suhu dekat 0 º C untuk meminimalkan toksisitas. Dalam beberapa menit. Molekul rendah berat polivinil alkohol dan poligliserol. Itu bahan ini kemudian siap . krioprotektan konsentrasi di dalam dan di luar sel menyetarakan. Sebaliknya. Itu juga telah baru-baru ini menemukan bahwa menggunakan non-penetrasi krioprotektan untuk meningkatkan yang tonisitas (konsentrasi osmotik aktif) solusi vitrifikasi dapat mencegah jenis cedera disebut cedera mengerikan. Sel-sel atau jaringan sekarang siap untuk pembekuan. seperti 1/8 x. Pembekuan juga dapat kadang-kadang berhasil meskipun konsentrasi krioprotektan masih rendah jika pembekuan dan pencairan dilakukan sangat cepat sehingga tidak ada cukup waktu untuk es tumbuh di dalam sel. Blocker Es pujian krioprotektan konvensional dengan berinteraksi dengan es atau permukaan yang menyerupai es. ditambahkan ke krioprotektan solusi. dan biologis protein antibeku adalah contoh dari es blocker (8. biasanya kurang dari 1 º C per menit. Bagaimana krioprotektan yang Digunakan Pembekuan larutan yang mengandung relatif rendah konsentrasi krioprotektan mendekati 10% biasanya ditambahkan dalam satu langkah. bukan pembekuan solusi (Lihat Gambar 5). yang disebut X-1000 dan Z-1000. pendinginan dilakukan perlahanlahan. tetapi tidak masuk sel. Untuk kriopreservasi dengan pembekuan. Vitrifikasi solusi yang mengandung krioprotektan konsentrasi dekat atau melebihi 50% tidak dapat ditambahkan dalam satu langkah karena respon menyusut awal osmotik akan terlalu ekstrim. Non-penetrasi krioprotektan biasanya kurang beracun dari krioprotektan penetrasi di konsentrasi yang sama. dan sel kembali ke volume yang didefinisikan oleh yang tonisitas larutan pembawa.membengkak klasik Cryobiology di mana sel pertama menyusut osmosis dalam menanggapi konsentrasi zat terlarut tinggi luar sel. Biasa krioprotektan bertindak dengan berinteraksi dengan air. Ini mencegah interior sel dari titik beku. 1 x konsentrasi penuh vitrifikasi solusi. Mereka mengurangi jumlah krioprotektan penetrasi diperlukan dengan meniru luar sel yang cryoprotective efek protein dalam sel. atau puluhan menit untuk potongan jaringan tipis. Blocker es seperti obat dalam jumlah itu hanya kecil diperlukan untuk menemukan dan mengikat target mereka. Es Blockers (bahan opsional) Blocker es adalah senyawa yang secara langsung memblokir pertumbuhan es dengan mengikat selektif dengan es atau mengikat kontaminan yang memicu pembentukan es (nucleators es).

organ terlalu besar untuk menyerap krioprotektan dengan hanya berendam di eksternal solusi. Pertimbangan Khusus untuk Organ Waktu yang dibutuhkan untuk memperkenalkan dan menghilangkan krioprotektan dari organ yang lebih lama dibandingkan sel. Peran penyangga osmotik adalah untuk mengurangi luasnya awal membengkak respon sel sebagai mereka terkena menurun eksternal krioprotektan konsentrasi. Kemajuan ini dapat dipandang sebagai terjadi dalam enam generasi lompatan (10). Ini berarti bahwa setiap bahan yang menurunkan titik leleh solusi krioprotektan juga meningkatkan ketahanan jaringan luar formasi untuk es BBB dengan menggambar keluar air dan meningkatkan konsentrasi zat terlarut secara alami hadir dalam otak. Otak memiliki kesulitan tambahan dalam bahwa ruang antara endotel kapiler sel sangat kecil. atau "aktivitas air. kecuali bahwa penghapusan semua solusi kecuali untuk yang terakhir mengandung beberapa ratus milimol dari osmotik penyangga." di kedua sisi BBB. Untuk kriopreservasi oleh vitrifikasi. Ini adalah apa yang disebut darah otak penghalang. Hal ini karena krioprotektan harus bergerak melalui ruang-ruang kecil antara sel-sel yang melapisi bagian dalam pembuluh darah.untuk vitrifikasi. endotelium kapiler. Air bergerak untuk menyamakan titik leleh solusi. Tidak seperti suspensi sel atau jaringan kecil potong. Itu otak adalah organ yang menembus cryprotectants dan dehidrasi tampaknya bertindak bersamaan untuk menyediakan cryoprotection. Oleh karena itu non-penetrasi krioprotektan tidak melewati sebuah BBB utuh. jam yang khas. pendinginan dan rewarming dilakukan secepat mungkin. Hal ini membuat sel dari endotelium kapiler di antara mereka yang paling rentan terhadap toksisitas krioprotektan karena mereka terkena konsentrasi tertinggi dari krioprotektan untuk waktu yang lama sementara menunggu sel lain dalam organ untuk mengejar ketinggalan. seperti manitol. Generasi 2 : Ditemukan bahwa total yang lebih tinggi krioprotektan konsentrasi dengan toksisitas yang dapat diterima dapat dicapai dengan menggabungkan . Untuk solusi vitrifikasi kali perfusi. Gerakan osmotik air di BBB ditentukan oleh seluruh krioprotektan solusi komposisi. BBB menyebabkan penetrasi krioprotektan meninggalkan darah pembuluh bahkan lebih lambat dari organ lain. Cryprotectants adalah dihapus dengan membalik langkah-langkah yang dijelaskan di atas. dan tidak mengizinkan larut dalam air molekul lebih besar dari 500 dalton untuk meninggalkan sama sekali. Inc Generasi 1 : Solusi paling sederhana adalah vitrifikasi krioprotektan tunggal dalam larutan pembawa. Enam Generasi Vitrifikasi Solusi Solusi Vitrifikasi telah berkembang sangat sejak usulan awal vitrifikasi yang modern oleh Fahy pada awal tahun 1980. Namun ini tidak berarti bahwa nonpenetrating agen tidak berpengaruh pada otak jaringan. Generasi tiga sampai enam adalah dikembangkan di Century Kedokteran ke-21. konsentrasi terus menerus. atau BBB. Untuk krioprotektan organ kriopreservasi.

pembuluh darah jaringan (13). . VM3 adalah vitrifikasi solusi generasi kelima (6). dan tikus ovarium (16. dapat diatasi dengan meningkatkan tonisitas dari non-penetrasi komponen vitrifikasi solusi (11). dan satu melaporkan instance dari jangka panjang kelangsungan hidup setelah vitrifikasi (18). Krioprotektan toksisitas yang muncul sebagai akhir perbatasan Cryobiology. formamida. kemajuan terus untuk ginjal kelinci.40 º C sementara cryoprotected dengan vitrifikasi sebuah solusi (11). sebuah kurang dipahami dengan kecelakaan yang disebabkan oleh hanya lewat melalui beberapa sub-nol suhu rentang. Hal ini menyebabkan penggantian propylene glikol di VS41A dengan etilen glikol. menghasilkan larutan vitrifikasi Veg. Masa Depan generasi krioprotektan solusi harus mengatasi banyak masalah yang masih beredar. 17). termasuk molekul mekanisme kegagalan kriopreservasi (21).dengan DMSO amida seperti asetamida atau formamida. Masa depan terbesar terobosan dalam Cryobiology dapat berasal dari lebih baik pemahaman dan mitigasi krioprotektan toksisitas. generasi 3 : Sebuah terobosan terjadi dengan Fahy penemuan yang bahwa toksisitas krioprotektan berkorelasi dengan jumlah molekul air per krioprotektan kutub kelompok di konsentrasi kritis diperlukan untuk vitrifikasi. adalah generasi keenam solusi. dan propilena glikol adalah dasar dari VS41A (juga disebut VS55) vitrifikasi solusi. dan kemudian menambahkan propilen glikol. generasi 5 : Penggunaan polimer es memblokir diizinkan lebih jauh penurunan toksisitas oleh mengurangi konsentrasi krioprotektan semua diperlukan untuk mencapai vitrifikasi. Vitrifikasi sukses kini telah menunjukkan untuk katup jantung (12). dan khususnya toksisitas krioprotektan. generasi 4 : Penggunaan polimer dalam larutan vitrifikasi diizinkan lebih lanjut penurunan toksisitas oleh mengurangi konsentrasi krioprotektan penetrasi diperlukan untuk mencapai vitrifikasi. generasi 6 : Ditemukan bahwa cedera mengerikan. dengan pemulihan dari organ menunjukkan setelah pendinginan hingga di bawah . yang paling canggih vitrifikasi solusi dari pertengahan tahun 1990. krioprotektan yang saat ini digunakan oleh Alcor. dan pelestarian histologis dari sistem yang lebih besar (20). Vitrifikasi juga menunjukkan utilitas untuk layak pelestarian irisan jaringan yang beragam. kornea (15). tulang rawan (14). M22. kombinasi tersebut DMSO. termasuk otak irisan (19). apa yang disebut qv * (6).

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful