Laporan Praktikum Mikrobiologi

Nama Nim Hari/tanggal Waktu Asdos

: Restu Fauzia Adila : J3L11009 : Rabu/21 september 2011 : 11:00 – 12:40 : Geni A.Z M .Bagja

PJP

: Emil Wahdi

TEKNIK PEMINDAHAN BIAKAN MIKROBA SECARA AKSEPTIK

PROGRAM KEAHLIAN ANALISIS KIMIA PROGRAM DIPLOMA INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR

Ada tiga bentuk dasar bakteri. binatang atau tumbuhan. Untuk melakukan penanaman bakteri (inokulasi) terlebih dahulu diusakan agar semua alat yang ada dalam hubungannya dengan medium agar tetap steril. Untuk mencegah mikroorganisme luar yang tidak dikehendaki masuk ke dalam biakan murni. metode pour plate/cawan tuang Menurut Dwijoseputro (1998) Metode biakan murni atau penanaman bakteri dapat disebut juga metode inokulasi yaitu pekerjaan memindahkan bakteri dari medium yang lama ke medium yang baru dengan tingkat ketelitian yang sangat tinggi. besifat saprofitik. Bakteri merupakan mikrobia uniseluler yang termasuk dalam kelas Shizomycetes. atau melalui tersentuhnya media atau permukaan tabung bagian dalam oleh benda yang belum disterilkan. hal ini agar menghindari terjadinya kontaminasi. dan melilit (spiral) (Irianto 2007). Ada yang hidup bebas. perlu digunakan teknik aseptik. parasit. Pada umumnya bakteri tersebar luas di alam. oleh karena itu mikroorganisme luar yang tidak dikehendaki dapat masuk ke dalam biakan murni melalui aliran udara. Ada beberapa metode untuk memindahkan biakan murni dari satu wadah ke wadah yang lain secara aseptik: a. Menurut Soetarto (2008). batang (bacillus). metode streak/gores b.ada beberapa jenis bakteri bersifat fotosinteteik. atau patogen pada manusia. dimana semua peralatan maupun media pertumbuhan yang akan digunakan pada teknik ini harus dalam keadaan steril/aseptik. kontak tangan yang tercemar. yaitu bentuk bulat (coccus). .2011 Pendahuluan Mikroorganisme terdapat di mana-mana. metode spread/sebar c.

dimana dalam proses pembuatannya harus disterilisasi dan menerapkan metode aseptis untuk menghindari kontaminasi pada media. isolasi. air desitilat 1. Mikroba yang memfermentasi laktosa menghasilkan koloni dengan inti berwarna gelap dengan kilap logam. Agar dilarutkan dengan komposisi lain dan disterilisasi dengan autoklaf pada 121°C selama 15 menit. dan Salmonella.coli. untuk membawa stok kultur. pepton 10 g. aureus. sewage. Kemudian siapkan wadah sesuai yang dibutuhkan. Nutrient Agar Nutrien agar adalah medium umum untuk uji air dan produk dairy. Nutrient Broth Nutrient broth merupakan media untuk mikroorganisme yang berbentuk cair. Sedangkan mikroba lain yang dapat tumbuh koloninya tidak berwarna. jika media ini digunakan pada tahap awal karena kuman lain juga tumbuh terutama P. NA juga digunakan untuk pertumbuhan mayoritas dari mikroorganisme yang tidak selektif. Untuk komposisi nutrien agar adalah eksrak beef 10 g.Media berfungsi untuk menumbuhkan mikroba. NaCl 5 g. EMBA (Eosin Methylene Blue Agar) Media Eosin Methylene Blue mempunyai keistimewaan mengandung laktosa dan berfungsi untuk memilah mikroba yang memfermentasikan laktosa seperti S. Namun demikian. menguji sifat-sifat fisiologi dan perhitungan jumlah mikroba. . dalam artian mikroorganisme heterotrof. dan untuk mengisolasi organisme dalam kultur murni. memperbanyak jumlah. Intinya sama dengan nutrient agar. pepton. aerugenosa. P. untuk pertumbuhan sampel pada uji bakteri. dan agar. Bagaiamana pun media ini sangat baik untuk mengkonfirmasi bahwa kontaminan tersebut adalah E. Berikut ini beberapa media yang sering digunakan secara umum dalam mikrobiologi. Adanya eosin dan metilen blue membantu mempertajam perbedaan tersebut. produk pangan. Media ini merupakan media sederhana yang dibuat dari ekstrak beef. Aerugenosa dan Salmonella sp dapat menimbulkan keraguan.000 ml dan 15 g agar/L. Na merupakan salah satu media yang umum digunakan dalam prosedur bakteriologi seperti uji biasa dari air.

Nutrient Broth (NB). agar) hingga membentuk suspensi 22. dextrose. Pada APDA jadi ini juga ditambah asam tartarat.bentuk koloni bakteri yang tumbuh. Adanya asam tartarat dan pH rendah maka pertumbuhan bakteri terhambat. pembakar spirtus. kawat ose.Plate Count Agar (PCA) PCA digunakan sebagai medium untuk mikroba aerobik dengan inokulasi di atas permukaan. Alat dan bahan Alat yang digunakan ialah tabung reaksi beserta tutupnya. Campurkan ekstrak kentang dalam agar lalu ditambahkan glukosa dan diaduk rata. korek api.5 g/L kemudian disterilisasi pada autoklaf (15 menit pada suhu 121°C). APDA dibuat dengan merebus kentang selama 1 jam/45 menit. PCA dibuat dengan melarutkan semua bahan (casein enzymic hydrolisate. Media PCA ini baik untuk pertumbuhan total mikroba (semua jenis mikroba) karena di dalamnya mengandung komposisi casein enzymic hydrolisate yang menyediakan asam amino dan substansi nitrogen komplek lainnya serta ekstrak yeast menyuplai vitamin B komplek APDA Media APDA berfungsi untuk menumbuhkan dan menghitung jumlah khamir dan yeast yang terdapat dalam suatu sampel. . dan rak tabung. Khamir dan yeast akan tumbuh dengan optimal pada media yang sesuai. cawan petri. Tujuan Praktikum bertujuan melatih mahasiswa dalam menguasai teknik pemindahan bakteri secara aseptic pada medium steril dan mengetahui serta mengamati bentuk. agar dilelehkan dalam 500 ml air. yeast extract. tissue. cawan petri yang sudah berisi koloni-koloni bakteri. alkohol 70%. dan aquades steril. Bahan yang digunakan ialah Nutrient Agar (NA).

Prosedur percobaan Sebelum praktikum dimulai dilakukan proses sterilisasi terlebih dahulu. dengan cara mencuci tangan dengan sabun kemudian meja dan tangan jangan lupa disemprotkan alkohol 70%. Gambar 1 Cara mensterilisasi meja kerja .

Tutup tabung dibuka namun tabung tetap berada disekitar api dan tutup dipegang tidak boleh diletakkan di meja lalu panaskan tabung dengan cara tabung diputar pelan-pelan.Setelah proses sterilisasi selesai dilakukan proses pemindahan biakan secara akseptik melalui tabung. Tabung disimpan selam 24 jam setelah itu diamati cairan yang terdapat dalam tabung keruh atau tidak jika dibandingkan dengan standar NB steril. setelah itu kawat ose yang telah dipanaskan dicelupkan ke dalam tabung dan secepat mungkin tabung kedua yang berisi NB diambil dan dipanaskan setelah itu kawat ose tersebut dicelupkan ke dalam tabung berisi NB tersebut. Pertama-tama pembakar Bunsen dinyalakan. Dua buah tabung dan kawat ose disiapkan. lalu tabung ditutup rapat. Tabung pertama berisi aquades steril dan tabung kedua berisi Nutrient Broth (NB) steril. Gambar 2 Cara pemindahan biakan bakteri secara aseptic . bersamaan dengan itu kawat ose dipanaskan pada nyala api. Tabung pertama yang berisi aquades dipegang dekat pada api Bunsen.

Gambar 3 Cara pemindahan bakteri pada media cawan .Pemindahan metode pada cawan petri dilakukan dengan cara menyiapkan dua buah cawan petri dan kawat ose terlebih dahulu. dengan segera kawat ose digoreskan ke permukaan cawan secara sinambung atau zig-zag lalu ditutup. Setelah itu diamkan kawat ose yang sudah dipanaskan tersebut sebentar. Cawan petri yang berisi koloni bakteri dipanaskan sebentar sambil kawat ose dipanaskan juga. Cawan petri disimpan selama 24 jam. setelah itu cawan petri kedua yang berisi Plate Count Agar (PCA) dipanaskan sebentar lalu dibuka. cawan petri berisi koloni bakteri dibuka dan diambil sedikit bakterinya dengan menggunakan kawat ose. Cawan petri yang pertama berisi koloni-koloni bakteri dan cawan petri yang kedua berisi Plate Count Agar (PCA). setelah itu diamati yang terjadi.

. Medium biakan yang digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme terbagi dalam bentuk padat. perbanyakan. Medium merupakan suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi atau zat-zat hara (nutrien) yang digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme di atas atau di dalamnya. dan perhitungan jumlah mikroorganisme (Waluyo L 2008). Media NB (Nutrien Broth) Hasil Pengamatan Media cair menjadi keruh (-) gambar Media cair secara aseptic (+) 2. pengujian sifat-sifat fisiologis. semi-padat dan cair. NA (Nutrien Agar) Pemindahan secara aseptik Pembahasan Mikroba merupakan mikroorganisme yang dapat tumbuh secara bebas dan dapat berpindah dengan cepat.Data dan Hasil Pengamatan Tabel 1 Hasil pengamatan pemindahan biakan mikroba secara aseptik No 1. selain itu medium juga dapat dipergunakan pula untuk isolasi.

Sterilisai secara mekanik (filtrasi) menggunakan suatu saringan yang berpori sangat kecil 0. c. Biakan murni (pure culture) adalah biakan yang hanaya terdiri dari satu spesies microbe atau hanya hasil perbanyakan dari satu sel mikrobia. Uap air panas: konsep ini mirip dengan mengukus.22 mikron atau 0. misal nya larutan enzim dan antibiotik. baik yang mengganggu atau merusak media atau mengganggu kehidupan dan proses yang sedang dikerjakan. Penyelidikan spesies mikrobia selalu didsarkan atas sifat biakan murni spesies tersebut. contoh alat : jarum inokulum. batang L. Sterilisasi panas kering cocok untuk alat yang terbuat dari kaca misalnya erlenmeyer. fisik dan kimiawi. pinset. tabung reaksi dll. Pemijaran (dengan api langsung): membakar alat pada api secara langsung. Macam-macam sterilisasi Pada prinsipnya sterilisasi dapat dilakukan dengan 3 cara yaitu secara mekanik.Steril artinya tidak didapatkan mikroba yang tidak diharapkan kehadirannya. b. 2. dll. Pemanasan a. Oleh sebab itu diperlukan pemisahan atau pemeliharaan digunakan medium dan alat yang steril (Waluyo 2008). Uap air panas bertekanan : menggunalkan autoklaf . Bahan yang mengandung air lebih tepat menggungakan metode ini supaya tidak terjadi dehidrasi. Proses ini ditujukan untuk sterilisasi bahan yang peka panas. 1. Sterilisasi secara fisik dapat dilakukan dengan pemanasan & penyinaran. Panas kering: sterilisasi dengan oven kira-kira 60-1800C.45 mikron) sehingga mikroba tertahan pada saringan tersebut. d. Setiap proses baik fisika maupun kimia dan mekanik yang membunuh semua bentuk hidup terutama mikroorganisme disebut sterilisasi.

Metode yang digunakan pada percobaa pemindahan mikroba ini adalah dengan metode goresan (stereak) yang bertujuan mengisolasi mikroorganisme dari campurannya atau meremajakan kultur ke dalam medium baru. Pinset. misalnya untuk membunuh mikroba yang menempel pada permukaan interior Safety Cabinet dengan disinari lampu UV 3. batang L. Hal ini dilakuka dengan menggoreskam bakteri yang akan dipindahkan pada media batu dengan bentuk zig-zag Berdasarkan hasil pengamatan pada media percobaan bakteri yang dipindahkan telah dilakukan secara aseptik karena pada tabung yang berisi medium tidak berubah menjadi keruh sedangkan pada media cawan petri tidak ada terlihat bakteri lain yang tumbuh selain pada garis zig-zag pada saat pemindah bakteri. Usahakan bagian alat yang diharapkan dalam kondisi steril didekatkan ke bagian api. Untuk memperoleh hasil yang baik maka harus dilakukan hal-hal seperti berikut : Sebelum membuka ruangan atau bagian steril di dalam tabung/cawan/erlenmeyer sebaiknya bagian mulut (bagian yang memungkinkan kontaminan masuk) dibakar/dilewatkan api terlebih dahulu.Penyinaran dengan UV Sinar Ultra Violet juga dapat digunakan untuk proses sterilisasi. Sterilisaisi secara kimiawi biasanya menggunakan senyawa desinfektan antara lain alkohol. dll dapat disemprot dengan alkohol terlebih dahulu lalu dibakar. Ujung jarum inokulum yang sudah dipijarkan harus ditunggu dingin dahulatau dapat ditempelkan tutup cawan bagian dalam untuk mempercepat transfer panas yang terjadi. .

Dasar-Dasar Mikrobiologi.Simpulan Berdasarkan hasil pengamatan dapat disimpulkan bahwa pemindahan hasil biakan bakteri harus dilakukan pada medium yang steril agar terjadi biakan murni. (25 september 2011 20:15 PM) Waluyo. Yrama Widya.2008.Universitas Gadjah Mada. K. 2007. Soetarto. [terhubung berkala].Mikrobiologi.Malang: UMM Press: . Daftar Pustaka Dwidjoseputro D.Teknik Metode Dasar Mikrobiologi. E. Mikrobiologi. http:/Fuadfathir.S. Mikrobiologi Fakultas Biologi . 1998. Berdasarkan hasil pengamatan percobaan telah dilakukan secara sterilisasi karna pada biakan murni hanya tterdapat satu spesies mikrobia.multiply. Yogyakarta rianto.L.2008.com/jurnal/item. Fathir F 2009. Malang: Djambatan. Bandung.

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful