Makalah Pengantar Ensimologi

Purifikasi dan Strategi Enzim

Disusun oleh: Ari Wardani Ahsanatun Syahidawati (10/300464/PN/12043) (09/288778/PN/11863)

FAKULTAS PERTANIAN UNIVERSITAS GADJAH MADA 2012

B. Mengembangkan penelitian enzim yang bermanfaat untuk semua ranah kehidupan. Tujuan Tujuan penulisan makalah ini adalah untuk mengetahui pemurnian enzim dan strategi pemurniannya. Tujuan pemurnian ada 2 yaitu tujuan komersial dan tujuan penelitian penelitian. Manfaat Penulisan makalah ini diharapkan dapat memeberikan manfaat berupa: a.BAB I PENDAHULUAN A. Oleh karena itu perlu dilakukan pemurnian enzim. Pemurnian enzim adalah suatu kegiatan memisahkan enzim yang diinginkan dari senyawa lain yang tidak dikehendaki. Aktivitas enzim sangat tergantung pada kemurniannya. Latar Belakang Enzim merupakan salah satu bagian yang penting dalam kehidupan manusia. Hal ini mengingat enzim sebagai katalisator mampu untuk mempercepat reaksi. Kemurnian enzim ynag tinggi akan membuat aktiviatas enzim semakin tinggi. C. pemekatan dan fraksinasi. Pemurnian enzim dilakukan dengan strategi khusus yang terdiri terdiri dari beberapa tahap yaitu ekstraksi. .Tahap-tahap pemurnian bergantung pada tujuan akhir pemurnian. Mengetahui cara-cara yang efektif untuk memurnikan enzim b. Perannya begitu penting dan tidak bisa diabaikan.

Mengingat enzim itu berada dalam tubuh makhluk hidup seperti di dalam sel tumbuhan. minimal ada tiga strategi dalam pemurnian enzim yang harus diperhatikan yaitu: 1. hewan. Pada mulanya jika ingin mendapatkan suatu enzim untuk keperluan tertentu. Selain itu perlu diperhatikan pula sumber dari enzim. Namun akhirnya cara tersebut dipandang tidak efektif sehingga dicari berbagai cara untuk mendapatkan enzim murni. 2. dan fraksinasi. Ekstraksi Enzim Enzim dapat didapatkan secara murni melalui ekstraksi. Dengan mengetahui enzim yang didapatkan adalah enzim murni. maka perlu mengambil suatu sel dari bagian makhluk hidup. Harris (1989) menyebutkan. maka diharapkan dapat diperoleh data yang valid dalam penggunaannya. Menurut Channel (1998) pemurnian berarti membebaskan suatu bahan dari bahan-bahan lain yang tidak diinginkan atau sering disebut pengotor. metode homogenasi yang digunakan dan metode pemisahannya. Bebrapa hal yang perlu diperhatikan diantaranya mendeterminasikan enzim yang tidak diketahui dalam bahan. pemekatan. Kuantitas Pemakaian akhir dari protein murni akan menentukan kuantitas enzim yang diperlukan 3. Dijelaskan bahwa tingkat kemurnian suatu produk enzim berbeda-beda tergantung pada metode yang digunakan.BAB II PEMBAHASAN A. . Secara umum permunian enzim bisa dibagi menjadi tiga bagian yaitu ekstraksi. Ekonomis Merupakan hal penting bila akandigunakan di industry atau dalam skala laboratorium. Pengertian Pemurnian Suatu enzim tidak bisa dapat ditemukan langsung berbentuk enzim murni. Kualitas Perlu tindakan untuk mempertahankan aktivitas protein dengan cara mengurangi proteolisis dan denaturasi. B. dan manusia.

karena prosedur inirelatif . Menyangkut pertanyaan pertama. Elektroforesis gel poliakrilamid (PAGE = Poly Acrylamide Gel Electrophoresis) merupakan metode yang sering digunakan dalam analisis sampelbiologis karena kemampuannya dalam memisahkan campuran protein yangkompleks dengan baik dan resolusi yang tinggi (Bollag dan Edelstein. misalnya menggunakan garam. 1991). Elektroforesis pada gel poliakrilamida adalah metode yang paling sering digunakan untuk karakterisasi protein dan campuran protein.pengendapan organik (misalnya aseton atau etanol). Fraksinasi Enzim Fraksinasi merupakan tahap akhir dalam pemurnian enzim. enzim tertentu hanya diproduksi secara spesifik oleh sel tubuh tertentu. Mengapa harus mencoba mengisolasi? Minimal dengan dua pertanyaan ini. Elektroforesis adalah suatu teknik untuk memisahkan molekul-molekul berdasarkan muatan dan berat molekul.polimer organik. berikut ini beberapa jawaban yang relevan antara lain beberapa enzim yang tidak diketahui sangat penting dalam aktivitas metabolisme. Pemekatan Enzim Pemekatan enzim dilakukan untuk memisahkan konsentrat protein dari komponen biomolekul lainnya diantaranya karbohidrat. yang bertujuan untuk memisahkan enzim dari protein non enzim lainnya. lemak dan asam nukleat. Apa yang harus diisolasi? 2. meliputi kromatografi kolom dan elektroforesis. Metode fraksinasi umum untuk pemurnian enzim. produkzi dengan jumlah enzim yang maksimal dapat digunakan untuk kepentingan yang akan datang dan tes biologi yang lebih ekstensif. dan semua kejadian kimiawi dalam tubuh organism memiliki karakter tersendiri. dan imunopresipitasi yang dapat menyebabkan denaturasi protein. D. lebih khusus lagi untuk menyediakan bahan yang cukup diizinkan untuk melakukan pengecekan struktur enzim. Ada dua metode pemekatan enzim yaitu analitik dan preparatif (penyiapan). Alasan. 1991). Yaitu: 1. ultrafiltrasi dan liofilisasi (Bollag dan Edelstein. C.Jika seorang akan mengekstraksi suatu enzim ada dua hal yang mesti dipertanyakan karena menyangkut tentang pengaturan eksraksi. pelarut organik. seseorang bisa merancang desain ekstraksinya.alasan yang bisa menjawab diantaranya untuk memurnikan sejumlah enzim bisa dilakukan sebagian atau keseluruhan. Metode preparatif bertujuan untuk tetap mempertahankan aktifitas enzim. Metode analitik menggunakan pengendapan asam (misalnya asam trikloroasetat).

Misalkan eluate dari kolom silica memiliki volume 10 ml diharapkan bisa dibagi menjadi 20 x 5 ml fraksinasi. Mekanisme pada elektroforesis gel poliakrilamida sodium dodesil sulfat (SDS-PAGE) adalah protein akan bereaksi dengan SDS yang merupakan deterjen anionik membentuk kompleks berikatan dengan SDS. Penambahan deterjen Triton X-100 akan melepaskan SDS sehingga protein kembali melipat (renaturasi). E. Semakin kecil jumlah yang difraksinasi diharapkan memiliki kandungan enzim yang lebih murni. Di bawah ini merupakan skema untuk memurnikan enzim: . namun dalam kondisi tidak tereduksi. Jenis. sensitif dan kualitatif dalam menganalisis aktifitas enzim.cepat dan sensitif.jenis fraksinasi enzim bergantung pada individual sampel dan tujuan dari pemisahan. Kompleks protein yang bermuatan negatif ini kemudian akan muatan dan ukurannya secara elektroforesis di dalam dengan cara membandingkan nilai Berat molekul protein dapat diukur menggunakan protein standar terpisahkan berdasarkan yang telah diketahui berat molekulnya mobilitas relatifnya (Rf) (Bollag dan Edelstein 1991). Sebagai alternative digunakan berbagai metode untuk pemisahan meliputi HPLC ( high performance liquid chromatography). Zimografi adalah teknik elektroforesis untuk menetapkan aktifitas enzim secara in situ. Elektroforesis didefnisikan sebagai perpindahan partikel-partikel bermuatan karena pengaruh muatan medan listrik. Adapun substrat yang bisa digunakan untuk zimogram diantaranya kasein. Berbeda dengan SDS-PAGE. Biasanya sebuah kolom dijalankan eluate dibagi menjadi beberapa bagian mengikuti kandungan senyawa. gel pemisah zimografi mengandung substrat enzim yang akan dihidrolisis oleh enzim selama masa inkubasi. Hal ini juga mencegah terjadinya penghamburan target enzim. Enzim dipisahkan dalam gel denaturasi (SDS). gelatin dan lain-lain (Leber dan Balkwill 1997). Metode zimografi bersifat mudah. matriks gel. Strategi Purifikasi Enzim Secara ringkas enzim memiliki startegi untuk pemurniannya. dan dimonitori oleh sinar ultraviolet. Gel selanjutnya diwarnai sehingga molekul protein yang memiliki aktifitas tampak sebagai pita bening.

Skala komersial biasanya menggunakan metode separasi atau pemisahan. Setelah mendapatkan ekstrak suatu bahan maka langkah selanjutnya ialah untuk mendapatkan hasil akhir berupa enzim murni. Metode ini akan menghasilkan enzim murni. Jika tujuannya skala penelitian maka menggunakan dengan metode afinitas separasi. Hal ini bisa dilakukan melalui dua cara tergantung tujuannya yaitu skala komersial atau skala penelitian. Namun hal ini bisa disiasati dengan mengeksplorasi dari hewan-hewan laut khususnya untuk medapatkan jumlah yang besar. Enzim murni atau hampir murni dikehendaki . Misalkan kelenjar laktasi mamalia merupakan sumber yang bagus untuk asetil KoA karboksilase dan ginjal adalah sumber terbaik untuk mendapatkan enzim hidrolase semacam alkalin fosfat.a. Memang tidak semua bahan itu bisa disediakan dengan mudah mengingat kondisi gegografi dan ekonomi suatu tempat. Enzim kasar atau yang dimurnikan sebagian masih dapat digunakan untuk komersial. Coli dapat digunakan untuk mensintesis beta galaktosidase. Sumber Sumber untuk medapatkan suatu enzim begitu melimpah di muka bumi ini. Hasilnya akan mendapatkan enzim kasar. Selain itu pada E. Sumber yang sudah ditentukan lalu dilakukan homogenisasi sebagian atau pemecahan subseluler (organel sel). Namun jika diinginkan enzim murni dalam skala kecil perlu dilakukan perlakuan metode separasi yang kedua untuk mendapatkan jumlah yang lebih murni. Jika sumber bahan dilakukan homogenisasi total maka akan langsung mendapatkan ekstrak. Hal ini akan mendapatkan purifikasi organel. Metode ini dipilih mengingat biaya yang dikeluarkan sangat besar padahal dalam skala komersial hal yang harus diingat adalah minimalisasi biaya.

Pada sumber enzim dari tumbuhan mengandung sejumlah senyawa fenol yang memiliki pigment gelap. . Jaringan diambil sebagian kecil lalu dihomogenisasi dengan memutar pestle Teflon pada gelas mortar atau dengan blender berkecepatan tinggi. change in ionic strength. Selama homogenisasi bisa menghilangkan vakuola yang dapat menyebabkan kerusakan pada enzim.dalam penelitian atau dipakai dalam produk analitik. dan dialysis atau ultrafiltration dengan skala pada umumnya kecil. isoelektric focusing. jumlah. c. ekeltroforesis. kelarutan. Organel ini mengandung sejumlah enzim hidrolase seperti protease. Hal ini dapat menganggu sehingga pigmen dapat dihilangkan dengan diadsorpsi pada polimer polivinilpirolidon. Lalu jika yang menjadi pokok adalah kelarutannya maka metode yang dilakukan change in pH. dan covalent chromatography dengan target skala biasanya kecil. Metode Separasi Kesuksesan dari pemisahan enzim dapat ditentukan melalui ukuran. Homogenisasi Homogenisasi bertujuan untuk memecah sel dan mengekstrak isi yang dikandungnya. chromatofocusing. Berikut ini beberapa contoh metode yang digunakan: jika mengacu pada ukuran atau massa maka yang digunakan ialah metode centrifugasi. Sebagai contoh jaringan mamalia pada kenyataannya lebih mudah untuk dihomogenisasi daripada organisme lain. afnitas elution. Selanjutnya jika yang menjadi acuan kepolarannya maka dapat digunakan metode ion-exchange chromatography. b. Pilihan metode bergantung pada jenis jaringan atau organism yang digunakan sebagai sumber enzim. Sehingga perlu ditambahkan buffer yang dapat mencegah kerusakan. gel filtrasi. Bagian sel yang penting untuk diambil berupa lisosom. dan hydrophobic chromatography dengan skala yang ditargetkan biasanya skala kecil. dan posisi bagian ikatan enzim. dan penurunan dielektrik konstan dengan skalanya biasanya besar. Terakhir jika yang menjadi acuan adalah struktur enzimnya maka metode yang digunakan berupa afnitas kromatografi. immunoadsorption. Kemurnian ini sangat oenting karena akan berpengaruh pada validitas data yang diperoleh. Adapun tekanan yang digunakan sebagai teknik homogenisasi bergantung pada besar kesilnya sampel yang digunakan. dye-ligand chromatography.

3. J. Protein Methods. JP. M. Wiley-Liss. Singapore. Natural Product Isolation. 2. tumbuhan. Sedangkan starteginya dari sumber bahan enzim dihomogenisasi untuk mendapatkan ekstrak lalu dilakukan meode afnitas untuk mendapatkan enzim murni. Pemurnian enzim beertujuan untuk mendapatkan enzim murni dari bahan-bahan yang tersedia dalam jaringan makhluk hidup (hewan. New Jersey. Perlu pengujian di laboratorium untuk membuktikan teori yang ada. 1989. c. sehingga memudahkan peta konsep pemurnian enzim. manusia). Richard. b.BAB III PENUTUP A. B. DAFTAR PUSTAKA Channel. Chichester. Enzim yang akan dipurifikasi perlu dibuat semacam tabel. dan fraksinasi. and S. D. Pemurnian enzim dilakukan melalui tahap ekstraksi. Harris. Kesimpulan 1. 1998. Edelstein (1991). . namun pemurnian bergantung pada tujuan penggunaan enzim dan cara untuk memurnikan. Brisbane. Perlu perluasan berbagai teori yang ada sehingga bisa saling melengkapi informasi yang diperlukan. Saran Agar lebih baik maka berikut ini beberapa saran yang perlu diperhatika untuk menghasilkan karya sejenis yang lebih baik di masa yang akan datang: a. Toronto. pemekatan. (Leber dan Balkwill 1997). New York. Humana press. Atau jika ingin mendapatkan jumlah besar (skala industry) dari sumber bahan enzim dilakukan pemecahan subseluler sehingga didapatkan organel murni lalu diekstrak dan dipreparasi ganda sehingga didapatkan enzim murni. Bollag. Sumber-sumber enzim di muka bumi melimpah.

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful