Cara Pewarnaan gram Dari sampel langsung, dengan pertumbuhan koloni yang berumur 1 x 24 jam dibuat pewarnaan gram

dengan cara: a) Dibuat sediaan pada kaca obyek, dengan meneteskan 1 tetes NaCl fisiologis dan ditambahkan 1-2 koloni b) Dilebarkan dan difiksasi diatas nyala api bunsen c) Setelah kering, dituangkan gentiaan violet (gram A), dibiarkan selama ±3 menit, lalu dicuci dengan air mengalir. d) Setelah itu dituangkan lugol (gram B), dan dibiarkan 45 sampai 60 detik, lalu dicuci dengan air mengalir. e) Dicelupkan dalam benjana yang berisi alkohol 96% (Gram C), digoyang-goyang selama 30 detik atau sampai warna zat ungu hilang, lalu dicuci dengan air mengalir. f) Diwarnai dengan air fuchsin (gram D), selama 1 sampai 2 menit, lalu dicuci dengan air mengalir dan dikeringkan. g) Preparat yang sudah kering diamati dibawah mikroskop, dengan penambahan oil emersi mengunakan lensa pembesaran 100x . Uji reaksi biokimia dan tes gula-gula serta pengamatan pada kuman basil gram negatif 1) TSIA (Tripel Sugar Iron Agar) 1 sampai 2 koloni diambil pada media pembiakan, kemudian ditusuk dan digores pada media TSIA. 2) SC (Simon Citrat) 1 sampai 2 koloni diambil pada media pembiakan, kemudian digores pada media SC. 3) SIM (Sulfur, Indol, Motil) 1 sampai 2 koloni diambil pada media pembiakan, kemudian digores pada media SIM. 4) Urea 1 sampai 2 koloni diambil pada media pembiakan, kemudian digores pada media Urea. 5) Mr/Vp (metil red / voges proskauer) 1 sampai 2 koloni diambil pada media pembiakan, kemudian digerus, lalu homogenkan pada media Mr/Vp. 6) Tes gula-gula (glukosa,laktosa,Sokrosa) 1 sampai 2 koloni diambil pada media pembiakan, kemudian digores pada media. Setelah semua di tanam pada media uji reaksi biokimia dan tes gula-gula, diinkubasi pada suhu 35 ºC - 37ºC selama 18-24 jam dan diamati dengan perbandingan tabel.

Merah=asam = K (simbol) Kuning=basa = A (simbol) 3. Ditambahkan 0. terlihat pergerakan kuman seperti awan. Urea Diamati perubahan warna pada media. 5. pembentukan gas dan H2S. persis payung terbalik berarti motil positif dan pada indol ditambahkan 5 tetes reagen kovac. merah/ merah). terjadi perubahan warna pada media urea positif.4) Mr positif. apabila terbentuk warna hitam (sulfur) berarti H2S positif. sukrosa) Diamati perubahan warna pada media. Ditambahkan 1 sampai 2 tetes metil red.Cara Pengamatan Reaksi uji biop kimia dan gula2 : 1. Mr/Vp (metil red / voges proskauer) Media Mr/Vp yang telah diinkubasi dibagi menjadi 2 dalam tabung bersih dan steril. maka terbentuk cincin merah berarti indol positif . SIM (Sulfur. pada motil. SC (Simon Citrat) Diamati perubahan warna media dari hijau menjadi biru menunjukan citrat positif. kuning/ kuning.Motil) Diamati warna pada media. bila terjadi perubahan warna terbentuk cincin merah (jangan dikocok). Tabung 2. terjadi perubahan warna pada media urea positif.laktosa.2 ml KOH 40%. 2. Tes gula-gula (glukosa. 6. . bila terbentuk cincin warna merah (pH <4.6ml alphanaftol 5% dan ditambah 0. berarti Vp positif. 4. Tabung 1. Endo agar / Mac Konkey (MC) Diamati makroskopis dan hasil fermentatif pada media Endo agar / MC.Indol. 7. TSIA (Tripel Sugar Iron Agar) Diamati bagian slant. butt (merah/ kuning.

Prinsip Pengamatan Reaksi uji biokimia dan gula2 : 1. artinya bakteri tidak mampu mengunakan urea dan perubahan pH menjadi media basa. laktosa dan sukrosa yang di tandai dengan perubahan warna media menjadi kuning dan terbentuknya gas yang ditandai dengan pecah atau terangkatnya media. Tes Mr. Tes H2S. 6. 2. TSIA (Tripel Sugar Iron Agar). Tes citrat. Tidak terbentuknya warna hitam pada daerah tusukan yang menandai bakteri tidak memiliki kemampuan dalam pembentukan hydrogen sulfit atau H2S. Tes motiliti. tidak terjadi perubahan warna dari hijau menjadi biru (negatif). setelah penambahan reagen kovac terbentuk cincin merah (positif) yang berarti bakteri mampu menguraikan protein karena mampu membentuk tryptopan sebagai sumber karbon. Tes Urea. 4. berati bakteri tidak mampu memanfatkan karbon sebagai sumber metabolisme dalam suasana basa. artinya bakteri tidak mempunyai enzim sitrat permiase yaitu enzim spesifik yang membawa sitrat kedalam sel. yang artinya bakteri mampu mempertahankan akhir dari meragi glukosa dan asam campuran. didapatkan hasil A/A atau kuning/kuning (asam/asam) berati bakteri mampu meragikan glukosa. 5. tidak terjadi perubahan warna pada media urea (negatif). . terbentuknya awan seperti payung terbalik pada daerah tusukan yang menandakan bakteri bergerak. 7. Tes Indol. terjadi pembentukan cincin merah pada media Mr setelah penambahan reagen metil red (positif). 3.

8. lakosa. glukosa. tidak terjadi pembentukan cincin merah pada media Vp setelah penambahan reagen barit dan omera (negatif). artinya asil akhir dari fermentasi bakteri berasal dari asetil metil carbional. terjadi perubahan warna pada setiap media (positif) yang artinya bakteri mampu memfermentasikan karbohidrat. . 9. sukrosa. Reaksi gula-gula. Tes Vp.

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful