P. 1
88690895 Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba Dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik

88690895 Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba Dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik

|Views: 338|Likes:
Published by negarayeni

More info:

Published by: negarayeni on May 14, 2012
Copyright:Attribution Non-commercial

Availability:

Read on Scribd mobile: iPhone, iPad and Android.
download as PDF, TXT or read online from Scribd
See more
See less

12/06/2013

pdf

text

original

Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012

PEMBUATAN MEDIA PERTUMBUHAN MIKROBA DAN TEKNIK PEMINDAHAN SECARA ASEPTIK

I. PENDAHULUAN 1.1 Latar Belakang Setiap mikroorganisme melakukan metabolisme untuk tumbuh dan berkembang biak. Hal ini menyangkut nutrisi yang berasal dari lingkungan dan memproses nutrisi tersebut sesuai dengan kebutuhan. Nutrisi yang tersedia bagi mikroba dapat dijumpai di tanah, sampah, air, dan bahan makanan sehingga di tempat tersebut mikroba dapat tumbuh. Di laboratorium, mikroba memperoleh nutrisi dari medium yang merupakan campuran bahan untuk menumbuhkan mikroba tersebut. Medium merupakan suatu bahan yang terdiri dari campuran nutrien atau zat makanan yang digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme mikroba. Medium yang digunakan sesuai dengan kebutuhan mikroorganisme. Untuk dapat tumbuh dengan baik mikroorganisme membutuhkan nutrien yang meliputi air, sumber energi, sumber karbon, sumber akseptor elektron, sumber mineral, faktor pertumbuhan, dan sumber nitrogen. Dengan mengetahui sifat, kebutuhan, makanan dari mikroorganisme maka kita dapat membuat medium yang cocok untuk menumbuhkan mikroorganisme tersebut secara laboratorium. Pembiakan mikroorganisme dalam laboratorium memerlukan medium yang berisi zat hara serta lingkungan pertumbuhan yang sesuai dengan mikroorganisme. 1.2 Tujuan Adapun tujuan dari praktikum kali ini adalah 1. Mengetahui cara pembuatan media pertumbuhan bagi mikroba. 2. Memahami teknik pemindahan secara aseptik dan berbagai sifat mikroba. 3. Mengamati pertumbuhan mikroorganisme secara visual. 1.3 Aplikasi Adapun aplikasi dari praktikum ini yaitu : a. Dapat mengembangbiakkan mikroba. b. Dapat menumbuhkan dan memperbanyak mikroba pada organisme lain. c. Digunakan untuk biodiesel dan untuk fermentasi etanol.

Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik

Untuk melarutkannya harus diasuk dan dipanasi. adalah media yang dibuat dari bahan-bahan yang diketahui dengan pasti yang biasanya banyak diproduksi oleh pabrik. Agar Agar dapat diperoleh dalam bentuk batangan. Media non sintetik/media alami. terdiri dari: a. agar tidak akan larut. Kegunaannya adalah sebagai pemadat (gelling) yang pertama kali digunakan oleh Fraw & Walther Hesse untuk membuat media. Berdasarkan susunan kimia. pencairan dan pemadatan berkalikali atau sterilisasi yang terlalu lama dapat menurunkan kekuatan agar. granula atau bubuk dan terbuat dari beberapa jenis rumput laut. media untuk menghitung mikroba dan media khusus. media diperkaya. Dengan media pertumbuhan dapat dilakukan isolat mikroorganisme menjadi kultur murni dan juga memanipulasi komposisi media pertumbuhannya. c. 3.(1) Media digolongkan menjadi: 1. dan media cair.Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012 II. terdiri dari media padat. b. media semi padat.(1) Bahan yang sering digunakan dalam pembuatan media : 1. Berdasarkan fungsi. terdiri dari media penguji. adalah media yang dibuat dari bahanbahan alami yang susunan kimianya tidak diketahui dengan pasti. media diferensial. Jika dicampur dengan air dingin. media selektif. terutama pada pH yang asam Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik . Mikroorganisme memanfaatkan nutrisi media berupa molekulmolekul kecil yang dirakit untuk menyusun komponen sel. 2. TINJAUAN PUSTAKA Media pertumbuhan mikroorganisme adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat makanan (nutrisi) yang diperlukan mikroorganisme untuk pertumbuhannya. Media sintetik/media siap saji. Media semi-sintetik adalah media yang tersusun oleh campuran bahanbahan alami dan bahan-bahan sintetis. Berdasarkan bentuknya.

fruktosa. plasenta dan daging sapi. protein atau senyawa bernitrogen lain. Dalam keadaan steril ( tidak ditumbuhi mikroorganisme lain ) 2. Sejumlah mikroba dapat menggunakan sumber N anorganik seperti urea 3.1%. protein dan asam organik. H. 1. lemak. glukosa. Vitamin-vitamin. sukrosa. unsur mikro seperti Fe. manitol. limpa. 2. 3. dll. Jasad heterotrof memerlukan sumber karbon organik antara lain dari karbohidrat. lactalbumin. P. (1) Adapula persyaratan tertentu bagi media. Peptone peptone adalah produk hidrolisis protein hewani atau nabati seperti otot.5. tegangan permukaan dan pH yang sesuai dengan kebutuhan mikroorganisme. gelatin dan kedelai. yaitu: 1. 3. Meat extract Meat extract mengandung basa organik terbuat dari otak. Yeast extract Yeast extract terbuat dari ragi pengembang roti atau pembuat alcohol. Mempunyai tekanan osmosis. Sumber nitrogen mencakup asam amino. 4. Karbohidrat Karbohidrat ditambahkan untuk memperkaya pembentukan asam amino dan gas dari karbohidrat. 5.Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012 2. Konsentrasi yang ditambahkan untuk analisis fermentasi adalah 0. liver. Jenis karbohidrat yang umumnya digunakan dalam amilum. Mg dan unsur pelikan/trace element. darah. Sumber karbon dan energi yang dapat diperoleh berupa senyawa organik atau anorganik sesuai dengan sifat mikrobanya. O. casein. susu. Yeast extract mengandung asam amino yang lengkap & vitamin ( Bcomplex). (1) Media harus mengandung unsur-unsur yang diperlukan untuk metabolisme sel yaitu berupa unsur makro seperti C. agar mikroorganisme dapat tumbuh dan berkembangbiak di dalam media tersebut. galaktosa. N. Harus mengandung unsur hara yang dibutuhkan untuk pertumbuhan dan perkembangan mikroorganisme.(1) Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik .

Stap culture : berisi dua atau lebih spesies mikroorganisme. : media padat dalam petridish. kontak tangan yang tercemar. Metode streak/gores Metode memindahkan mikroorganisme dengan cara menggoreskan ujung jarum ose loop pada permukaan media.Biakan murni adalah biakan yang hanya terdiri dari satu spesies tunggal Sehingga untuk mencegah mikroorganisme lain yang tidak dikehendaki perlu digunakan teknik aseptik. tetapi penanamannya dengan cara penusukan. Metode spread/sebar Metode memindahkan mikroorganisme dengan cara meneteskan biakan bakteri lalu disebarkan dengan alat spread dari gelas bentuk L secara merata. Plate culture 3. 5. (2) Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik . (1) Ada beberapa metode untuk memindahkan biakan murni dari satu wadah ke wadah yang lain secara aseptik. : media padat dalam tabung reaksi. Metode tusuk Metode tusuk yaitu dengan dengan cara meneteskan atau menusukan ujung jarum ose yang didalamnya terdapat inokolum. Metode pour plate/cawan tuang Metode memindahkan mikroorganisme dengan cara meneteskan biakan bakteri kemudian menuangkan larutan nutrient. 2.Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012 Mikroorganisme terdapat dimana-mana. Slant culture 4. kemudian dimasukkan ke dalam media. 4. : media padat dalam tabung reaksi. Mixed culture 2. Shake culture : media cair dalam tabung reaksi. (2) Ada beberapa macam media yang digunakan untuk inokulasi yaitu : 1. yaitu : 1. dimana semua peralatan maupun media pertumbuhan yang akan digunakan pada teknik ini harus dalam keadaan steril/aseptik. 3. oleh karena itu mikroorganisme lain yang tidak dikehendaki dapat masuk kedalam biakan murni melalui aliran udara. atau melalui tersentuhnya media atau permukaan tabung bagian dalam oleh benda yang belum disterilkan. : media cair dalam tabung reaksi yang penanamannya dikocok. Liquid culture 6.

EMBA (Eosin Methylen Blue Agar) Media Eosin Methylene Blue mempunyai keistimewaan mengandung laktosa dan berfungsi untuk memilah mikroba yang memfermentasikan laktosa seperti S. sebagai kaldu pemerkaya (preenrichment broth) untuk Salmonellae dan dalam mempelajari fermentasi laktosa oleh bakteri pada umumnya. aerugenosa. Nutrient Agar Nutrien agar adalah medium umum untuk uji air dan produk dairy. (3) Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik . dan produk susu. menumbuhkan. dalam artian mikroorganisme heterotrof. 3. Nutrient Broth Nutrient broth merupakan media untuk mikroorganisme yang berbentuk cair. makanan. MRSA (deMann Rogosa Sharpe Agar) MRSA merupakan media yang diperkenalkan oleh De Mann. 5. Media ini merupakan media sederhana yang dibuat dari ekstrak beef. dan mengisolasi jenis Lactobacillus dari seluruh jenis bahan.Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012 Beberapa media yang sering digunakan secara umum dalam mikrobiologi. dan Salmonella. yaitu : 1. aureus. NA juga digunakan untuk pertumbuhan mayoritas dari mikroorganisme yang tidak selektif. Intinya sama dengan nutrient agar. VRBA (Violet Red Bile Agar) VRBA digunakan untuk perhitungan kelompok bakteri Enterobactericeae. dan agar. Lactose Broth Lactose broth digunakan sebagai media untuk mendeteksi kehadiran koliform dalam air. Rogosa. 2. pepton. Potato Dextrose Agar (PDA) PDA digunakan untuk menumbuhkan atau mengidentifikasi yeast dan kapang 7. P. 4. 6. dan Shape (1960) untuk memperkaya.

3. 2.Coli Aquadest Agar Dextrose : sumber protein : sumber karbohidrat : jamur yang akan dibiakkan : bakteri yang akan dibiakkan : pelarut : pemadat : sumber mineral dan carbon Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik .1 Alat Dan Bahan ALAT 1. Ekstrak Daging Kentang Saccharomyces cereviceae E. 8. Autoclave Petridish Tabung reaksi Kapas dan kasa Alumunium foil Magnetic Stirer Kaca arloji Jarum ose Lampu spritus : pensteril alat dan media : media tempat pembiakan : tempat biakan mikroba : untuk menutup tabung reaksi : untuk menutup medium : pengaduk : wadah untuk menimbang bahan : memindahkan bakteri ke medium : membakar jarum : wadah : pengaduk : pemanas 10. 9. Hot plate BAHAN 1. Erlenmeyer 11. 5. 4. 3. 6. PROSEDUR PERCOBAAN 3. 2. 7. 4. 5.Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012 III. 7. Spatula 12. 6.

Pembuatan Medium Nutrient Agar ( NA ) Miring 1.Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012 3. medium steril Tabung reaksi berisi 5 mL medium diletakkan pada posisi miring dalam entkas Medium 10 mL dituang dalam pentridish Dibiarkan dingin dan padat Medium Nutrient Agar ( NA ) Miring Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik . termasuk medium sisa.2 Skema Kerja A.5 g kentang ekstrak daging Disaring dengan kain kasa + 125 mL aquadest Diaduk sampai homogen dan mendidih medium panas Dituang 5 mL medium ke dalam tabung reaksi dan 10 mL ke dalam pentridish Disterilkan dengan autoclave selama 20 menit pada suhu 1200 C.5 gram daging Dipotong kecil Dimasukkan ke dalam beaker gelas 250 mL + 125 mL aquadest Dipanaskan hingga mendidih Disiapkan erlenmeyer 250 mL berisi 3 g agar dan 2.

Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012 B. medium steril Tabung reaksi berisi 5 mL medium diletakkan pada posisi miring dalam entkas Medium 10 mL dituang dalam pentridish Dibiarkan dingin dan padat Medium Potatoes Dextrose Agar (PDA) Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik . termasuk medium sisa. Pembuatan Medium Potatoes Dextrose Agar (PDA) 30 gram kentang Dipotong kecil Dimasukkan ke dalam beaker gelas 250 mL + 150 mL aquadest Dipanaskan hingga mendidih Disiapkan erlenmeyer 250 mL berisi 3 g agar dan 3 g dextrose ekstrak kentang Disaring dengan kain kasa + 125 mL aquadest Diaduk sampai homogen dan mendidih medium panas Dituang 5 mL medium ke dalam tabung reaksi dan 10 mL ke dalam pentridish Disterilkan dengan autoclave selama 20 menit pada suhu 1200 C.

Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012 C. sumbat dengan kelingking tangan kanan Media steril Angkat. Teknik Pemindahan Mikroorganisme Secara Aseptik Tabung agar berisi biakan mikroba dan medium agar miring yang steril Pegang dengan tangan kiri Ambil jarum ose dengan tangan kanan Pijarkan jarum ose pada lampu spiritus hingga merah Biakan murni Diangkat. sumbat dengan jari manis tangan kanan Panaskan mulut tabung ( tabung biakan ngan murni dan tabung medium steril ) Biakan mikroba Ambil dengan jarum ose dan di inokulasikan ke media steril dengan cara zig-zag Panaskan mulut tabung dan tutup tabung dengan jari kanan Perlakuan sama utuk tabung berikutnya Amati pertumbuhan koloni Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik .

tabung berisi biakan Pegang dengan tangan kanan Buka tutup dan panaskan Pijarkan jarum ose dan ambil biakan dengan cara zig-zag dan tutup pentridis Tabung berisi biakan 1 mL air steril.Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012 Medium pentridis. digoyangkan dan dituang dalam pentridis Tambah medium Inkubasi dalam enkas Amati pertumbuhan koloni Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik .

Coli Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik . PDA untuk bakteri Saccharomyces cereviceae B. NA untuk bakteri E. HASIL DAN PEMBAHASAN 4.Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012 IV.1 Hasil Percobaan A.

Dimana mikroba yang sudah di didapatkan hasil : 1. terlebih dahulu disterilkan dalam autoclave selama 15 menit pada suhu 1210 C. yaitu pembuatan media pertumbuhan mikroba dan teknik pemindahan secara aseptik. Sedangkan untuk pertumbuhan digunakan daging dan ekstrak kentang sebagai sumber protein dan karbohidrat bagi mikroba. NA (Nutrien Agar) dibuat dari ekstrak daging yang berguna sebagai sumber protein.Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012 4. Agar-agar ini digunakan sebagai media semi padat. Pertumbuhan mikroorganisme pada biakan miring digunakan untuk mendapatkan biakan murni. Bentuk zig-zag bertujuan memenuhi syarat aseptik dan juga bertujuan untuk memperpanjang jalur pertumbuhan mikroba sehingga mikroba yang tumbuh akan lebih banyak. bakteri yang tumbuh kurang baik pada NA (Nutrient Agar) karena penggoresan yang kurang sempurna dan mungkin juga terkontaminasi oleh mikroba lainnya. 2. Sedangkan pertumbuhan mikroorganisme pada media petridish digunakan untuk mengembangbiakkan mikroorganisme sehingga dapat diperoleh dalam jumlah yang lebih banyak Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik .Coli. Ini ditandai dengan terbentuknya mikroba pada medium yang berkelompok dan berkoloni. Begitu juga pemindahan secara aseptik. NA disini berfungsi sebagai media pertumbuhan E. Sebelum menggunakan media. media pertumbuhan padat lainnnya yaitu PDA (Potatoes Dextrose Agar) yang dbuat dari ekstrak kentang yang berfungsi sebagai sumber karbohidrat dan media untuk pertumbuhan Saccharomyches cereviceae. Selain NA. Pada media petridish didapatkan mikroba yang cukup baik pada NA dan sangat baik pada PDA (Potatoes Dextrose Agar). media yang digunakan adalah agar-agar . Dimana mikroba tersebut diinkubasi selama beberapa hari yang dibuat pada medium dengan bentuk zig-zag. Ini bertujuan mikroba yang tidak diinginkan tidak ikut tumbuh.2 Pembahasan Pada praktikum kali ini pembuatan media pertumbuhan mikroba dan teknik pemindahan secara aseptik dilakukan pengamatan selama 3 hari. Pada biakan miring. Pada praktikum ini. harus dilakukan dengan steril.

Pada medium PDA jamur Saccharomyces cereviceae tumbuh dengan baik pada petridish dan tabung reaksi (biakan miring). b. Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik . 5.dapat disimpulkan sebagai berikut : a. Mikroba yang tumbuh dengan baik jika berkelompok dan berkoloni.Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012 V. disarankan sebagai berikut : a. Peralatan dan bekerja harus dalam keadaan steril Sewaktu penuangan media ke dalam petridish. yang di petridish maupun tabung reaksi .sedangkan pada NA bakteri E. usahakan cairan media menyebar merata menutupi permukaan petridish.2 Saran Untuk kelancaran praktiukum selanjutnya. KESIMPULAN DAN SARAN 5.Coli tidak tumbuh dengan baik.1 Kesimpulan Dari praktikum yang telah dilakukan. b.

Inokulasi Mikroba. www. 2008. Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik .Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012 DAFTAR PUSTAKA 1. Media Pertumbuhan Mikroorganisme. 2010. 3. 2. Dunia Mikro. Jenis Media Pembuatan Pemindahan Mikroba. Surbakti. Partic. Universitas Padjadjaran : Jatinangor. Li.scribd.com. Trianda.

Penggunaan perhitungan petrats transtes [sel] = jumlah sel 25 kotak x volume kotak x pengenceran 1 kotak = 1 mm3 c.medium semipadat b.Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012 JAWABAN PERTANYAAN 1.medium selektif . Jenis-jenis media pertumbuhan.medium kering . yaitu : a.medium non sintetik 2.medium diferensial .medium padat . Cara menghitung konsentrasi spora pada jamur a.medium cair . Cara mengisolasi bakteri dan jamur di alam: a. Berdasarkan susunan kimia .medium organik . Berdasarkan konsentrasi . metoda cawan gores b. metoda cawan tuang c. aseptik d.medium khusus c. diencerkan 10x = 105 b.medium sintetik . Penggunaan turbidimetri / nefelometri Menghitung kecepatan bakteri dalam larutan yang diberi cahaya Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik . Pengenceran [sel] = jumlah koloni pada cawan x pengenceran X = [sel] = 104. sterilisasi dengan uap panas 3. Berdasarkan fungsi .medium anorganik . penyaringan e.

You're Reading a Free Preview

Download
scribd
/*********** DO NOT ALTER ANYTHING BELOW THIS LINE ! ************/ var s_code=s.t();if(s_code)document.write(s_code)//-->