Makalah Pengantar Ensimologi

Purifikasi dan Strategi Enzim

Disusun oleh: Ari Wardani Ahsanatun Syahidawati (10/300464/PN/12043) (09/288778/PN/11863)

FAKULTAS PERTANIAN UNIVERSITAS GADJAH MADA 2012

Hal ini mengingat enzim sebagai katalisator mampu untuk mempercepat reaksi. Tujuan Tujuan penulisan makalah ini adalah untuk mengetahui pemurnian enzim dan strategi pemurniannya. Mengetahui cara-cara yang efektif untuk memurnikan enzim b. Aktivitas enzim sangat tergantung pada kemurniannya. Mengembangkan penelitian enzim yang bermanfaat untuk semua ranah kehidupan. . Kemurnian enzim ynag tinggi akan membuat aktiviatas enzim semakin tinggi. Pemurnian enzim adalah suatu kegiatan memisahkan enzim yang diinginkan dari senyawa lain yang tidak dikehendaki. B. C. pemekatan dan fraksinasi. Tujuan pemurnian ada 2 yaitu tujuan komersial dan tujuan penelitian penelitian. Oleh karena itu perlu dilakukan pemurnian enzim. Pemurnian enzim dilakukan dengan strategi khusus yang terdiri terdiri dari beberapa tahap yaitu ekstraksi.Tahap-tahap pemurnian bergantung pada tujuan akhir pemurnian.BAB I PENDAHULUAN A. Manfaat Penulisan makalah ini diharapkan dapat memeberikan manfaat berupa: a. Perannya begitu penting dan tidak bisa diabaikan. Latar Belakang Enzim merupakan salah satu bagian yang penting dalam kehidupan manusia.

dan manusia. Namun akhirnya cara tersebut dipandang tidak efektif sehingga dicari berbagai cara untuk mendapatkan enzim murni. hewan. . minimal ada tiga strategi dalam pemurnian enzim yang harus diperhatikan yaitu: 1. Ekstraksi Enzim Enzim dapat didapatkan secara murni melalui ekstraksi. maka perlu mengambil suatu sel dari bagian makhluk hidup. metode homogenasi yang digunakan dan metode pemisahannya. B. Harris (1989) menyebutkan. Kualitas Perlu tindakan untuk mempertahankan aktivitas protein dengan cara mengurangi proteolisis dan denaturasi. Pada mulanya jika ingin mendapatkan suatu enzim untuk keperluan tertentu. Selain itu perlu diperhatikan pula sumber dari enzim.BAB II PEMBAHASAN A. Dengan mengetahui enzim yang didapatkan adalah enzim murni. Dijelaskan bahwa tingkat kemurnian suatu produk enzim berbeda-beda tergantung pada metode yang digunakan. Menurut Channel (1998) pemurnian berarti membebaskan suatu bahan dari bahan-bahan lain yang tidak diinginkan atau sering disebut pengotor. Ekonomis Merupakan hal penting bila akandigunakan di industry atau dalam skala laboratorium. Pengertian Pemurnian Suatu enzim tidak bisa dapat ditemukan langsung berbentuk enzim murni. Bebrapa hal yang perlu diperhatikan diantaranya mendeterminasikan enzim yang tidak diketahui dalam bahan. pemekatan. Kuantitas Pemakaian akhir dari protein murni akan menentukan kuantitas enzim yang diperlukan 3. dan fraksinasi. maka diharapkan dapat diperoleh data yang valid dalam penggunaannya. Secara umum permunian enzim bisa dibagi menjadi tiga bagian yaitu ekstraksi. Mengingat enzim itu berada dalam tubuh makhluk hidup seperti di dalam sel tumbuhan. 2.

C. Elektroforesis adalah suatu teknik untuk memisahkan molekul-molekul berdasarkan muatan dan berat molekul. Ada dua metode pemekatan enzim yaitu analitik dan preparatif (penyiapan). Pemekatan Enzim Pemekatan enzim dilakukan untuk memisahkan konsentrat protein dari komponen biomolekul lainnya diantaranya karbohidrat. Metode fraksinasi umum untuk pemurnian enzim. Menyangkut pertanyaan pertama.pengendapan organik (misalnya aseton atau etanol). Elektroforesis gel poliakrilamid (PAGE = Poly Acrylamide Gel Electrophoresis) merupakan metode yang sering digunakan dalam analisis sampelbiologis karena kemampuannya dalam memisahkan campuran protein yangkompleks dengan baik dan resolusi yang tinggi (Bollag dan Edelstein. 1991). yang bertujuan untuk memisahkan enzim dari protein non enzim lainnya. Metode preparatif bertujuan untuk tetap mempertahankan aktifitas enzim. karena prosedur inirelatif .polimer organik. berikut ini beberapa jawaban yang relevan antara lain beberapa enzim yang tidak diketahui sangat penting dalam aktivitas metabolisme. D. Mengapa harus mencoba mengisolasi? Minimal dengan dua pertanyaan ini. ultrafiltrasi dan liofilisasi (Bollag dan Edelstein. produkzi dengan jumlah enzim yang maksimal dapat digunakan untuk kepentingan yang akan datang dan tes biologi yang lebih ekstensif. seseorang bisa merancang desain ekstraksinya. misalnya menggunakan garam. 1991). Apa yang harus diisolasi? 2. dan imunopresipitasi yang dapat menyebabkan denaturasi protein. lemak dan asam nukleat.alasan yang bisa menjawab diantaranya untuk memurnikan sejumlah enzim bisa dilakukan sebagian atau keseluruhan. Metode analitik menggunakan pengendapan asam (misalnya asam trikloroasetat). pelarut organik. dan semua kejadian kimiawi dalam tubuh organism memiliki karakter tersendiri. Fraksinasi Enzim Fraksinasi merupakan tahap akhir dalam pemurnian enzim. lebih khusus lagi untuk menyediakan bahan yang cukup diizinkan untuk melakukan pengecekan struktur enzim. meliputi kromatografi kolom dan elektroforesis. Yaitu: 1. enzim tertentu hanya diproduksi secara spesifik oleh sel tubuh tertentu.Jika seorang akan mengekstraksi suatu enzim ada dua hal yang mesti dipertanyakan karena menyangkut tentang pengaturan eksraksi. Alasan. Elektroforesis pada gel poliakrilamida adalah metode yang paling sering digunakan untuk karakterisasi protein dan campuran protein.

Metode zimografi bersifat mudah. Gel selanjutnya diwarnai sehingga molekul protein yang memiliki aktifitas tampak sebagai pita bening. Sebagai alternative digunakan berbagai metode untuk pemisahan meliputi HPLC ( high performance liquid chromatography). Hal ini juga mencegah terjadinya penghamburan target enzim. Mekanisme pada elektroforesis gel poliakrilamida sodium dodesil sulfat (SDS-PAGE) adalah protein akan bereaksi dengan SDS yang merupakan deterjen anionik membentuk kompleks berikatan dengan SDS. Semakin kecil jumlah yang difraksinasi diharapkan memiliki kandungan enzim yang lebih murni. E. Zimografi adalah teknik elektroforesis untuk menetapkan aktifitas enzim secara in situ. Penambahan deterjen Triton X-100 akan melepaskan SDS sehingga protein kembali melipat (renaturasi). Kompleks protein yang bermuatan negatif ini kemudian akan muatan dan ukurannya secara elektroforesis di dalam dengan cara membandingkan nilai Berat molekul protein dapat diukur menggunakan protein standar terpisahkan berdasarkan yang telah diketahui berat molekulnya mobilitas relatifnya (Rf) (Bollag dan Edelstein 1991). sensitif dan kualitatif dalam menganalisis aktifitas enzim. Biasanya sebuah kolom dijalankan eluate dibagi menjadi beberapa bagian mengikuti kandungan senyawa. Misalkan eluate dari kolom silica memiliki volume 10 ml diharapkan bisa dibagi menjadi 20 x 5 ml fraksinasi. dan dimonitori oleh sinar ultraviolet. Jenis. Di bawah ini merupakan skema untuk memurnikan enzim: . Elektroforesis didefnisikan sebagai perpindahan partikel-partikel bermuatan karena pengaruh muatan medan listrik. matriks gel. Berbeda dengan SDS-PAGE. gelatin dan lain-lain (Leber dan Balkwill 1997).cepat dan sensitif. Strategi Purifikasi Enzim Secara ringkas enzim memiliki startegi untuk pemurniannya. Adapun substrat yang bisa digunakan untuk zimogram diantaranya kasein. Enzim dipisahkan dalam gel denaturasi (SDS). gel pemisah zimografi mengandung substrat enzim yang akan dihidrolisis oleh enzim selama masa inkubasi.jenis fraksinasi enzim bergantung pada individual sampel dan tujuan dari pemisahan. namun dalam kondisi tidak tereduksi.

Jika tujuannya skala penelitian maka menggunakan dengan metode afinitas separasi. Namun hal ini bisa disiasati dengan mengeksplorasi dari hewan-hewan laut khususnya untuk medapatkan jumlah yang besar. Hal ini bisa dilakukan melalui dua cara tergantung tujuannya yaitu skala komersial atau skala penelitian. Skala komersial biasanya menggunakan metode separasi atau pemisahan. Memang tidak semua bahan itu bisa disediakan dengan mudah mengingat kondisi gegografi dan ekonomi suatu tempat. Coli dapat digunakan untuk mensintesis beta galaktosidase. Selain itu pada E. Jika sumber bahan dilakukan homogenisasi total maka akan langsung mendapatkan ekstrak. Hal ini akan mendapatkan purifikasi organel. Namun jika diinginkan enzim murni dalam skala kecil perlu dilakukan perlakuan metode separasi yang kedua untuk mendapatkan jumlah yang lebih murni.a. Hasilnya akan mendapatkan enzim kasar. Setelah mendapatkan ekstrak suatu bahan maka langkah selanjutnya ialah untuk mendapatkan hasil akhir berupa enzim murni. Metode ini dipilih mengingat biaya yang dikeluarkan sangat besar padahal dalam skala komersial hal yang harus diingat adalah minimalisasi biaya. Enzim murni atau hampir murni dikehendaki . Sumber Sumber untuk medapatkan suatu enzim begitu melimpah di muka bumi ini. Misalkan kelenjar laktasi mamalia merupakan sumber yang bagus untuk asetil KoA karboksilase dan ginjal adalah sumber terbaik untuk mendapatkan enzim hidrolase semacam alkalin fosfat. Sumber yang sudah ditentukan lalu dilakukan homogenisasi sebagian atau pemecahan subseluler (organel sel). Metode ini akan menghasilkan enzim murni. Enzim kasar atau yang dimurnikan sebagian masih dapat digunakan untuk komersial.

Metode Separasi Kesuksesan dari pemisahan enzim dapat ditentukan melalui ukuran. dan covalent chromatography dengan target skala biasanya kecil. afnitas elution. isoelektric focusing. chromatofocusing. Pilihan metode bergantung pada jenis jaringan atau organism yang digunakan sebagai sumber enzim. Jaringan diambil sebagian kecil lalu dihomogenisasi dengan memutar pestle Teflon pada gelas mortar atau dengan blender berkecepatan tinggi. Sehingga perlu ditambahkan buffer yang dapat mencegah kerusakan. dye-ligand chromatography. ekeltroforesis. kelarutan. Homogenisasi Homogenisasi bertujuan untuk memecah sel dan mengekstrak isi yang dikandungnya. Selanjutnya jika yang menjadi acuan kepolarannya maka dapat digunakan metode ion-exchange chromatography. dan hydrophobic chromatography dengan skala yang ditargetkan biasanya skala kecil. Berikut ini beberapa contoh metode yang digunakan: jika mengacu pada ukuran atau massa maka yang digunakan ialah metode centrifugasi. b. Organel ini mengandung sejumlah enzim hidrolase seperti protease. jumlah. change in ionic strength. dan penurunan dielektrik konstan dengan skalanya biasanya besar. gel filtrasi.dalam penelitian atau dipakai dalam produk analitik. Selama homogenisasi bisa menghilangkan vakuola yang dapat menyebabkan kerusakan pada enzim. Adapun tekanan yang digunakan sebagai teknik homogenisasi bergantung pada besar kesilnya sampel yang digunakan. Hal ini dapat menganggu sehingga pigmen dapat dihilangkan dengan diadsorpsi pada polimer polivinilpirolidon. Bagian sel yang penting untuk diambil berupa lisosom. Terakhir jika yang menjadi acuan adalah struktur enzimnya maka metode yang digunakan berupa afnitas kromatografi. Kemurnian ini sangat oenting karena akan berpengaruh pada validitas data yang diperoleh. immunoadsorption. dan dialysis atau ultrafiltration dengan skala pada umumnya kecil. c. Pada sumber enzim dari tumbuhan mengandung sejumlah senyawa fenol yang memiliki pigment gelap. dan posisi bagian ikatan enzim. Sebagai contoh jaringan mamalia pada kenyataannya lebih mudah untuk dihomogenisasi daripada organisme lain. Lalu jika yang menjadi pokok adalah kelarutannya maka metode yang dilakukan change in pH. .

pemekatan. . Humana press. sehingga memudahkan peta konsep pemurnian enzim. Saran Agar lebih baik maka berikut ini beberapa saran yang perlu diperhatika untuk menghasilkan karya sejenis yang lebih baik di masa yang akan datang: a. Singapore. Bollag. Perlu pengujian di laboratorium untuk membuktikan teori yang ada. DAFTAR PUSTAKA Channel. New Jersey. 3. Atau jika ingin mendapatkan jumlah besar (skala industry) dari sumber bahan enzim dilakukan pemecahan subseluler sehingga didapatkan organel murni lalu diekstrak dan dipreparasi ganda sehingga didapatkan enzim murni. manusia). J. JP. and S. Sedangkan starteginya dari sumber bahan enzim dihomogenisasi untuk mendapatkan ekstrak lalu dilakukan meode afnitas untuk mendapatkan enzim murni. Edelstein (1991). Perlu perluasan berbagai teori yang ada sehingga bisa saling melengkapi informasi yang diperlukan. Pemurnian enzim dilakukan melalui tahap ekstraksi. (Leber dan Balkwill 1997). c. Sumber-sumber enzim di muka bumi melimpah. Toronto. dan fraksinasi. Natural Product Isolation.BAB III PENUTUP A. Enzim yang akan dipurifikasi perlu dibuat semacam tabel. b. Wiley-Liss. 2. Kesimpulan 1. M. B. tumbuhan. Pemurnian enzim beertujuan untuk mendapatkan enzim murni dari bahan-bahan yang tersedia dalam jaringan makhluk hidup (hewan. Protein Methods. 1998. Harris. namun pemurnian bergantung pada tujuan penggunaan enzim dan cara untuk memurnikan. Brisbane. Richard. Chichester. New York. 1989. D.

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful