P. 1
The Science of Cryonics

The Science of Cryonics

|Views: 29|Likes:
Published by hyunniesaeng

More info:

Published by: hyunniesaeng on Apr 03, 2012
Copyright:Attribution Non-commercial

Availability:

Read on Scribd mobile: iPhone, iPad and Android.
download as DOC, PDF, TXT or read online from Scribd
See more
See less

10/10/2013

pdf

text

original

THE SCIENCE OF CRYONICS

HOW Cryoprotectants Work
Hidup adalah proses kimia kompleks yang terjadi dalam air. Tanpa air cair, ada kehidupan, atau paling tidak ada proses kehidupan. Krioprotektan adalah bahan kimia yang melindungi makhluk hidup dari yang terluka oleh pembekuan air selama paparan dingin. Bagaimana krioprotektan bekerja adalah misteri bagi kebanyakan orang. Bahkan, bagaimana mereka pekerjaan bahkan menjadi misteri bagi ilmu sampai hanya beberapa dekade lalu. Artikel ini akan menjelaskan secara dasar hal bagaimana krioprotektan melindungi sel-sel dari kerusakan yang disebabkan oleh kristal es, dan beberapa kemajuan yang telah dibuat dalam desain solusi krioprotektan.
Bagaimana Pembekuan melukai Sel Air mengembang ketika membeku, tetapi sebaliknya dengan kepercayaan populer itu bukan perluasan air yang menyebabkan cedera. Ini adalah pemurnian air selama pembekuan yang menyebabkan cedera. Air membeku sebagai zat murni yang mengecualikan segalanya. Proses inilah pengecualian yang menyebabkan cedera. Alih-alih sisa pelarut yang memungkinkan molekul hidup untuk secara bebas campuran di dalamnya, air yang membeku mengumpulkan sendiri menjadi kristal mendorong segala sesuatu yang lain keluar. Ini diilustrasikan dalam Gambar 1. Pembekuan penyebab kerusakan oleh dua berbeda mekanisme. Yang pertama adalah kerusakan mekanis sebagai bentuk sel terdistorsi oleh kristal es. Yang kedua adalah kerusakan yang disebabkan oleh bahan kimia dan efek osmotik terkonsentrasi zat terlarut dalam air beku sisa

antara kristal es. Hal ini disebut "solusi efek "cedera. Bagaimana Melindungi krioprotektan sel Krioprotektan adalah bahan kimia yang larut dalam air dan menurunkan titik leleh air. Untuk aplikasi luar Cryobiology, bahan kimia seperti kadang-kadang disebut "Antibeku." Contoh umum adalah gliserol, etilen glikol, propilen glikol, dan dimetilsulfoksida (DMSO).... Sebuah konsentrasi krioprotektan dari sekitar 5% sampai 15% biasanya semua yang diperlukan untuk memungkinkan kelangsungan hidup sebagian besar dari terisolasi sel setelah pembekuan dan pencairan dari suhu nitrogen cair. Gambar 2 menunjukkan konsep penting dari cryoprotection selama sel beku. Compacts es pertumbuhan sel ke dalam kantong kecil dan lebih kecil dari dicairkan cair karena suhu diturunkan. Itu kehadiran krioprotektan yang membuat lebih besar kantong pada temperatur tertentu dari mereka akan jika krioprotektan tidak hadir. Kantong dicairkan lebih besar untuk mengurangi sel-sel kerusakan dari kedua bentuk cedera pembekuan, mekanis kerusakan dari es dan berlebihan konsentrasi garam. Sifat krioprotektan. Tidak semua bahan kimia yang larut dalam air krioprotektan. Selain menjadi air larut, krioprotektan yang baik adalah efektif menekan titik leleh air, jangan endapan atau bentuk eutectics atau hidrat, dan relatif tidak beracun untuk sel pada konsentrasi tinggi. Semua krioprotektan membentuk hidrogen obligasi dengan air. Sejak penemuan gliserol sebagai krioprotektan pertama lebih dari 50 tahun yang lalu (1), sekitar 100 senyawa telah secara eksplisit diidentifikasi dan dipelajari

sebagai digunakan secara rutin dalam Cryobiology (2). yang berarti "Mengubah ke dalam gelas. Untuk mencapai vitrifikasi.Yang terbaik dan paling umum digunakan krioprotektanadalah kelas krioprotektan disebut krioprotektan penetrasi. lebih dari setengah air di dalam sel pada akhirnya digantikan oleh molekul krioprotektan. Namun pada konsentrasi tinggi dekat 0 º C. pendekatan yang berbeda diperlukan. Untuk organ untuk melanjutkan fungsi setelah pembekuan. Tidak seperti suspensi sel terputus. Fahy diusulkan cara untuk mengubah seluruh volume jaringan atau organ menjadi setara dengan dicairkan kaca saku krioprotektan terkonsentrasi. penetrasi krioprotektan mencegah dehidrasi yang berlebihan sel selama proses pembekuan. diusulkan bahwa jaringan atau organ dimuat dengan begitu banyak krioprotektan sebelum pendinginan yang bisa menghindari pembentukan es selama seluruh pendinginan proses. dan tidak dapat dengan mudah menyita dirinya menjadi kantong dicairkan antara kristal es." sebelumnya dikenal di Cryobiology sebagai sebuah proses yang terjadi ketika air didinginkan terlalu cepat untuk membentuk kristal es. harus bertahan hidup dalam jumlah besar. sedangkan etilena glikol dimetabolisme menjadi racun. dengan memasukkan dan tertinggal di dalam sel. Toksisitas krioprotektan diberikan di dekat-pembekuan suhu adalah berbeda jenis toksisitas dari toksisitas mengalami oleh makhluk hidup pada suhu hangat. Untuk kriopreservasi organ. ini bisa dilakukan dengan konsentrasi sebenarnya kurang krioprotektan dari sel-sel yang terkena selama akhir tahap pembekuan konvensional. propilen glikol tidak beracun. semua beragam sel jenis organ. Organ sangat rentan terhadap cedera pembekuan. 25% tingkat ketahanan hidup sering terlihat pada pembekuan sel adalah tidak cukup baik. Jika pendinginan cepat. Vitrifikasi sebagai Alternatif untuk Pembekuan Jaringan terorganisir lebih rusak oleh pembekuan dari sel terisolasi. Harga yang dibayarkan adalahkerusakan dari toksisitas krioprotektan. Itu Konsep ini diilustrasikan pada Gambar 3. untuk seseorang di bawah kondisi biasa. Hal itu juga diyakini proses dengan mana sel-sel selamat di saku dicairkan dari terkonsentrasi krioprotektan antara kristal es pada suhu yang sangat rendah. Pada tahun 1984 cryobiologist Gregory Fahy diusulkan vitrifikasi sebagai pendekatan untuk kriopreservasi (3). jaringan tidak memiliki ruang untuk es untuk tumbuh. krioprotektan Toksisitas Dalam kriopreservasi dengan pembekuan atau vitrifikasi. ketika salah satumempertimbangkan peran penting yang bermain di airmempertahankan bentuk yang tepat dan bentuk proteindan molekul lain dari kehidupan. Vitrifikasi. etilena glikol kurang beracun ke sel-sel dari . molekul massa krioprotektan adalah penetrasi biasanya kurang dari 100 dalton.Cryoprotection dapat dianggap sebagai proses penggantian molekul air denganlain molekul yang tidak dapat membekukan. vitrifikasi menghindari kerusakan besarmekanisme pembekuan. tembus krioprotektan adalah molekul kecil yang mudah menembus membran sel. itu adalah menakjubkan bahwa hal ini dapat selamat. dari parenkim sel ke sel-sel pembuluh darah terkecil. Dengan menghindari distorsi mekanis yang disebabkan oleh es batu dan garam memungkinkan dan molekul lainnyauntuk tetap tak terganggu di lokasi alami mereka. Misalnya.

terdiri dari: pembawa Solusi pembawa solusi terdiri dari solusi bahan yang tidak eksplisit krioprotektan. meskipun mekanisme pengurangan toksisitas masih tidak diketahui (5). Berbagai konsentrasi krioprotektan mungkin diperlukan pada berbagai tahap krioprotektan pengenalan dan penghapusan. telah sangat berguna dalam vitrifikasi solusi pembangunan. Akhirnya. tetapi konsentrasi bahan pembawa solusi selalu tetap konstan. tetapi beberapa generalisasi empiris dapat dibuat. Mekanisme toksisitas krioprotektan masih kurang dipahami (4. bahkan jika konsentrasi yang lebih tinggi adalah diperlukan untuk mencapai vitrifikasi (6).5).propilen glikol. pengurangan saling toksisitas. krioprotektan penetrasi adalah mayoritas bahan solusi vitrifikasi. ini berarti bahwa kriopreservasi solusi harus dilakukan dengan cara lain dari menambahkan krioprotektan ke kurir pra-dibuat solusi karena selain naif akan mencairkan bahan pembawa. pembawa solusi kadangkadang disebut "dasar perfusi. Ini berisi garam. Hal ini menyebabkan hasil yang tak terduga bahwa krioprotektan dengan kelompok kutub yang berinteraksi lemah dengan air terbaik untuk vitrifikasi. seperti gliserol dan mungkin DMSO. Aturan biasa tidak berlaku.persyaratan dapat dianggap sebagai definisi solusi pembawa. dan kadangkadang nutrisi bahan atau apoptosis inhibitor. Ini komposisi konstan. mendestabilisasi mereka. Itu peran krioprotektan penetrasi adalah untuk mengurangi pertumbuhan es dan mengurangi dehidrasi sel selama pembekuan. Seperti terlihat pada Gambar 4. Dalam vitrifikasi. Peran operator solusinya adalah dengan memberikan dasar dukungan untuk sel pada suhu mendekati titik beku. Beberapa krioprotektan. Bahan biasanya hadir pada konsentrasi isotonik dekat (300 miliosmol) sehingga sel tidak menyusut atau membengkak saat dipegang dalam larutan pembawa. osmotik agen. Lipofilisitas (afinitas untuk lemak dan minyak) sangat berkorelasi dengan toksisitas. Komponen kriopreservasi solusi Lebih dari sekedar krioprotektan harus ditambahkan ke sel dan jaringan untuk melindungi terhadap pembekuan cedera. peran krioprotektan penetrasi adalah untuk benar-benar mencegah pembentukan es. menembus krioprotektan Krioprotektan Penetrating kecil mampu melintasi membran sel molekul. juga dikenal memiliki merugikan reaksi dengan biokimia spesifik target. Sebuah kriopreservasi solusi. . Molekul dengan afinitas untuk lemak dapat melakukan partisi ke dalam membran sel. para listrik properti dari solusi krioprotektan juga telah berhubungan dengan toksisitas membran (7). Sebagai praktis materi. possibily oleh mengganggu shell hidrasi sekitar makromolekul. Ini juga telah baru ini menemukan bahwa hidrogen yang kuat ikatan berkorelasi dengan toksisitas. pH buffer. yang dapat berupa pembekuan larutan atau vitrifikasi solusi. Baru aturan yang berkaitan dengan bagaimana kehidupan merespon ketika sejumlah besar air yang diganti pada rendah suhu masih harus ditemukan." The solusi pembawa biasanya digunakan dengan M22 krioprotektan solusi disebut LM5. terutama seperti yang terlihat dalam DMSO / formamida kombinasi.

Vitrifikasi solusi yang mengandung krioprotektan konsentrasi dekat atau melebihi 50% tidak dapat ditambahkan dalam satu langkah karena respon menyusut awal osmotik akan terlalu ekstrim. dan biologis protein antibeku adalah contoh dari es blocker (8. krioprotektan konsentrasi di dalam dan di luar sel menyetarakan. Pembekuan juga dapat kadang-kadang berhasil meskipun konsentrasi krioprotektan masih rendah jika pembekuan dan pencairan dilakukan sangat cepat sehingga tidak ada cukup waktu untuk es tumbuh di dalam sel. Ini menyebabkan respon shrink. tetapi tidak masuk sel. Bagaimana krioprotektan yang Digunakan Pembekuan larutan yang mengandung relatif rendah konsentrasi krioprotektan mendekati 10% biasanya ditambahkan dalam satu langkah. Selain ini dilakukan pada suhu dekat 0 º C untuk meminimalkan toksisitas. biasanya kurang dari 1 º C per menit. Blocker es seperti obat dalam jumlah itu hanya kecil diperlukan untuk menemukan dan mengikat target mereka. yang disebut X-1000 dan Z-1000. Hal ini memungkinkan waktu untuk air meninggalkan sel sebagai pembekuan berlangsung sehingga krioprotektan yang konsentrasi di dalam sel bersama-sama naik dengan konsentrasi di luar sel. Dalam beberapa menit. 1/2 x. Mereka mengurangi jumlah krioprotektan penetrasi diperlukan dengan meniru luar sel yang cryoprotective efek protein dalam sel. ditambahkan ke krioprotektan solusi. Sel-sel atau jaringan sekarang siap untuk pembekuan. dan sel kembali ke volume yang didefinisikan oleh yang tonisitas larutan pembawa. Molekul rendah berat polivinil alkohol dan poligliserol. atau puluhan menit untuk potongan jaringan tipis. Sebaliknya. Polietilen glikol (PEG) dan polivinilpirolidon (PVP) adalah contoh. Blocker Es pujian krioprotektan konvensional dengan berinteraksi dengan es atau permukaan yang menyerupai es. Es Blockers (bahan opsional) Blocker es adalah senyawa yang secara langsung memblokir pertumbuhan es dengan mengikat selektif dengan es atau mengikat kontaminan yang memicu pembentukan es (nucleators es). 1 x konsentrasi penuh vitrifikasi solusi. bukan pembekuan solusi (Lihat Gambar 5). Biasa krioprotektan bertindak dengan berinteraksi dengan air. bahan untuk akan vitrifikasi adalah berturut-turut terkena beberapa solusi yang mengandung meningkat secara eksponensial konsentrasi krioprotektan. pendinginan dilakukan perlahanlahan. dan kemudian membengkak sebagai krioprotektan menembus masuk ke dalam sel. Itu bahan ini kemudian siap .9). Mereka menghambat es pertumbuhan dengan mekanisme yang sama dengan penetrasi krioprotektan. Ini mencegah interior sel dari titik beku. Untuk kriopreservasi dengan pembekuan. biasanya selama 20 menit setiap langkah.Non-penetrasi krioprotektan(bahan opsional) Non-penetrasi krioprotektan adalah molekul besar. Itu juga telah baru-baru ini menemukan bahwa menggunakan non-penetrasi krioprotektan untuk meningkatkan yang tonisitas (konsentrasi osmotik aktif) solusi vitrifikasi dapat mencegah jenis cedera disebut cedera mengerikan. biasanya polimer. seperti 1/8 x. Non-penetrasi krioprotektan biasanya kurang beracun dari krioprotektan penetrasi di konsentrasi yang sama. 1/4 x.membengkak klasik Cryobiology di mana sel pertama menyusut osmosis dalam menanggapi konsentrasi zat terlarut tinggi luar sel. Blocker Es hanya digunakan dalam solusi vitrifikasi.

seperti manitol. Inc Generasi 1 : Solusi paling sederhana adalah vitrifikasi krioprotektan tunggal dalam larutan pembawa. Air bergerak untuk menyamakan titik leleh solusi. pendinginan dan rewarming dilakukan secepat mungkin. jam yang khas. Untuk solusi vitrifikasi kali perfusi. Otak memiliki kesulitan tambahan dalam bahwa ruang antara endotel kapiler sel sangat kecil. Oleh karena itu non-penetrasi krioprotektan tidak melewati sebuah BBB utuh. konsentrasi terus menerus. atau "aktivitas air. kecuali bahwa penghapusan semua solusi kecuali untuk yang terakhir mengandung beberapa ratus milimol dari osmotik penyangga. Namun ini tidak berarti bahwa nonpenetrating agen tidak berpengaruh pada otak jaringan. endotelium kapiler. Itu otak adalah organ yang menembus cryprotectants dan dehidrasi tampaknya bertindak bersamaan untuk menyediakan cryoprotection. Ini adalah apa yang disebut darah otak penghalang. BBB menyebabkan penetrasi krioprotektan meninggalkan darah pembuluh bahkan lebih lambat dari organ lain. Generasi 2 : Ditemukan bahwa total yang lebih tinggi krioprotektan konsentrasi dengan toksisitas yang dapat diterima dapat dicapai dengan menggabungkan . Tidak seperti suspensi sel atau jaringan kecil potong." di kedua sisi BBB. Untuk kriopreservasi oleh vitrifikasi. Pertimbangan Khusus untuk Organ Waktu yang dibutuhkan untuk memperkenalkan dan menghilangkan krioprotektan dari organ yang lebih lama dibandingkan sel. Kemajuan ini dapat dipandang sebagai terjadi dalam enam generasi lompatan (10). Peran penyangga osmotik adalah untuk mengurangi luasnya awal membengkak respon sel sebagai mereka terkena menurun eksternal krioprotektan konsentrasi. Ini berarti bahwa setiap bahan yang menurunkan titik leleh solusi krioprotektan juga meningkatkan ketahanan jaringan luar formasi untuk es BBB dengan menggambar keluar air dan meningkatkan konsentrasi zat terlarut secara alami hadir dalam otak. organ terlalu besar untuk menyerap krioprotektan dengan hanya berendam di eksternal solusi. Hal ini karena krioprotektan harus bergerak melalui ruang-ruang kecil antara sel-sel yang melapisi bagian dalam pembuluh darah.untuk vitrifikasi. Untuk krioprotektan organ kriopreservasi. Gerakan osmotik air di BBB ditentukan oleh seluruh krioprotektan solusi komposisi. atau BBB. Cryprotectants adalah dihapus dengan membalik langkah-langkah yang dijelaskan di atas. Hal ini membuat sel dari endotelium kapiler di antara mereka yang paling rentan terhadap toksisitas krioprotektan karena mereka terkena konsentrasi tertinggi dari krioprotektan untuk waktu yang lama sementara menunggu sel lain dalam organ untuk mengejar ketinggalan. dan tidak mengizinkan larut dalam air molekul lebih besar dari 500 dalton untuk meninggalkan sama sekali. Generasi tiga sampai enam adalah dikembangkan di Century Kedokteran ke-21. Enam Generasi Vitrifikasi Solusi Solusi Vitrifikasi telah berkembang sangat sejak usulan awal vitrifikasi yang modern oleh Fahy pada awal tahun 1980.

Masa Depan generasi krioprotektan solusi harus mengatasi banyak masalah yang masih beredar. generasi 3 : Sebuah terobosan terjadi dengan Fahy penemuan yang bahwa toksisitas krioprotektan berkorelasi dengan jumlah molekul air per krioprotektan kutub kelompok di konsentrasi kritis diperlukan untuk vitrifikasi. Vitrifikasi sukses kini telah menunjukkan untuk katup jantung (12). dan kemudian menambahkan propilen glikol. M22. dapat diatasi dengan meningkatkan tonisitas dari non-penetrasi komponen vitrifikasi solusi (11). adalah generasi keenam solusi. Masa depan terbesar terobosan dalam Cryobiology dapat berasal dari lebih baik pemahaman dan mitigasi krioprotektan toksisitas. Hal ini menyebabkan penggantian propylene glikol di VS41A dengan etilen glikol. . dan khususnya toksisitas krioprotektan. generasi 4 : Penggunaan polimer dalam larutan vitrifikasi diizinkan lebih lanjut penurunan toksisitas oleh mengurangi konsentrasi krioprotektan penetrasi diperlukan untuk mencapai vitrifikasi. dan propilena glikol adalah dasar dari VS41A (juga disebut VS55) vitrifikasi solusi. yang paling canggih vitrifikasi solusi dari pertengahan tahun 1990. dan tikus ovarium (16. kemajuan terus untuk ginjal kelinci. krioprotektan yang saat ini digunakan oleh Alcor. sebuah kurang dipahami dengan kecelakaan yang disebabkan oleh hanya lewat melalui beberapa sub-nol suhu rentang. kornea (15). dan satu melaporkan instance dari jangka panjang kelangsungan hidup setelah vitrifikasi (18). dengan pemulihan dari organ menunjukkan setelah pendinginan hingga di bawah . termasuk molekul mekanisme kegagalan kriopreservasi (21). termasuk otak irisan (19). 17). VM3 adalah vitrifikasi solusi generasi kelima (6). dan pelestarian histologis dari sistem yang lebih besar (20). kombinasi tersebut DMSO. apa yang disebut qv * (6). generasi 6 : Ditemukan bahwa cedera mengerikan. menghasilkan larutan vitrifikasi Veg. formamida.40 º C sementara cryoprotected dengan vitrifikasi sebuah solusi (11). pembuluh darah jaringan (13). Krioprotektan toksisitas yang muncul sebagai akhir perbatasan Cryobiology.dengan DMSO amida seperti asetamida atau formamida. generasi 5 : Penggunaan polimer es memblokir diizinkan lebih jauh penurunan toksisitas oleh mengurangi konsentrasi krioprotektan semua diperlukan untuk mencapai vitrifikasi. tulang rawan (14). Vitrifikasi juga menunjukkan utilitas untuk layak pelestarian irisan jaringan yang beragam.

You're Reading a Free Preview

Download
scribd
/*********** DO NOT ALTER ANYTHING BELOW THIS LINE ! ************/ var s_code=s.t();if(s_code)document.write(s_code)//-->