Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012

PEMBUATAN MEDIA PERTUMBUHAN MIKROBA DAN TEKNIK PEMINDAHAN SECARA ASEPTIK

I. PENDAHULUAN 1.1 Latar Belakang Setiap mikroorganisme melakukan metabolisme untuk tumbuh dan berkembang biak. Hal ini menyangkut nutrisi yang berasal dari lingkungan dan memproses nutrisi tersebut sesuai dengan kebutuhan. Nutrisi yang tersedia bagi mikroba dapat dijumpai di tanah, sampah, air, dan bahan makanan sehingga di tempat tersebut mikroba dapat tumbuh. Di laboratorium, mikroba memperoleh nutrisi dari medium yang merupakan campuran bahan untuk menumbuhkan mikroba tersebut. Medium merupakan suatu bahan yang terdiri dari campuran nutrien atau zat makanan yang digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme mikroba. Medium yang digunakan sesuai dengan kebutuhan mikroorganisme. Untuk dapat tumbuh dengan baik mikroorganisme membutuhkan nutrien yang meliputi air, sumber energi, sumber karbon, sumber akseptor elektron, sumber mineral, faktor pertumbuhan, dan sumber nitrogen. Dengan mengetahui sifat, kebutuhan, makanan dari mikroorganisme maka kita dapat membuat medium yang cocok untuk menumbuhkan mikroorganisme tersebut secara laboratorium. Pembiakan mikroorganisme dalam laboratorium memerlukan medium yang berisi zat hara serta lingkungan pertumbuhan yang sesuai dengan mikroorganisme. 1.2 Tujuan Adapun tujuan dari praktikum kali ini adalah 1. Mengetahui cara pembuatan media pertumbuhan bagi mikroba. 2. Memahami teknik pemindahan secara aseptik dan berbagai sifat mikroba. 3. Mengamati pertumbuhan mikroorganisme secara visual. 1.3 Aplikasi Adapun aplikasi dari praktikum ini yaitu : a. Dapat mengembangbiakkan mikroba. b. Dapat menumbuhkan dan memperbanyak mikroba pada organisme lain. c. Digunakan untuk biodiesel dan untuk fermentasi etanol.

Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik

Media semi-sintetik adalah media yang tersusun oleh campuran bahanbahan alami dan bahan-bahan sintetis. adalah media yang dibuat dari bahan-bahan yang diketahui dengan pasti yang biasanya banyak diproduksi oleh pabrik. terdiri dari media padat. TINJAUAN PUSTAKA Media pertumbuhan mikroorganisme adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat makanan (nutrisi) yang diperlukan mikroorganisme untuk pertumbuhannya. Agar Agar dapat diperoleh dalam bentuk batangan. pencairan dan pemadatan berkalikali atau sterilisasi yang terlalu lama dapat menurunkan kekuatan agar. Dengan media pertumbuhan dapat dilakukan isolat mikroorganisme menjadi kultur murni dan juga memanipulasi komposisi media pertumbuhannya. dan media cair. Jika dicampur dengan air dingin. Mikroorganisme memanfaatkan nutrisi media berupa molekulmolekul kecil yang dirakit untuk menyusun komponen sel. media untuk menghitung mikroba dan media khusus. Berdasarkan bentuknya.(1) Bahan yang sering digunakan dalam pembuatan media : 1. Kegunaannya adalah sebagai pemadat (gelling) yang pertama kali digunakan oleh Fraw & Walther Hesse untuk membuat media. granula atau bubuk dan terbuat dari beberapa jenis rumput laut. terdiri dari: a.Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012 II. 3. agar tidak akan larut. terdiri dari media penguji. media diperkaya. Media non sintetik/media alami. media selektif. media semi padat. adalah media yang dibuat dari bahanbahan alami yang susunan kimianya tidak diketahui dengan pasti. Untuk melarutkannya harus diasuk dan dipanasi. b. c. terutama pada pH yang asam Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik . Berdasarkan susunan kimia. media diferensial.(1) Media digolongkan menjadi: 1. Berdasarkan fungsi. 2. Media sintetik/media siap saji.

protein dan asam organik. sukrosa.5. Mg dan unsur pelikan/trace element. glukosa. fruktosa. Konsentrasi yang ditambahkan untuk analisis fermentasi adalah 0. agar mikroorganisme dapat tumbuh dan berkembangbiak di dalam media tersebut. limpa.1%. Sejumlah mikroba dapat menggunakan sumber N anorganik seperti urea 3. Sumber nitrogen mencakup asam amino. tegangan permukaan dan pH yang sesuai dengan kebutuhan mikroorganisme. dll. Dalam keadaan steril ( tidak ditumbuhi mikroorganisme lain ) 2. Mempunyai tekanan osmosis. 2. lactalbumin. N. yaitu: 1. 3. Karbohidrat Karbohidrat ditambahkan untuk memperkaya pembentukan asam amino dan gas dari karbohidrat. Vitamin-vitamin.Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012 2. (1) Media harus mengandung unsur-unsur yang diperlukan untuk metabolisme sel yaitu berupa unsur makro seperti C. darah. Peptone peptone adalah produk hidrolisis protein hewani atau nabati seperti otot. protein atau senyawa bernitrogen lain. unsur mikro seperti Fe. lemak.(1) Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik . casein. (1) Adapula persyaratan tertentu bagi media. Jasad heterotrof memerlukan sumber karbon organik antara lain dari karbohidrat. Jenis karbohidrat yang umumnya digunakan dalam amilum. Sumber karbon dan energi yang dapat diperoleh berupa senyawa organik atau anorganik sesuai dengan sifat mikrobanya. susu. 3. Harus mengandung unsur hara yang dibutuhkan untuk pertumbuhan dan perkembangan mikroorganisme. gelatin dan kedelai. galaktosa. H. liver. 1. 5. Yeast extract Yeast extract terbuat dari ragi pengembang roti atau pembuat alcohol. O. 4. plasenta dan daging sapi. Yeast extract mengandung asam amino yang lengkap & vitamin ( Bcomplex). manitol. P. Meat extract Meat extract mengandung basa organik terbuat dari otak.

Metode pour plate/cawan tuang Metode memindahkan mikroorganisme dengan cara meneteskan biakan bakteri kemudian menuangkan larutan nutrient. 5. yaitu : 1. dimana semua peralatan maupun media pertumbuhan yang akan digunakan pada teknik ini harus dalam keadaan steril/aseptik. 2. Metode streak/gores Metode memindahkan mikroorganisme dengan cara menggoreskan ujung jarum ose loop pada permukaan media. Liquid culture 6. : media padat dalam tabung reaksi. (1) Ada beberapa metode untuk memindahkan biakan murni dari satu wadah ke wadah yang lain secara aseptik. Plate culture 3.Biakan murni adalah biakan yang hanya terdiri dari satu spesies tunggal Sehingga untuk mencegah mikroorganisme lain yang tidak dikehendaki perlu digunakan teknik aseptik. 3. Metode spread/sebar Metode memindahkan mikroorganisme dengan cara meneteskan biakan bakteri lalu disebarkan dengan alat spread dari gelas bentuk L secara merata. Stap culture : berisi dua atau lebih spesies mikroorganisme. tetapi penanamannya dengan cara penusukan. (2) Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik . : media padat dalam petridish. : media padat dalam tabung reaksi. oleh karena itu mikroorganisme lain yang tidak dikehendaki dapat masuk kedalam biakan murni melalui aliran udara. Slant culture 4. Mixed culture 2. 4. kontak tangan yang tercemar. Metode tusuk Metode tusuk yaitu dengan dengan cara meneteskan atau menusukan ujung jarum ose yang didalamnya terdapat inokolum. (2) Ada beberapa macam media yang digunakan untuk inokulasi yaitu : 1. Shake culture : media cair dalam tabung reaksi.Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012 Mikroorganisme terdapat dimana-mana. kemudian dimasukkan ke dalam media. atau melalui tersentuhnya media atau permukaan tabung bagian dalam oleh benda yang belum disterilkan. : media cair dalam tabung reaksi yang penanamannya dikocok.

pepton. aerugenosa. dan mengisolasi jenis Lactobacillus dari seluruh jenis bahan. menumbuhkan. EMBA (Eosin Methylen Blue Agar) Media Eosin Methylene Blue mempunyai keistimewaan mengandung laktosa dan berfungsi untuk memilah mikroba yang memfermentasikan laktosa seperti S. 3. aureus. NA juga digunakan untuk pertumbuhan mayoritas dari mikroorganisme yang tidak selektif. Intinya sama dengan nutrient agar. 5. dan Shape (1960) untuk memperkaya. dan agar. makanan. Potato Dextrose Agar (PDA) PDA digunakan untuk menumbuhkan atau mengidentifikasi yeast dan kapang 7. dan Salmonella. 4. 6. VRBA (Violet Red Bile Agar) VRBA digunakan untuk perhitungan kelompok bakteri Enterobactericeae. Rogosa. dalam artian mikroorganisme heterotrof. dan produk susu. (3) Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik . Nutrient Agar Nutrien agar adalah medium umum untuk uji air dan produk dairy. P. yaitu : 1. sebagai kaldu pemerkaya (preenrichment broth) untuk Salmonellae dan dalam mempelajari fermentasi laktosa oleh bakteri pada umumnya.Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012 Beberapa media yang sering digunakan secara umum dalam mikrobiologi. 2. Lactose Broth Lactose broth digunakan sebagai media untuk mendeteksi kehadiran koliform dalam air. MRSA (deMann Rogosa Sharpe Agar) MRSA merupakan media yang diperkenalkan oleh De Mann. Nutrient Broth Nutrient broth merupakan media untuk mikroorganisme yang berbentuk cair. Media ini merupakan media sederhana yang dibuat dari ekstrak beef.

7. PROSEDUR PERCOBAAN 3. 4. 2. 7. Hot plate BAHAN 1. Erlenmeyer 11.Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012 III. 4. 9. 8. 6. 6. Ekstrak Daging Kentang Saccharomyces cereviceae E.Coli Aquadest Agar Dextrose : sumber protein : sumber karbohidrat : jamur yang akan dibiakkan : bakteri yang akan dibiakkan : pelarut : pemadat : sumber mineral dan carbon Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik . 5.1 Alat Dan Bahan ALAT 1. Autoclave Petridish Tabung reaksi Kapas dan kasa Alumunium foil Magnetic Stirer Kaca arloji Jarum ose Lampu spritus : pensteril alat dan media : media tempat pembiakan : tempat biakan mikroba : untuk menutup tabung reaksi : untuk menutup medium : pengaduk : wadah untuk menimbang bahan : memindahkan bakteri ke medium : membakar jarum : wadah : pengaduk : pemanas 10. 5. Spatula 12. 3. 3. 2.

Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012 3.5 g kentang ekstrak daging Disaring dengan kain kasa + 125 mL aquadest Diaduk sampai homogen dan mendidih medium panas Dituang 5 mL medium ke dalam tabung reaksi dan 10 mL ke dalam pentridish Disterilkan dengan autoclave selama 20 menit pada suhu 1200 C. Pembuatan Medium Nutrient Agar ( NA ) Miring 1. termasuk medium sisa.5 gram daging Dipotong kecil Dimasukkan ke dalam beaker gelas 250 mL + 125 mL aquadest Dipanaskan hingga mendidih Disiapkan erlenmeyer 250 mL berisi 3 g agar dan 2.2 Skema Kerja A. medium steril Tabung reaksi berisi 5 mL medium diletakkan pada posisi miring dalam entkas Medium 10 mL dituang dalam pentridish Dibiarkan dingin dan padat Medium Nutrient Agar ( NA ) Miring Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik .

termasuk medium sisa.Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012 B. medium steril Tabung reaksi berisi 5 mL medium diletakkan pada posisi miring dalam entkas Medium 10 mL dituang dalam pentridish Dibiarkan dingin dan padat Medium Potatoes Dextrose Agar (PDA) Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik . Pembuatan Medium Potatoes Dextrose Agar (PDA) 30 gram kentang Dipotong kecil Dimasukkan ke dalam beaker gelas 250 mL + 150 mL aquadest Dipanaskan hingga mendidih Disiapkan erlenmeyer 250 mL berisi 3 g agar dan 3 g dextrose ekstrak kentang Disaring dengan kain kasa + 125 mL aquadest Diaduk sampai homogen dan mendidih medium panas Dituang 5 mL medium ke dalam tabung reaksi dan 10 mL ke dalam pentridish Disterilkan dengan autoclave selama 20 menit pada suhu 1200 C.

sumbat dengan kelingking tangan kanan Media steril Angkat. sumbat dengan jari manis tangan kanan Panaskan mulut tabung ( tabung biakan ngan murni dan tabung medium steril ) Biakan mikroba Ambil dengan jarum ose dan di inokulasikan ke media steril dengan cara zig-zag Panaskan mulut tabung dan tutup tabung dengan jari kanan Perlakuan sama utuk tabung berikutnya Amati pertumbuhan koloni Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik .Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012 C. Teknik Pemindahan Mikroorganisme Secara Aseptik Tabung agar berisi biakan mikroba dan medium agar miring yang steril Pegang dengan tangan kiri Ambil jarum ose dengan tangan kanan Pijarkan jarum ose pada lampu spiritus hingga merah Biakan murni Diangkat.

tabung berisi biakan Pegang dengan tangan kanan Buka tutup dan panaskan Pijarkan jarum ose dan ambil biakan dengan cara zig-zag dan tutup pentridis Tabung berisi biakan 1 mL air steril.Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012 Medium pentridis. digoyangkan dan dituang dalam pentridis Tambah medium Inkubasi dalam enkas Amati pertumbuhan koloni Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik .

HASIL DAN PEMBAHASAN 4.Coli Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik . NA untuk bakteri E. PDA untuk bakteri Saccharomyces cereviceae B.1 Hasil Percobaan A.Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012 IV.

Coli. yaitu pembuatan media pertumbuhan mikroba dan teknik pemindahan secara aseptik. media yang digunakan adalah agar-agar . Dimana mikroba yang sudah di didapatkan hasil : 1. Pertumbuhan mikroorganisme pada biakan miring digunakan untuk mendapatkan biakan murni. Dimana mikroba tersebut diinkubasi selama beberapa hari yang dibuat pada medium dengan bentuk zig-zag. harus dilakukan dengan steril. Pada biakan miring. Sebelum menggunakan media. Sedangkan untuk pertumbuhan digunakan daging dan ekstrak kentang sebagai sumber protein dan karbohidrat bagi mikroba. Sedangkan pertumbuhan mikroorganisme pada media petridish digunakan untuk mengembangbiakkan mikroorganisme sehingga dapat diperoleh dalam jumlah yang lebih banyak Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik . Ini ditandai dengan terbentuknya mikroba pada medium yang berkelompok dan berkoloni. Begitu juga pemindahan secara aseptik.2 Pembahasan Pada praktikum kali ini pembuatan media pertumbuhan mikroba dan teknik pemindahan secara aseptik dilakukan pengamatan selama 3 hari. Bentuk zig-zag bertujuan memenuhi syarat aseptik dan juga bertujuan untuk memperpanjang jalur pertumbuhan mikroba sehingga mikroba yang tumbuh akan lebih banyak. NA disini berfungsi sebagai media pertumbuhan E. Ini bertujuan mikroba yang tidak diinginkan tidak ikut tumbuh. Agar-agar ini digunakan sebagai media semi padat. Pada praktikum ini.Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012 4. 2. media pertumbuhan padat lainnnya yaitu PDA (Potatoes Dextrose Agar) yang dbuat dari ekstrak kentang yang berfungsi sebagai sumber karbohidrat dan media untuk pertumbuhan Saccharomyches cereviceae. Pada media petridish didapatkan mikroba yang cukup baik pada NA dan sangat baik pada PDA (Potatoes Dextrose Agar). bakteri yang tumbuh kurang baik pada NA (Nutrient Agar) karena penggoresan yang kurang sempurna dan mungkin juga terkontaminasi oleh mikroba lainnya. NA (Nutrien Agar) dibuat dari ekstrak daging yang berguna sebagai sumber protein. Selain NA. terlebih dahulu disterilkan dalam autoclave selama 15 menit pada suhu 1210 C.

dapat disimpulkan sebagai berikut : a. b.Coli tidak tumbuh dengan baik. Mikroba yang tumbuh dengan baik jika berkelompok dan berkoloni.sedangkan pada NA bakteri E.Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012 V. yang di petridish maupun tabung reaksi . KESIMPULAN DAN SARAN 5. Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik . Peralatan dan bekerja harus dalam keadaan steril Sewaktu penuangan media ke dalam petridish. 5. b.2 Saran Untuk kelancaran praktiukum selanjutnya. disarankan sebagai berikut : a.1 Kesimpulan Dari praktikum yang telah dilakukan. Pada medium PDA jamur Saccharomyces cereviceae tumbuh dengan baik pada petridish dan tabung reaksi (biakan miring). usahakan cairan media menyebar merata menutupi permukaan petridish.

Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik . Jenis Media Pembuatan Pemindahan Mikroba. Dunia Mikro. Li.com. Partic. 2010. 2.scribd. Media Pertumbuhan Mikroorganisme. Surbakti. Inokulasi Mikroba. Universitas Padjadjaran : Jatinangor. Trianda. 3.Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012 DAFTAR PUSTAKA 1. 2008. www.

Penggunaan perhitungan petrats transtes [sel] = jumlah sel 25 kotak x volume kotak x pengenceran 1 kotak = 1 mm3 c.medium semipadat b.medium non sintetik 2. Jenis-jenis media pertumbuhan. Berdasarkan susunan kimia . Cara menghitung konsentrasi spora pada jamur a. aseptik d.medium sintetik . Penggunaan turbidimetri / nefelometri Menghitung kecepatan bakteri dalam larutan yang diberi cahaya Pembuatan Media Pertumbuhan Mikroba dan Teknik Pemindahan Secara Aseptik .medium padat . metoda cawan tuang c.Praktikum Biokimia Semester Ganjil Tahun 2011/2012 JAWABAN PERTANYAAN 1. sterilisasi dengan uap panas 3.medium cair . yaitu : a. diencerkan 10x = 105 b.medium selektif .medium anorganik . Berdasarkan fungsi .medium organik . Berdasarkan konsentrasi . metoda cawan gores b. Cara mengisolasi bakteri dan jamur di alam: a. Pengenceran [sel] = jumlah koloni pada cawan x pengenceran X = [sel] = 104. penyaringan e.medium diferensial .medium khusus c.medium kering .

Master your semester with Scribd & The New York Times

Special offer for students: Only $4.99/month.

Master your semester with Scribd & The New York Times

Cancel anytime.